僅供個(gè)人參考Forpersonalonlyinstudyresearch;notforcommercial一原蛋濃度測(cè)定試劑BCAProteinAssay是據(jù)目前世界上最常用蛋白濃度檢測(cè)方法之一BCA法制而成，實(shí)現(xiàn)了蛋白濃度測(cè)定的簡(jiǎn)單，高穩(wěn)定性，高靈敏度和高兼容性。檢測(cè)濃度下限達(dá)到25微克毫升最小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5微待測(cè)樣品體積為1～微。二試盒組份組份Cat:KGPBCA（assay酶1mL比杯）蛋標(biāo)準(zhǔn)溶液5μg/）mLBCA試劑25mL×2BCA試劑B三操步驟A酶標(biāo)操標(biāo)曲線的繪制一塊酶標(biāo)板按照下表加入試劑孔234蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液）2481220去離子水）2019181612對(duì)應(yīng)蛋白含量）00.51.02.04.06.08.010.0孔號(hào)蛋白質(zhì)

00

11

22

34

48

512

616

720溶液（）去離子20

19

18

16

12

8

4

0水（）相蛋0

白含量根樣品數(shù)量，50體BCA試劑加1體積BCA試（）制適量工作液，充分混勻；各加入工液；把標(biāo)板放在振器上振蕩30sec℃放置30分，然后在562nm下色測(cè)定。以蛋白含量（）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪標(biāo)準(zhǔn)曲線；稀待測(cè)樣品至適濃度，使樣品稀釋液總體積為20μL，加入BCA工液200μL，分混勻℃放置30分后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號(hào)管做比，在562nm波下比色，記錄吸光值；根所測(cè)樣品的光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白含量以品稀釋液總體積（μL以品稀釋倍數(shù)即為樣品實(shí)際濃度（單位μg/B．分光計(jì)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制管照下表加入試劑孔01345蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶μL）5104080100去子水（）100959080604020對(duì)蛋白含量）02.55.010.020.030.040.0根據(jù)樣品數(shù)量按50體積BCA試劑A加1體BCA試（配適量工作液，充分混勻；各管加入1000μLBCA工液；各管充分混勻，℃放置30分鐘，然后在562nm下色測(cè)定。以蛋白含量μg）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線；稀釋待測(cè)樣品至適濃度，樣品稀釋液總體積為，入BCA工作液1000，充分混勻，℃置30分后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號(hào)做參比，在562nm波下比色，記錄吸光值；不得用于商業(yè)用途

僅供個(gè)人參考根據(jù)所測(cè)樣品的光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白含量以品稀釋液總體積100μL以品稀釋倍數(shù)即為樣品實(shí)際濃度（單位：四注事項(xiàng)配制好的混合工作液室溫24小內(nèi)穩(wěn)定。加入BCA工液后，也可以在溫放置2小時(shí)，或60℃放置30分鐘。法定蛋白濃度時(shí)，吸光度會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)不斷加深。并且顯色反應(yīng)會(huì)因溫度升高加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或延長(zhǎng)孵育時(shí)間。待測(cè)樣品濃度在～微克毫升濃度范圍內(nèi)有較好的線性關(guān)系。BCA法定蛋白濃度不受絕大分樣品中的化學(xué)物質(zhì)的影響，可以兼容樣品中高達(dá)的的Triton5%的Tween20,60,。受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低10mM，無，硫蘇糖醇低于1mMβ巰乙醇低于1mM.不用BCA法建使用Bradford蛋濃度測(cè)定試劑盒。操作時(shí)要帶手套五、儲(chǔ)存BCA試A和BCA試劑B室保，蛋白標(biāo)準(zhǔn)℃凍存。不得用于商業(yè)用途

僅供個(gè)人參考僅供個(gè)用學(xué)習(xí)、究不得用商業(yè)用。Forpersonaluseonlyinstudyandresearch;notforcommercialuse.Nurfürdenpers?nlichenfürStudien,Forschung,zukommerziellenZweckenverwendetwerden.Pourl'étudeetrechercheuniquementàdesfinspersonnelles;pasàdesfinscommerciales.толькдлялюдей,которые