1、芽胞桿菌屬Bacillus的檢驗(yàn)一群需氧、能產(chǎn)芽胞的革蘭氏陽性大桿菌。共40多種，其中對人畜致病的較少，僅炭疽芽胞桿菌(Bacillus anthracis)具強(qiáng)烈致病性，侵害草食動物及人，引起動物和人類炭疽病。類炭疽桿菌(形態(tài)與炭疽桿菌相似)是實(shí)驗(yàn)室常見的污染菌，偶爾也能致病。蠟狀芽胞桿菌(S. cereus)的某些菌株可產(chǎn)腸毒素，引致食物中毒；其他多為腐生菌，主要存在于土壤、水和灰塵中，如枯草芽孢桿菌(B. subtilis)。一、炭疽芽胞桿菌（B. anthracis）該菌俗稱炭疽桿菌，人畜共患病原體，在醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)學(xué)上都相當(dāng)重要，是引起人類、各種家畜和野生動物炭疽（Anthrax）的病原

2、 。（一）形態(tài)及染色特征G+大桿菌，長而粗大，菌體平直，兩端平截。長3.08.0m，寬1.01.5m；無鞭毛。在組織和血液中單在或短鏈狀，培養(yǎng)后形成竹節(jié)狀長鏈。該菌在組織或含血液培養(yǎng)基中可形成莢膜。有氧條件下形成芽孢，位于菌體中央，不膨出菌體。無鞭毛。體內(nèi)外培養(yǎng)有較大形態(tài)差異：（1）體內(nèi)（即病料中，如血液、組織）形態(tài) 單在或短鏈狀(一般約25個(gè))，似竹節(jié)狀； 形成莢膜；不形成芽胞； 相連的菌端平截或微凹，游離端鈍圓，本菌屬的其他細(xì)菌接頭鈍圓，如蠟狀芽胞桿菌。（2）體外（培養(yǎng)基）形態(tài)： 長鏈狀（幾十或上百個(gè)）； 形成橢圓形芽胞，位于菌體中央或近中央，直徑小于菌體； 普通培養(yǎng)基上不形成莢膜。（3）

3、炭疽桿菌特征形態(tài)： 慢性局部炭疽病料: 菌體形態(tài)常不典型，呈細(xì)長彎曲或捻轉(zhuǎn)的桿狀； 血瓊脂、血清瓊脂或碳酸氫鈉瓊脂上，1020%CO2條件下可形成莢膜； 病料腐敗后，菌體分解，但莢膜抗腐敗能力較強(qiáng)，莢膜仍可殘留，稱為“菌影”。 （二）培養(yǎng)特性 1. 需氧或兼性厭氧，最適生長溫度30-37，pH7.2-7.6，營養(yǎng)要求不高，普通培養(yǎng)基中生長良好。強(qiáng)毒株形成灰白色不透明、大而扁平、表面干燥；無毒或弱毒株形成稍小而隆起、表面較為光滑濕潤、邊緣比較整齊的光滑型菌落。 2. 血瓊脂：一般不溶血，個(gè)別菌株輕微溶血；而該屬其他成員多有明顯溶血；3. 液體肉湯培養(yǎng)基： 24h呈絮狀沉淀生長，上清透明清朗，不形

4、成菌膜和菌環(huán)；4.明膠穿刺培養(yǎng)，呈倒松樹狀，表面液化呈漏斗狀。5. 在含0.5IU/ml青霉素的培養(yǎng)基中，可形成串珠反應(yīng)，與其它需氧芽孢桿菌區(qū)別。當(dāng)青霉素加至10IU/mL時(shí)，炭疽桿菌生長受抑，不生長或微弱生長，而該屬其他細(xì)菌一般不被抑制。 串珠反應(yīng) ：在含青霉素0.5IU/ml的培養(yǎng)基中，幼齡炭疽桿菌因細(xì)胞壁的肽聚糖合成受到抑制，形成原生質(zhì)體相互連接成串 。（三）生化特性 生化試驗(yàn)不是炭疽桿菌的主要鑒定項(xiàng)目。可了解以下內(nèi)容： 分解葡萄糖， V.P陽性， 還原硝酸鹽，不產(chǎn)生吲哚、 H2S，H2O2酶陽性。(四) 抵抗力 1、繁殖體：抵抗力不強(qiáng)，同一般無芽孢桿菌。常用消毒劑均能于短時(shí)間內(nèi)將其殺死

