PAGE..標準操作程序項目甲型肝炎病毒IgM檢測的標準操作程序方法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號CHDEYY-JYK-MY-001文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期XX市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室甲型肝炎病毒IgM檢測的標準操作程序WHDRYY-JYK-MY-001共2頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)專業(yè)主管、科主任批準簽字。[標本的采取和保存]采靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]采用兔抗-人IgMu鏈包被反應被,加入待測標本,同時加入HAVAg,抗HAV-HRP,如待測標本中含有抗-HAV-IgM時,就能與包被兔抗-人IgMu鏈結(jié)合,并且與HAVAg,抗-HAV-HRP結(jié)合成復合物,加TMB底物產(chǎn)生顯色反應,反之則無顯色反應。[操作步驟]將待測標本用生理鹽水作〔1：1000稀釋,每孔加入稀釋標本100ul,設陰、陽性對照各2空,每孔加入陰性對照〔或陽性對照100ul〔或2滴,并設空白對照一孔,封板,置37度孵育20分鐘。洗板機洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。手工洗板：棄去孔內(nèi)液體,洗滌液注滿各空,靜置5秒,甩干,重復三次后拍干。每孔加入HAVAg30ul〔或一滴,酶結(jié)合物50ul〔或一滴,〔空白對照孔不加,充分混勻,封板,置37度孵育20分鐘。洗板機洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。手工洗板：棄去孔內(nèi)液體,洗滌液注滿各空,靜置5秒,甩干,重復三次后拍干。每孔加顯色劑A液、B液各50ul〔或一滴,充分混勻,封板,置37度孵育10分鐘。每孔加入終止液50ul〔或一滴,混勻。用酶標儀讀數(shù),取波長450nm〔建議使用雙波長的酶標儀比色,參考波長630nm,先用空白孔校零,然后讀取各孔OD值。[結(jié)果判斷]樣品OD值除以陰性對照平均OD值大于或等于2.1判斷為陽性,否則為陰性陰性對照OD值低于0.05作0.05計算,高于0.05按實際OD值計算[臨床意義]血清中HAV—IgM在亞臨床期即已出現(xiàn),其滴度在感染后3個月維持在1000以上,早被公認為早期診斷甲型肝炎的依據(jù)。[注意事項]試劑使用前應搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加,注意均勻用力。從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試,余者應及時封存,置冰箱內(nèi)儲藏備用。洗板時所用的洗水紙請勿反復。不同批號試劑請勿通用。結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。實驗室名稱項目編號制定日期XX市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室甲型肝炎病毒IgM檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-001共2頁第2頁2005-01-01封片不能重復使用。用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項目乙肝表面抗原檢測的標準操作程序方法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-002文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期XX市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝表面抗原檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-002共2頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]雙抗體夾心法測HBsAg：抗S包被反應板,加入待測血清后,再加入酶標抗S,加底物顯色為陽性,證明樣本中含被測物,含量與顯色程度成正比。[操作步驟]實驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒,在室溫下平衡30分鐘,同時將濃縮洗滌液作1：20稀釋。加待測標本：加入待測標本每孔0.05毫升,并設陽性對照2孔,陰性對照2孔,空白對照1孔。加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升,空白對照孔不加,充分混勻,置37℃孵育30分鐘。洗板：手工洗板：棄去反應板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔,靜置5~10秒,棄去孔內(nèi)洗滌液拍干,如此反復5次,拍干。洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板,最后拍干。