實驗七 鞭毛染色及活菌運動性觀察課件_第1頁
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文檔簡介

1、實驗七 細菌鞭毛染色法一、實驗目的及要求 了解細菌鞭毛染色的原理，掌握鞭毛染色的方法。二、實驗原理細菌的鞭毛極纖細，直徑一般為0.10.2um，只有用電子顯微鏡才能觀察到。但是，如采用特殊的染色法，則在普通光學顯微鏡下也能看到它。鞭毛染色的基本原理是：即在染色前先用媒染劑處理，讓它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進行染色。常用的媒染劑由丹寧酸和氯化高鐵或鉀明礬等配制而成。 采用鞭毛染色法雖能觀察到鞭毛的形態(tài)、著生位置和數(shù)目，但此法既費時又麻煩。如果僅須了解某菌是否有鞭毛，可采用懸滴法或壓滴法直接在光學顯微鏡下檢查活細菌是否具有運動能力，以此來判斷細菌是否有鞭毛。此法較快速、簡便。懸滴法就是

2、將菌液滴加在潔凈的蓋玻片中央，在其周邊涂上凡士林，然后將它倒蓋在有凹槽的載玻片中央，即可放置在普通光學顯微鏡下觀察。壓滴法是將菌液滴在普通的載玻片上，然后蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。四、實驗方法（一）硝酸銀染色法1.清洗玻片 選擇光滑無裂痕的玻片，置洗衣粉過濾液中（洗衣粉煮沸后用濾紙過濾，以除去粗顆粒），煮沸20min。取出用清水沖洗，瀝干水后，置95%乙醇中浸泡，用時取出在火焰上燒去酒精。2.菌液的制備：菌齡較老的細菌容易失落鞭毛，所以在染色前應將待染細菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面上連續(xù)移接3-5代，以增強細菌的運動力。最后一代菌種放恒溫箱中培養(yǎng)1216h。然后，用接種環(huán)挑取斜面與冷凝水交接處的菌液數(shù)環(huán)，移至盛有12mL無菌水的試管中，使菌液呈輕度混濁。將該試管放在37恒溫箱中靜置10min（放置時間不宜太長，否則鞭毛會脫落），讓幼齡菌的鞭毛松展開。3.制片：吸取少量菌液滴在潔凈玻片的一端，立即將玻片傾斜，使菌液緩慢地流向另一端，用吸水紙吸去多余的菌液。涂片放空氣中自然干燥。4.染色滴加A液，染3-5min；用蒸餾水充分洗凈A液；用B液沖去殘水，再加B液于玻片上覆蓋染色數(shù)秒至1min，必要時在酒精燈微火加熱直至顯褐色，立即用蒸餾水

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