1、積雪草多糖提取的脫色工藝研究答 辯 人：彭吉莉班 級：化工062指導(dǎo)老師：陳曉偉 韋媛媛論文大綱課題的主要內(nèi)容2實驗方法與結(jié)果3結(jié)論與討論4致謝5課題的研究目的及意義1課題研究的目的和意義積雪草具有多種重要生物活性,是個值得開發(fā)利用的藥用植物資源。積雪草中含有的主要成分積雪草苷、羥基積雪草苷等三萜皂苷類具有抗腫瘤、抗菌等活性,已有較多文獻(xiàn)報道。由于植物多糖具有增強(qiáng)免疫、抗氧化、抑菌等藥理活性,而對積雪草多糖的文獻(xiàn)報道較少。因此本課題組主要對積雪草多糖的提取方法進(jìn)行考察。由于前期實驗表明,提取后的積雪草粗多糖中含有一定量的色素,影響多糖提取率,因此本實驗對不同脫色方法的效果進(jìn)行比較和篩選,使粗多

2、糖得到精制,為積雪草多糖的綜合利用提供新的途徑。課題的主要內(nèi)容1.對積雪草多糖不同脫色方法進(jìn)行考察,確定適合的積雪草多糖的最佳脫色方法2.對最佳脫色方法進(jìn)行單因素實驗3.在單因素篩選的基礎(chǔ)上進(jìn)行正交實驗，得出較優(yōu)的脫色工藝實驗方法與結(jié)果積雪草多糖的提取 稱取粉碎至20目的50.00g積雪草粉末。按1：5的料液比加入95%乙醇，回流脫脂5h，過濾，溶劑乙醇減壓蒸餾回收，將濾渣中溶劑揮干（先放置空氣中揮干，再放入烘箱中揮干）。加入料液比1：10和1：8的蒸餾水，用恒溫水浴鍋加熱保持溫度90回流提取兩次，每次1.5h，合并濾液，紗布過濾后濾紙抽濾，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮至原濾液的1/5左右。加入濃縮液體積

3、0.2倍的氯仿和0.04倍正丁醇混合振蕩15分鐘，4000r/min離心10分鐘如此重復(fù)4-6次去除蛋白，將上層清液混合向其緩緩加入4倍體積的無水乙醇，使含醇量達(dá)到80%，4過夜，抽濾，依次用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌沉淀2-3次。60干燥得粗多糖。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制圖3.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為：A=25.966C+0.0523，r=0.9994圖2表明：葡萄糖溶液濃度在0.0050.030mg/ml之間與吸光度A有良好的線性關(guān)系。色素的吸收波長對積雪草粗多糖浸提液進(jìn)行了可見光400600 nm掃描，結(jié)果見圖3.3，表明溶液吸光度在425490nm范圍內(nèi)吸光度較為穩(wěn)定，根據(jù)積雪草多糖溶液脫色前

4、后均為橙黃色，根據(jù)互補(bǔ)色原理主要吸收藍(lán)色波段（446-464nm）可見光，故綜合溶液的互補(bǔ)色考慮選擇450nm為檢測波長測定其吸收度。 積雪草多糖脫色方法考察 活性炭法脫色 取多糖樣品溶液50.00ml于燒杯中，加人2%活性炭，用檸檬酸調(diào)節(jié)pH至3.5，40水浴攪拌脫色20min，離心或過濾除去殘渣。過氧化氫法脫色 取多糖樣品溶液50.00ml于燒杯中，加入過氧化氫的用量是多糖體積的25，用1%NaOH或濃氨水調(diào)節(jié)pH至9.0、于60水浴中加熱攪拌3h，然后加熱去除過氧化氫。不溶性殼聚糖脫色 取多糖樣品溶液50.00ml于燒杯中，按3g/100ml加人不溶性殼聚糖，用檸檬酸調(diào)節(jié)pH至4.0，3

5、0水浴間歇攪拌脫色60min，離心或過濾除去殘渣。三種方法的結(jié)果與分析 不同脫色方法的結(jié)果 根據(jù)脫色前、脫色后多糖溶液在450nm處的吸光度計算脫色率，將脫色前后的多糖溶液經(jīng)苯酚-硫酸法顯色后，按標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測定490nm處的吸光度計算多糖保留率。結(jié)果見下表。 不溶性殼聚糖單因素實驗考察料液比對脫色效果的影響料液比選擇2.0：1、2.5：1、3.0：1、3.5：1、4.0：1這5個水平。分別固定脫色時間60min、脫色溫度30、脫色pH值4.0?？疾鞙囟葘γ撋Ч挠绊懨撋珳囟冗x擇20、25、30、35、40 這5個水平。分別固定料液比3.0：1、脫色時間60min、脫色pH值4.0?？疾靝

6、H對脫色效果的影響分別固定料液比3.0：1、脫色時間60min、脫色溫度30 這三個因素，脫色pH選擇3.0、3.5、4.0、4.5、5.0這5個水平。考察脫色時間對脫色效果的影響分別固定料液比3.0：1、脫色溫度30、調(diào)pH為4.0，吸附時間選擇30、45、60、75、90min這5個水平。考察溫度對脫色效果的影響的結(jié)果 由圖知在2035脫色率隨溫度的增大而增大，3540時是隨溫度的增大而減小，在2025多糖的脫色率和保留率變化不大，3540變化較大，綜合考慮溫度應(yīng)控制在2535。考察pH對脫色效果的影響結(jié)果 由圖知脫色率隨pH的增大而減小，但減小的幅度不大，在pH在3.54.5之間多糖的保

7、留率較大。綜合考慮脫色pH應(yīng)控制在3.54.5之間。正交實驗與結(jié)果因素水平表根據(jù)綜合平衡法分析，因素A（溫度）：對于脫色率和多糖保留率都是最次要的因素，從減少能源消耗考慮選擇A1；因素B（pH）：兩個指標(biāo)都是B3最佳；因素C（時間）：對于脫色率來說是主要因素，對多糖保留率來說是次要因素，所以選C3；因素D（料液比）：對于脫色率和多糖保留率都是最主要的因素，從經(jīng)濟(jì)節(jié)約的角度選D2所以最優(yōu)方案選A1B3C3D2。即溫度25，pH4.5，脫色時間60min，料液比為3.0：1。結(jié)論與討論不溶性殼聚糖法去除積雪草粗多糖中的色素用時短、操作簡單、效果佳，并且在此過程中對多糖保留率影響小。通過正交試驗得出該方法的最優(yōu)條件是：溫度25，pH4.5，脫色時間60min，料液比為3.0：1，脫色率達(dá)到64.24，多糖保留率為80.11。本次實驗脫色后的