加顯色劑：先加顯色劑A,每孔0.05毫升；再加顯色劑B,每孔0.05毫升；充分混勻,放置37℃避光孵育15分鐘。終止反應：每孔加入終止液0.05毫升,混勻。測定：用酶標儀讀數(shù),可選擇波長450nm〔以空白孔校零或雙波長450/630nm,讀取各孔OD值。[結(jié)果判斷]Cutoff值計算：COV=陰性對照平均OD值*2.1標本OD值大于COV為陽性,標本OD值小于COV為陰性注：陰性對照OD值低于0.05按0.05計算,高于0.05按實際OD值計算。[臨床意義]HbsAg在感染早期出現(xiàn)于患者血循環(huán)中,可持續(xù)數(shù)月,數(shù)年乃至終生,是診斷HBV感染最常用的指標。但所謂HBV感染的"窗口期",HbsAg可以陰性,而抗HBc等其他HBV血清標志物則可陽性。[注意事項]1試劑使用前應搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加,注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試,余者應及時封存,置冰箱內(nèi)儲藏備用。3洗板時所用的洗水紙請勿反復。實驗室名稱項目編號制定日期XX市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝表面抗原檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-002共2頁第2頁2005-01-014不同批號試劑請勿通用。5結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6封片不能重復使用。7用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項目乙肝表面抗體檢測的標準操作程序方法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-003文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期XX市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝表面抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-003共2頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]雙抗原夾心一步法測HbsAb：S抗原反應包被板,加入待測血清后,再加入酶標抗S,加底物顯色為陽性,證明樣品中含被測物,含量與顯色程度成正比。[操作步驟]實驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒,在室溫下平衡30分鐘,同時將濃縮洗滌液作1：20稀釋。加待測標本：加入待測標本每孔0.05毫升,并設陽性對照2孔,陰性對照2孔,空白對照1孔。加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升,空白對照孔不加,充分混勻,置37℃孵育30分鐘。洗板：手工洗板：棄去反應板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔,靜置5~10秒,棄去孔內(nèi)洗滌液拍干,如此反復5次,拍干。洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板,最后拍干。加顯色劑：先加顯色劑A,每孔0.05毫升；再加顯色劑B,每孔0.05毫升；充分混勻,放置37℃避光孵育15分鐘。終止反應：每孔加入終止液0.05毫升,混勻。測定：用酶標儀讀數(shù),可選擇波長450nm〔以空白孔校零或雙波長450/630nm,讀取各孔OD值。[結(jié)果判斷]Cutoff值計算：COV=陰性對照平均OD值*2.1標本OD值大于COV為陽性,標本OD值小于COV為陰性注：陰性對照OD值低于0.05按0.05計算,高于0.05按實際OD值計算。[臨床意義]抗—HBs為HBV的中和抗體,有清除HBV,防止在感染的作用,抗—HBs一般出現(xiàn)于乙肝患者恢復期,提示感染已終止。此外,注射過乙肝疫苗的人,抗—HBs陽性。[注意事項]1試劑使用前應搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加,注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試,余者應及時封存,置冰箱內(nèi)儲藏備用。3洗板時所用的洗水紙請勿反復。4不同批號試劑請勿通用。實驗室名稱項目編號制定日期XX市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝表面抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-003共2頁第2頁2005-01-015結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6封片不能重復使用。