食品衛(wèi)生微生物學檢驗

大腸肝菌O157：H7/NM檢驗

GB/T4789.36-2008曾靜北京出入境檢驗檢疫局2009.3.20大腸肝菌O157：H7/NM檢驗

GB/T4789.36—2008一、采標情況二、適用范圍三、大腸肝菌O157：H7/NM四、操作過程大腸肝菌O157：H7/NM檢驗

GB/T4789.36—2008一、采標情況第一法：常規(guī)培養(yǎng)法修改采用美國FDA第4a章2002與FDA方法的區(qū)別：增菌培養(yǎng)基以mEC+n肉湯取代了EEB肉湯增加了CHROMagarO157顯色培養(yǎng)基大腸肝菌O157：H7/NM檢驗

GB/T4789.36—2008一、采標情況

第二法：免疫磁珠捕獲法修改采用北歐食品分析委員會（NMKL）No.164，1999與該標準的區(qū)別:增菌培養(yǎng)基以mEC+n肉湯取代了EEB肉湯增加了CHROMagarO157顯色培養(yǎng)基增菌培養(yǎng)溫度由41.5℃±0.5℃修改為36℃±1℃大腸肝菌O157：H7/NM檢驗

GB/T4789.36—2008一、采標情況第三法：全自動酶聯(lián)熒光免疫分析儀篩選法修改采用AOAC-RIPerformanceTestedMethodsVIDASE.coliO157(ECO)Test,No.010502與該方法的主要區(qū)別：增菌培養(yǎng)基以mEC+n肉湯取代了mTSB肉湯大腸肝菌O157：H7/NM檢驗

GB/T4789.36—2008三、適用范圍適用于各類食品中和食品中毒樣品中大腸埃希氏菌O157：H7和O157：NM的檢驗。大腸肝菌O157：H7/NM介紹腸出血性大腸桿菌（EHEC）是能引起人的出血性腹瀉和腸炎的一群大腸埃希氏菌。以O157:H7血清型為代表菌株。大腸肝菌O157：H7/NM介紹生物學特征EHEC除其代表菌株O157:H7外，還包括O157:NM、O26:H11、O111:H8、O125:NM、O121:H19、O45:H2、O4:NM、O145:NM、O5:NM、O91:H21、O103:H2、O113:H2等血清型的部分菌株。血清學鑒定包括O抗原和H抗原的鑒定。前者可使用玻片凝集試驗或膠乳凝集試驗；后者則應先進行動力試驗，動力活潑者再進行玻片和試管凝集試驗。

EHECO157:H7的另一個顯著特征是可產生大量的Vero毒素（VT），也稱作類志賀氏毒素（SLT），是EHEC的主要致病因子。Vero毒素按免疫原性等方面的不同可分為VT1和VT2。該毒素有一個A亞單位和5~6個B亞單位組成。B亞單位與宿主腸壁細胞糖脂受體結合，具有毒素活性的A亞單位進入細胞，改變60s核糖體的組分，干擾蛋白質的合成。編碼VT的基因位于噬菌體上，可缺失而不產生VT。大腸肝菌O157：H7/NM介紹流行病學

1982年美國首次報道了由EHECO157:H7引起的出血性腸炎暴發(fā)。此后，世界各地陸續(xù)報道了該菌引起的感染，并有上升趨勢。1996年在日本發(fā)生的EHECO157:H7的暴發(fā)流行，引起出血性腹瀉，先后波及30多個都、府、縣，感染近萬人，并造成12人死亡，引起了全世界的關注。此外，美國、加拿大、瑞典、澳大利亞、英國的蘇格蘭和威爾士等國家和地區(qū)也相繼報道了EHEC的散發(fā)性感染和暴發(fā)流行。日本、加拿大及瑞士等國已將EHECO157:H7列為必須報告的傳染病，予以高度重視。我國于1988年首次分離到EHECO157:H7，從已有的流行病調查資料來看，我國亦存在EHEC的散發(fā)病例，但尚未有暴發(fā)流行的報道。EHECO157:H7引起的感染有明顯的季節(jié)性，多發(fā)生于夏秋兩季，7-8月為發(fā)病高峰。在地區(qū)分布上，多發(fā)生于發(fā)達國家，主要以散發(fā)性感染為主。在年齡分布上，兒童與老年人的發(fā)病率明顯高于其他年齡組。最易分離到O157:H7的年齡為5-9歲（0.9%）和50-59歲（0.89%）。大腸肝菌O157：H7/NM介紹農場動物，尤其是反芻動物，構成EHECO157:H7在世界范圍內的主要貯存宿主。

O157:H7在牛中的流行報告范圍為0.1-16%；羊、豬、雞、馬、鹿、鴿子、海鷗等動物均可能為EHEC的攜帶者。

EHEC的感染可形成直接傳播（動物→人，人→人），也可以通過間接傳播（食物、水源→人）。食源性的EHEC感染中，牛肉、生奶、雞肉及其制品，蔬菜、水果及其制品等均可能受其污染。其中，牛肉是最主要的傳播載體。

EHECO157:H7的感染劑量極低。潛伏期為3-10天，病程2-9天。通常是突然發(fā)生劇烈腹痛和水樣腹瀉，數(shù)天后出現(xiàn)出血性腹瀉，可發(fā)熱或不發(fā)熱。嚴重者可導致死亡。大腸肝菌O157：H7/NM檢驗

GB/T4789.36—2008四、操作過程5.1增菌25g樣品于225mLmEC+n增菌液中，均質，于36℃±1℃，培養(yǎng)18-24h,同時加陽性和陰性對照;5.2分離劃線接種CT-SMAC和CHROMagarO157弧菌顯色培養(yǎng)基，36℃±1℃，培養(yǎng)18-24h

大腸肝菌O157：H7/NM檢驗

GB/T4789.36—2008四、操作過程5.2分離

CT-SMAC（山梨醇麥康凱瓊脂基礎）顯色培養(yǎng)基不發(fā)酵山梨醇的菌落為圓形、光滑、較小的無色菌落，中心呈現(xiàn)較暗的灰褐色；發(fā)酵山梨醇的菌落為紅色CHROMagarO157弧菌顯色培養(yǎng)基圓形、較小的菌落，中心呈淡紫色-紫紅色，邊緣為無色或淺灰色CHROMagarO157弧菌顯色培養(yǎng)基O157CT-SMAC顯色培養(yǎng)基bioMérieuxO157:H7IDAgar大腸肝菌O157：H7/NM檢驗

GB/T4789.36