5、。 2、芽胞體：抵抗力非常強(qiáng)，對熱、干燥等具有較強(qiáng)的抵抗力； 室溫干燥可存活十年，干燥背光處可存活40年以上。在動物皮毛上能活數(shù)年，混入泥土中可存活數(shù)年至數(shù)十年，每到春夏時(shí)期地面長出青草時(shí)，可將泥中的芽胞帶至地面，牛羊食入而受感染。 3、牧場一旦被芽胞感染，傳染性可保持20-30年。煮沸1h或干熱1403h可殺滅芽孢。炭疽桿菌的芽胞對碘敏感，1:2500碘液10min即可殺死芽胞。(五) 抗原結(jié)構(gòu) 1. 結(jié)構(gòu)抗原 (1) 莢膜抗原：多肽，僅見于有毒菌株，與毒力和抗吞噬有關(guān)。 (2) 菌體抗原：多糖，與細(xì)菌毒力無關(guān)。性質(zhì)穩(wěn)定，加熱煮沸甚至高壓蒸汽處理，抗原性不被破壞。在病畜皮毛或腐敗臟器中經(jīng)長時(shí)

6、間煮沸仍能與特異性抗體反應(yīng)形成環(huán)狀沉淀，稱為Ascoli 反應(yīng)。 (3) 芽胞抗原：由芽胞的外膜和皮質(zhì)組成，具免疫原性。2. 保護(hù)性抗原（PA） 是炭疽毒素（PA、LF、EF）的組成成分之一，具有免疫原性，能刺激機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體。 （六）致病性動物吃含本菌芽胞的飼料或青草腸出芽增殖血敗血癥，脾腫大發(fā)黑炭疽(病程短而急，數(shù)日死亡)。 1、易感性 （1）綿羊、牛、鹿最易感急性敗血性，尸僵不全、血凝不良、天然孔出血，臌氣；脾急劇腫脹至34倍； （2）馬屬、駱駝、豬、山羊次之多為慢性局部感染, 如咽部； （3）狗、貓及食肉動物抵抗力強(qiáng)多表現(xiàn)腸炭疽； （4）禽類通常無易感性； （5）人類：因侵入途徑不

7、同而出現(xiàn)不同癥狀。2、毒力因子（1）莢膜：炭疽桿菌的莢膜能抵抗宿主吞噬細(xì)胞的吞噬，有利于在機(jī)體內(nèi)生存、繁殖和擴(kuò)散。（2）炭疽毒素：主要由3種成分構(gòu)成。 水腫因子(edema factor，EF): 脂蛋白 致死因子(lethal factor，LF): 蛋白質(zhì) 保護(hù)性抗原(protective antigen，PA): 一種輔酶。 此3種成分單獨(dú)對動物無毒性。前2種成分混合注射家兔或豚鼠皮下可致皮膚水腫；后2種混合注射可致肺部出血水腫，并使豚鼠致死；3種混合注射可出現(xiàn)炭疽典型中毒癥狀。 炭疽毒素主要是增強(qiáng)微血管的通透性，改變血液循環(huán)動力學(xué)，血液呈高凝狀態(tài)，引起DIC和感染性休克。3、致病類型可