7用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項目乙肝E抗原檢測的標準操作程序方法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-004文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期XX市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝E抗原檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-004共2頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]雙抗體夾心法測HbeAg：抗e包被反應板,加入待測血清后,再加入酶標抗e,加底物顯色為陽性,證明樣本中含被測物,含量與顯色程度成正比。[操作步驟]實驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒,在室溫下平衡30分鐘,同時將濃縮洗滌液作1：20稀釋。加待測標本：加入待測標本每孔0.05毫升,并設陽性對照2孔,陰性對照2孔,空白對照1孔。加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升空白對照孔不加,充分混勻,置37℃孵育30分鐘。洗板：手工洗板：棄去反應板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔,靜置5~10秒,棄去孔內(nèi)洗滌液拍干,如此反復5次,拍干。洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板,最后拍干。加顯色劑：先加顯色劑A,每孔0.05毫升；再加顯色劑B,每孔0.05毫升；充分混勻,放置37℃避光孵育15分鐘。終止反應：每孔加入終止液0.05毫升,混勻。測定：用酶標儀讀數(shù),可選擇波長450nm〔以空白孔校零或雙波長450/630nm,讀取各孔OD值。[結(jié)果判斷]Cutoff值計算：COV=陰性對照平均OD值*2.1標本OD值大于COV為陽性,標本OD值小于COV為陰性注：陰性對照OD值低于0.05按0.05計算,高于0.05按實際OD值計算。[臨床意義]HBeAg是HBV的核心部分,故一般認為HBeAg陽性是具有傳染性的標志,在乙肝潛伏期乃至整個病程中,HBeAg均可檢出?？笻Be是HBeAg的相應抗體。一般認為HbeAg消失和抗HBe出現(xiàn)是病情趨向好轉(zhuǎn)的征象。但并不意味著HBVDNA停止復制,或傳染性消失。[注意事項]1．試劑使用前應搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加,注意均勻用力。2．從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試,余者應及時封存,置冰箱內(nèi)儲藏備用。3．洗板時所用的洗水紙請勿反復。實驗室名稱項目編號制定日期XX市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝E抗原檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-004共2頁第2頁2005-01-014．不同批號試劑請勿通用。5．結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6．封片不能重復使用。7．用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項目乙肝E抗體檢測的標準操作程序方法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-005文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期XX市第一人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝E抗體檢測的標準操作程序WDYYY-JYK-MY-005共2頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]競爭抑制一步法測HBeAb：抗e包被反應板,加入待測血清后,加入中和e抗原,再加入酶標抗e,加底物不顯色的為陽性,證明樣本含被測物,含量與顯色程度成反比。[操作步驟]驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒,在室溫下平衡30分鐘,同時將濃縮洗滌液作1：20稀釋。加待測標本：加入待測標本每孔0.05毫升,并設陽性對照2孔,陰性對照2孔,空白對照1孔。加中和試劑：每孔0.05毫升,空白對照孔不加。加酶結(jié)合物：每孔0.05毫升空白對照孔不加,充分混勻,置37℃孵育30分鐘。洗板：手工洗板：棄去反應板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔,靜置5~10秒,棄去孔內(nèi)洗滌液拍干,如此反復5次,拍干。洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板,最后拍干。加顯色劑：先加顯色劑A,每孔0.05毫升；再加顯色劑B,每孔0.05毫升；充分混勻,放置37℃避光孵育15分鐘。終止反應：每孔加入終止液0.05毫升,混勻。測定：用酶標儀讀數(shù),可選擇波長450nm〔以空白孔校零或雙波長450/630nm,讀取各孔OD值。