ICS65.020.20CCSICS65.020.20CCSB05內(nèi)蒙古自治區(qū)地方標準DB15/T2484—2021胡蘿卜小孢子培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程Technicalcodeofpracticeformicrosporecultureofcarrot2021-12-252021-12-252022-01-25內(nèi)蒙古自治區(qū)市場監(jiān)督管理局發(fā)布前 言GB/T《標準化工作導則第1本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧廳提出。本文件由內(nèi)蒙古自治區(qū)果蔬標準化技術(shù)委員會（SAM/TC25）歸口。本文件起草單位：內(nèi)蒙古自治區(qū)農(nóng)牧業(yè)科學院。本文件主要起草人：王葆生、陳源閩、劉曉蕊、廉勇、劉湘萍、張艷萍、朱春俠。胡蘿卜小孢子培養(yǎng)技術(shù)規(guī)程范圍本文件規(guī)定了胡蘿卜小孢子培養(yǎng)技術(shù)的操作流程。本文件適用于胡蘿卜的小孢子培養(yǎng)。（GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法NY/T2306花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程下列術(shù)語和定義適用于本文件。下列術(shù)語和定義適用于本文件。小孢子microspore高等植物生活史中雄配子體發(fā)育過程中短暫而重要的階段，是減數(shù)分裂后四分體釋放出的單倍性單細胞。小孢子培養(yǎng)microsporeculture單倍體haploid體細胞中含有本物種配子染色體數(shù)目的個體。4試劑超純水應符合GB/T6682中規(guī)定的三級超純水。藥品消毒試劑：乙醇，氯化汞。無機試劑：硝酸銨，硝酸鉀，硫酸銨，氯化鈣、硝酸鈣，硫酸鎂，磷酸二氫鉀，磷酸二氫鈉，碘化鉀，硼酸，硫酸錳，硫酸鋅，鉬酸鈉，硫酸銅，氯化鈷，硫酸亞鐵，EDTA二鈉鹽。有機試劑：肌醇，煙酸，鹽酸吡哆醇、鹽酸硫胺素、甘氨酸，葉酸，生物素，谷氨酰胺，絲氨酸，谷胱甘肽。生長調(diào)節(jié)劑：2,4-D，6-BA。其他試劑：瓊脂，活性炭，蔗糖。所有藥品等級均為分析純。B5、NLN、MS和1/2MS。按培pH值至ANY/T230655℃～60采樣15d～25外植體消毒1075、0.14min小孢子分離400mL700r/min3min1mL1×105個·mL-12ml誘導胚狀體將培養(yǎng)皿放入恒溫培養(yǎng)箱中33℃下暗培養(yǎng)2d，然后25℃下暗培養(yǎng)50d～120d至胚狀體產(chǎn)生。胚狀體分化1500lx，16h·d-126302～31500lx，16h·d-126℃，培養(yǎng)至煉苗與移栽將培養(yǎng)瓶放置于日光溫室中，打開瓶蓋，加水至培養(yǎng)基上1cm，煉苗3d，然后將根部培養(yǎng)基清洗干凈，栽種于裝有消毒育苗基質(zhì)的營養(yǎng)缽中，澆水后用塑料袋覆蓋保濕，7d后取掉塑料袋。溫度白天控制在25℃±3℃，夜晚12℃±3℃。取幼苗根尖，采用根尖壓片法進行壓片，在顯微鏡下觀察染色體數(shù)目，當再生植株染色體數(shù)目為9條時，證明該植株為單倍體。附錄A（）A.1。表A.1商品基本培養(yǎng)基成分及用量表單位為毫克每升培養(yǎng)基成分分離培養(yǎng)基B5誘導培養(yǎng)基NLN分化培養(yǎng)基MS生根培養(yǎng)基1/2MSKNO325001251900950NH4NO3001650825(NH4)2SO4134000CaCl2·2H2O1500440220Ca(NO3)2·4H2O050000MgSO4122.0961.0418090KH2PO4012517085NaH2PO4130.44000MnSO4·H2O1018.9422.322.3H3BO33106.26.2ZnSO4·7H2O2108.68.6Na2MoO4·2H2O0.250.250.250.25CuSO4·5H2O0.0250.0250.0250.025CoCl2·6H2O0.0250.0250.0250.025KI0.7500.830.83FeSO4·7H2O27.827.827.827.8Na2EDTA·2H2O37.337.337.337.3肌醇100100100100鹽酸硫胺素100.50.10.1鹽酸吡哆醇10.50.50.5煙酸150.50.5甘氨酸0222葉酸00.500生物素00.0500L-谷氨酰胺080000L-絲氨酸010000谷胱甘肽03000A.2。表A.2培養(yǎng)基其它添加物成分及用量表單位為克每升