8、致人畜共患的急性、熱性、敗血性傳染病。所致疾病分皮膚、肺、腸和敗血性炭疽四種。（七）微生物學(xué)診斷 1、標(biāo)本采集 按不同病型采取標(biāo)本，動物尸體僅能割尾、耳或舌尖。一般常取水泡、膿皰內(nèi)容物、焦痂、咯痰、糞及血液、腦脊液等。檢驗(yàn)時(shí)必須注意：（1）病料鏡檢時(shí)一般有莢膜，如無莢膜則分離培養(yǎng)后接種實(shí)驗(yàn)動物再進(jìn)行形態(tài)檢查。 （2）注意與類似的細(xì)菌鑒別，如蠟狀芽胞桿菌等。 （3）對疑似炭疽死亡的家畜嚴(yán)禁剖檢，因其血液不凝，血濺流地面，血中細(xì)菌遇空氣即生成芽胞，芽胞在土壤中可存活數(shù)十年，造成該地區(qū)長期的疫源。如必須檢驗(yàn)時(shí)，只可取獸耳或尾，密封送檢，死獸焚毀或深埋。2. 細(xì)菌學(xué)檢查 （）鏡檢：大桿菌，兩端平截，竹

9、節(jié)狀 （）分離培養(yǎng)：用普通瓊脂或血瓊脂 （）純培養(yǎng): 鏡檢、串珠試驗(yàn)、生化試驗(yàn) （）動物試驗(yàn)：將檢驗(yàn)材料制成懸液或純培養(yǎng)物給小鼠注射，24-36h小鼠死于敗血癥。 3. 血清學(xué)檢查 抗原檢測 （）Ascoli沉淀反應(yīng) 將病獸皮革或尸體組織切碎，加水煮沸過濾，取濾液滴加于小管內(nèi)的免疫血清，室溫或37放置10min，如見兩液接觸面出現(xiàn)白色沉淀環(huán)即為陽性，表明濾液中有該菌的多糖抗原。此法可對腐敗尸體及皮革進(jìn)行追補(bǔ)診斷，但特異性不高，可出現(xiàn)假陽性。 （）間接血凝試驗(yàn) （）協(xié)同凝集試驗(yàn) （）串珠熒光抗體檢查 （）瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) 抗體檢查：比較恢復(fù)期和急性期血清特異性抗體升高情況，確診或流行病學(xué)調(diào)查。二、蠟

10、樣芽胞桿菌（B. cereus）在自然界分布廣泛,常存在于土壤、灰塵和污水中,植物和許多生、熟食品中常見。蠟樣芽孢桿菌在食品上于20以上的環(huán)境中放置,能迅速繁殖,并產(chǎn)生腸毒素。同時(shí),由于本菌不分解蛋白質(zhì),因此,食品在感官上無明顯變化,無異味,很容易誤食而發(fā)生中毒。（一）形態(tài)及染色特征革蘭氏陽性大桿菌，芽胞不突出菌體，菌體兩端較平整，多數(shù)呈鏈狀排列，多鞭毛，能動力。不形成莢膜,芽孢成橢圓形,位于菌體中央,芽孢發(fā)芽形成菌體后,芽孢衣迅速崩裂。DNA中的G+C含量為31.7%40.1%。引起食物中毒的菌株多為周鞭毛,有動力。（二）培養(yǎng)特性 1、需氧，最適生長30-32。2、在肉湯中混濁生長，有菌膜或

11、壁環(huán)，振搖易乳化。3、在普通瓊脂平板上，菌落灰白色,不透明，邊緣不整齊，表面粗糙，呈毛玻璃狀或白蠟狀。 4、在血瓊脂平板上，菌落呈淺灰色，不透明，表面粗糙似白色毛玻璃狀，有草綠色溶血環(huán)。5、在MYP（甘露醇-卵黃多粘菌素）平板上，菌落呈粉紅色,具有白色混濁環(huán)。（三）生化特性1、分解葡萄糖、麥芽糖、淀粉、蔗糖、水楊苷，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。2、不分解乳糖、甘露醇、阿拉伯膠糖、鼠李糖、木糖、肌醇、山梨醇、側(cè)金盞花醇、木膠糖。3、靛基質(zhì)試驗(yàn)陽性（+），硫化氫試驗(yàn)為陰性H2S（-），尿素酶陰性（-），V-P試驗(yàn)陽性（+），KCN試驗(yàn)陽性（+），檸檬酸鹽及卵磷脂酶陽性（+）。還原美藍(lán),紫乳迅速胨化。能24h液化明膠。(四) 抵抗力1、耐熱；游離芽孢能耐受10