[結(jié)果判斷]Cutoff值計算：COV=陰性對照平均OD值*0.3標本OD值大于或等于COV為陰性,標本OD值小于COV為陽性注：非原倍血清樣品〔稀釋血清、質(zhì)控血清COV=陰性對照*0.5[臨床意義]抗HBe是HBeAg的相應抗體。一般認為HbeAg消失和抗HBe出現(xiàn)是病情趨向好轉(zhuǎn)的征象。但并不意味著HBVDNA停止復制,或傳染性消失。[注意事項]1試劑使用前應搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加,注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試,余者應及時封存,置冰箱內(nèi)儲藏備用。3洗板時所用的洗水紙請勿反復。實驗室名稱項目編號制定日期XX市第二人民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝E抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-005共2頁第2頁2005-01-014不同批號試劑請勿通用。5結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6封片不能重復使用。7用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項目乙肝核心抗體檢測的標準操作程序方法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-006文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝核心抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-006共2頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]競爭抑制一步法測HBcAb：抗c包被反應板,加入待測血清后,加入中和c抗原,再加入酶標抗抗c,加底物不顯色的為陽性,證明樣本含被測物,含量與顯色程度成反比。[操作步驟]實驗準備：從冷藏環(huán)境中取出試劑盒,在室溫下平衡30分鐘,同時將濃縮洗滌液作1：20稀釋。加待測標本：加入待測標本每孔0.05毫升,并設陽性對照2孔,陰性對照2孔,空白對照1孔。11：30稀釋血清〔血漿檢測結(jié)果代表臨床意義,待檢標本可用稀釋后的洗滌液加以稀釋2原倍血清〔血漿檢測結(jié)果代表流行病學意義。酶結(jié)合物：每孔0.05毫升〔抗—HBc1：30稀釋血清代表臨床意義,可用稀釋后的洗滌液加以稀釋；原倍血清代表流行病學意義,空白對照孔不加,充分混勻,置37℃孵育30分鐘。洗板：手工洗板：棄去反應板條孔內(nèi)液體拍干；用洗滌液注滿每孔,靜置5~10秒,棄去孔內(nèi)洗滌液拍干,如此反復5次,拍干。洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板,最后拍干。加顯色劑：先加顯色劑A,每孔0.05毫升；再加顯色劑B,每孔0.05毫升；充分混勻,放置37℃避光孵育15分鐘。終止反應：每孔加入終止液0.05毫升,混勻。測定：用酶標儀讀數(shù),可選擇波長450nm〔以空白孔校零或雙波長450/630nm,讀取各孔OD值。[結(jié)果判斷]Cutoff值計算：原倍血清COV=陰性對照平均OD值*0.31：30稀釋血清COV=陰性對照平均OD值*0.5標本OD值大于或等于COV為陰性,標本OD值小于COV為陽性。[臨床意義]抗HBc是HBeAg的相應抗體,也是HBV感染后血清中最早出現(xiàn)的HBV的標志性抗體。持續(xù)時間長,甚至終生存在。幾乎所有個體在感染HBV后都能產(chǎn)生抗HBc,故它是乙肝流行病學調(diào)查的良好指標。在HBV感染的"窗口期"抗HBc常是唯一可測出的HBV血清標志物。[注意事項]實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝核心抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-006共2頁第2頁2005-01-011試劑使用前應搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加,注意均勻用力。2從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試,余者應及時封存,置冰箱內(nèi)儲藏備用。3洗板時所用的洗水紙請勿反復。4不同批號試劑請勿通用。5結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。6封片不能重復使用。7用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項目乙肝病毒Pre-S1抗原檢測的標準操作程序方法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-007文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室乙肝病毒Pre-S1抗原檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-007共1頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]用乙肝病毒PreS1蛋白抗體和抗HBS分別用作酶標記抗體和包被抗體。采用ELISA雙抗體夾心一步法檢測標本中的乙肝病毒PreS1蛋白。[操作步驟]將包被條固定于支架并編上序號。設陽性對照2孔,每孔加入陽性對照50微升,陰性對照2孔,每孔加入陰性對照50微升,空白對照一孔,加入生理鹽水100微升。然后,依次在反應孔內(nèi)加入待測樣品50微升,除空白孔外,每孔再加酶結(jié)合物50微升,置微型震蕩器混勻5秒后,蓋好封片放37℃孵育60分鐘。棄去反應孔內(nèi)液體并拍干,用工作洗滌液〔濃縮洗滌液1毫升加19毫升蒸餾水稀釋后即為工作洗滌液注滿各孔,靜置30秒,再拍干,重復洗滌5次。每孔加入TMB顯色劑A50微升,在加入TMB顯色劑B50微升,37℃中顯色10~15分鐘。每孔加入終止液50微升。用酶標儀波長450nm讀數(shù),先用空白孔調(diào)零,然后讀取各測定孔OD值。[結(jié)果判斷]陰性對照A值*2.5=臨界值陰性對照小于0.05時,按0.05計算,高于0.05時按實際OD值計算。待測樣本大于臨界值即為陽性,待測樣本小于臨界值即為陰性。[臨床意義]乙肝病毒Pre—S1抗原〔前s1抗原主要存在于病毒完整顆粒中,表示病毒具有復制功能和傳染性。其敏感性好于HBeAg,可彌補由于HBeAg變異等造成的HBeAg陰性的臨床"誤導"。在早期診斷上早于乙肝兩對半和ALT?？膳cHBv—DNA取得幾乎同樣的敏感性。[注意事項]包被條需密封防潮,從冰箱取出后,在室溫中平衡不少于15分鐘。保存在2~8度,在有效期內(nèi)使用。終止液終止后,需在30分鐘內(nèi)測定結(jié)果。不同批號試劑請勿通用。。5．用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項目丙型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序方法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-008文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室丙型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-008共2頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]采用ELISA間接抗體兩步法測抗HCV,用HCV抗原包被反應板加入待測標本后再加入酶標記第二抗體,加底物顯色為陽性,證明樣本中含丙肝抗體,含量與顯色程度成正比。[操作步驟]每次試驗設陰性、陽性對照各兩孔,分別加入陰、陽性對照血清100ul,再設一孔空白對照,加入樣品稀釋液100ul。其余孔加100ul樣品稀釋液,再加待測血清10ul。充分混勻后,置37℃溫育30分鐘。洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板,最后拍干。每孔加酶結(jié)合物100ul,〔空白對照除外,置37℃溫育20分鐘。洗板機洗板：選擇洗滌5次的程序洗板,最后拍干。每孔加顯色劑A、B各50ul,輕輕震蕩后,37℃避光靜置10分鐘。每孔加入終止液50ul終止反應,用酶標儀讀數(shù),可選擇波長450nm〔以空白調(diào)零,讀取各孔OD值。[結(jié)果判斷]陽性對照平均值大于1.20,實驗結(jié)果有效。實驗設計要求陽性、陰性對照OD值之差應大于1.20,否則本次實驗無效。若陰性對照值小于0.050時,按0.050計算。臨界值=陰性對照平均值+0.1測試標本的計算值小于臨界值則為HCV抗體陰性。測試標本的計算值等于或大于臨界值則為HCV抗體陽性。[臨床意義]抗—HCV陽性僅提示已被HCV感染,不是獲得免疫力的標志。急性期多為IgM型,慢性期多為IgG型,兩者均為非保護性抗體,是具有傳染性的標志。[注意事項]試劑使用前應搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加,注意均勻用力。從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試,余者應及時封存,置冰箱內(nèi)儲藏備用。洗板時所用的洗水紙請勿反復。不同批號試劑請勿通用。結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。封片不能重復使用。實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室丙型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-008共2頁第1頁2005-01-017．用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項目丁型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgG方法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-009文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室丁型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-009共2頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]采用丁型肝炎病毒特異性抗原成分作為包被抗原,采用ELISA法檢測丁型肝炎病毒抗體。樣品加入已有樣品稀釋液的包被抗原反應孔,在隨后的溫育過程中,若樣品中含特異性抗體,則該抗體與包被抗原形成抗原—抗體復合物被吸附到固相上,再加上酶標記的第二抗體,最終形成抗原—抗體—酶標二抗復合物,洗滌除去未結(jié)合的游離酶,加入顯色劑后顯色,反之若樣品中不含特異性抗體,則加入顯色劑后不顯色。[操作步驟]配洗液：將洗滌液〔20倍與蒸餾水按1：19的比例稀釋,充分搖勻后備用。加樣品稀釋液：用加樣器在微孔反應條孔中加入樣品稀釋液每孔100ul,空下四孔準備加對照。加標本和留空白：將每份待檢標本10ul分別加入已有樣品稀釋液的各孔中,留下一孔不加標本做空白對照,標好位置。加對照：在預先空下的4孔分別加入陰性對照兩孔,陽性對照兩孔每孔100ul,標好位置,陰、陽對照應在所有待測標本加完后再加,以保證閾值計算的準確性。溫育〔一：充分混勻,37℃溫育20分鐘。洗板〔一：洗板機洗板：洗板次數(shù)為5次,每次洗液在孔中滯留時間為15~30秒,洗液應注滿反應孔,確保每次吸凈無殘留,全部洗完后在毛巾或洗水紙上用力拍干。加酶標二抗：各孔中加入酶標二抗100ul。溫育〔二：37℃溫育20分鐘。洗板〔二：方法同洗板〔一。加顯色劑：每孔加入顯色劑A50ul,全部加完后,再次每孔加入顯色劑B50ul,混勻。溫育〔三：37℃顯色10分鐘。終止：顯色完畢后立即于每孔加50ul終止液,混勻。判斷：終止后應在10分鐘內(nèi)完成判讀,用空白對照調(diào)零,用酶標儀在450nm波長處測定吸光值。[結(jié)果判斷]對空白對照調(diào)零后,兩孔陽性對照OD平均值大于兩孔陰性對照OD平均值0.5以上,陰性對照OD平均值小于0.10時,方可認為試劑盒有效并且用戶操作無誤。閾值的計算：1兩孔陰性對照平均值小于0.06按0.06計算2閾值=2.1乘以陰性對照OD平均值[臨床意義]實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室丁型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-009共2頁第1頁2005-01-01HDV是一種有缺陷的病毒,表面被HBV包膜蛋白包裹。HDV的致病性依賴于HBV,可與HBV重疊感染或共同感染,HDV感染與暴發(fā)型肝炎重癥肝炎及肝硬變密切相關(guān)。HDV感染的血清學檢測測定抗HDV—IgG,一般認為是即往感染。[注意事項]試劑使用前應搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加,注意均勻用力。從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試,余者應及時封存,置冰箱內(nèi)儲藏備用。洗板時所用的洗水紙請勿反復。不同批號試劑請勿通用。結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。封片不能重復使用。用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項目丁型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgM方法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-010文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室丁型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-010共2頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]采用丁型肝炎病毒特異性抗原成分作為包被抗原,采用ELISA法檢測丁型肝炎病毒抗體。樣品加入已有樣品稀釋液的包被抗原反應孔,在隨后的溫育過程中,若樣品中含特異性抗體,則該抗體與包被抗原形成抗原—抗體復合物被吸附到固相上,再加上酶標記的第二抗體,最終形成抗原—抗體—酶標二抗復合物,洗滌除去未結(jié)合的游離酶,加入顯色劑后顯色,反之若樣品中不含特異性抗體,則加入顯色劑后不顯色。[操作步驟]配洗液：將洗滌液〔20倍與蒸餾水按1：19的比例稀釋,充分搖勻后備用。加樣品稀釋液：用加樣器在微孔反應條孔中加入樣品稀釋液每孔100ul,空下四孔準備加對照。加標本和留空白：將每份待檢標本10ul分別加入已有樣品稀釋液的各孔中,留下一孔不加標本做空白對照,標好位置。加對照：在預先空下的4孔分別加入陰性對照兩孔,陽性對照兩孔每孔100ul,標好位置,陰、陽對照應在所有待測標本加完后再加,以保證閾值計算的準確性。溫育〔一：充分混勻,37℃溫育20分鐘。洗板〔一：洗板機洗板：洗板次數(shù)為5次,每次洗液在孔中滯留時間為15~30秒,洗液應注滿反應孔,確保每次吸凈無殘留,全部洗完后在毛巾或洗水紙上用力拍干。加酶標二抗：各孔中加入酶標二抗100ul。溫育〔二：37℃溫育20分鐘。洗板〔二：方法同洗板〔一。加顯色劑：每孔加入顯色劑A50ul,全部加完后,再次每孔加入顯色劑B50ul,混勻。溫育〔三：37℃顯色10分鐘。終止：顯色完畢后立即于每孔加50ul終止液,混勻。判斷：終止后應在10分鐘內(nèi)完成判讀,用空白對照調(diào)零,用酶標儀在450nm波長處測定吸光值。[結(jié)果判斷]對空白對照調(diào)零后,兩孔陽性對照OD平均值大于兩孔陰性對照OD平均值0.5以上,陰性對照OD平均值小于0.10時,方可認為試劑盒有效并且用戶操作無誤。閾值的計算：1兩孔陰性對照平均值小于0.06按0.06計算2閾值=2.1乘以陰性對照OD平均值[臨床意義]實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室丁型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-010共2頁第2頁2005-01-01HDV是一種有缺陷的病毒,表面被HBV包膜蛋白包裹。HDV的致病性依賴于HBV,可與HBV重疊感染或共同感染,HDV感染與暴發(fā)型肝炎重癥肝炎及肝硬變密切相關(guān)。HDV感染的血清學檢測測定抗HDV—IgM。陽性一般認為是近期感染。[注意事項]試劑使用前應搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加,注意均勻用力。從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試,余者應及時封存,置冰箱內(nèi)儲藏備用。洗板時所用的洗水紙請勿反復。不同批號試劑請勿通用。結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。封片不能重復使用。用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項目戊型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgG方法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-011文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室戊型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-011共2頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]采用戊型肝炎病毒〔HEV特異性抗原成分作為包被抗原,采用ELISA法檢測戊型肝炎病毒抗體。樣品加入已有樣品稀釋液的包被抗原反應孔,在隨后的溫育過程中,若樣品中含特異性抗體,則該抗體與包被抗原形成抗原—抗體復合物被吸附到固相上,再加上酶標記的第二抗體,最終形成抗原—抗體—酶標二抗復合物,洗滌除去未結(jié)合的游離酶,加入顯色劑后顯色,反之若樣品中不含特異性抗體,則加入顯色劑后不顯色。[操作步驟]配洗液：將洗滌液〔20倍與蒸餾水按1：19的比例稀釋,充分搖勻后備用。加樣品稀釋液》：用加樣器在微孔反應條孔中加入樣品稀釋液每孔100ul,空下四孔準備加對照。加標本和留空白：將每份待檢標本10ul分別加入已有樣品稀釋液的各孔中,留下一孔不加標本做空白對照,標好位置。加對照：在預先空下的4孔分別加入陰性對照兩孔,陽性對照兩孔每孔100ul,標好位置,陰、陽對照應在所有待測標本加完后再加,以保證閾值計算的準確性。溫育〔一：充分混勻,37℃溫育20分鐘。洗板〔一：洗板機洗板：洗板次數(shù)為5次,每次洗液在孔中滯留時間為15~30秒,洗液應注滿反應孔,確保每次吸凈無殘留,全部洗完后在毛巾或洗水紙上用力拍干。加酶標二抗：各孔中加入酶標二抗100ul。溫育〔二：37℃溫育20分鐘。洗板〔二：方法同洗板〔一。加顯色劑：每孔加入顯色劑A50ul,全部加完后,再次每孔加入顯色劑B50ul,混勻。溫育〔三：37℃顯色10分鐘。終止：顯色完畢后立即于每孔加50ul終止液,混勻。判斷：終止后應在10分鐘內(nèi)完成判讀,用空白對照調(diào)零,用酶標儀在450nm波長處測定吸光值。[結(jié)果判斷]對空白對照調(diào)零后,兩孔陽性對照OD平均值大于兩孔陰性對照OD平均值0.5以上,陰性對照OD平均值小于0.10時,方可認為試劑盒有效并且用戶操作無誤。閾值的計算：1兩孔陰性對照平均值小于0.06按0.06計算2閾值=2.1乘以陰性對照OD平均值[臨床意義]實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室戊型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-011共2頁第2頁2005-01-01HEV屬杯狀病毒科,所致戊型肝炎的臨床癥狀和流行病學都與甲肝相似,其急性肝炎的死亡率高〔1%~2%。孕婦可達20%,戊肝的血清學診斷用ELISA法檢測抗HEV抗體。[注意事項]試劑使用前應搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加,注意均勻用力。從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試,余者應及時封存,置冰箱內(nèi)儲藏備用。洗板時所用的洗水紙請勿反復。不同批號試劑請勿通用。結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。封片不能重復使用。用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項目戊型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgM方法ELISA方法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-012文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室戊型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-012共2頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]采用戊型肝炎病毒〔HEV特異性抗原成分作為包被抗原,采用ELISA法檢測戊型肝炎病毒抗體。樣品加入已有樣品稀釋液的包被抗原反應孔,在隨后的溫育過程中,若樣品中含特異性抗體,則該抗體與包被抗原形成抗原—抗體復合物被吸附到固相上,再加上酶標記的第二抗體,最終形成抗原—抗體—酶標二抗復合物,洗滌除去未結(jié)合的游離酶,加入顯色劑后顯色,反之若樣品中不含特異性抗體,則加入顯色劑后不顯色。[操作步驟]配洗液：將洗滌液〔20倍與蒸餾水按1：19的比例稀釋,充分搖勻后備用。加樣品稀釋液》：用加樣器在微孔反應條孔中加入樣品稀釋液每孔100ul,空下四孔準備加對照。加標本和留空白：將每份待檢標本10ul分別加入已有樣品稀釋液的各孔中,留下一孔不加標本做空白對照,標好位置。加對照：在預先空下的4孔分別加入陰性對照兩孔,陽性對照兩孔每孔100ul,標好位置,陰、陽對照應在所有待測標本加完后再加,以保證閾值計算的準確性。溫育〔一：充分混勻,37℃溫育20分鐘。洗板〔一：洗板機洗板：洗板次數(shù)為5次,每次洗液在孔中滯留時間為15~30秒,洗液應注滿反應孔,確保每次吸凈無殘留,全部洗完后在毛巾或洗水紙上用力拍干。加酶標二抗：各孔中加入酶標二抗100ul。溫育〔二：37℃溫育20分鐘。洗板〔二：方法同洗板〔一。加顯色劑：每孔加入顯色劑A50ul,全部加完后,再次每孔加入顯色劑B50ul,混勻。溫育〔三：37℃顯色10分鐘。終止：顯色完畢后立即于每孔加50ul終止液,混勻。判斷：終止后應在10分鐘內(nèi)完成判讀,用空白對照調(diào)零,用酶標儀在450nm波長處測定吸光值。[結(jié)果判斷]對空白對照調(diào)零后,兩孔陽性對照OD平均值大于兩孔陰性對照OD平均值0.5以上,陰性對照OD平均值小于0.10時,方可認為試劑盒有效并且用戶操作無誤。閾值的計算：1兩孔陰性對照平均值小于0.06按0.06計算2閾值=2.1乘以陰性對照OD平均值[臨床意義]實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室戊型肝炎病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-012共2頁第2頁2005-01-01HEV屬杯狀病毒科,所致戊型肝炎的臨床癥狀和流行病學都與甲肝相似,其急性肝炎的死亡率高〔1%~2%。孕婦可達20%,戊肝的血清學診斷用ELISA法檢測抗HEV抗體。[注意事項]試劑使用前應搖勻,并棄去1~2滴后垂直滴加,注意均勻用力。從冷藏環(huán)境中取出的試劑盒應置室溫平衡30分鐘再進行測試,余者應及時封存,置冰箱內(nèi)儲藏備用。洗板時所用的洗水紙請勿反復。不同批號試劑請勿通用。結(jié)果判斷須在10分鐘內(nèi)完成。封片不能重復使用。用本試劑盒應視為有傳染性物質(zhì),請按傳染病實驗室檢查規(guī)程操作。標準操作程序項目ENA多肽譜檢測的標準操作程序方法免疫印跡法編寫人馮嵐日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-013文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室ENA多肽譜檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-013共2頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]免疫印跡酶組化法即細胞核內(nèi)可溶性抗原〔ENA用PBS提取〔混合抗原后用凝膠電泳將各組ENA因分子量及帶電荷量拉開距離分出不同區(qū)帶轉(zhuǎn)印至NC膜,被測血清中某種ENA抗體與NC膜條上某種ENA抗原反應,在加上酶標第二抗體。某區(qū)帶不同分子量表位顯色提示被測血清中含有相應ENA抗體。用該檢測法可同時檢測多種ENA抗體,并分項報告檢查結(jié)果。[操作步驟]按所需量將濃縮洗滌液用蒸餾水作1：10稀釋。取出反應槽,每槽加入0.5毫升洗滌液,然后加入待測血清10微升,充分混勻,緩慢搖動下37℃孵育30分鐘。棄去槽內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,用洗滌液洗滌4次,每次每槽1毫升,洗滌一分鐘。每槽加入洗滌液0.5毫升,酶標抗體20微升,混勻。緩慢搖動下37℃孵育30分鐘。同"3"洗滌。加入顯色劑A0.5毫升,顯色劑B0.5毫升,室溫反應10分鐘。每槽加入0.5毫升終止液,一分鐘后棄去液體,用自來水洗滌數(shù)次,取出膜條,用吸水紙吸干后判斷結(jié)果。[結(jié)果判斷]膜條藍線與標準譜帶"0"線對齊,查出相應的色帶區(qū)域。實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室ENA多肽譜檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-013共2頁第2頁2005-01-01顯色區(qū)帶檢測抗體相關(guān)疾病及陽性率60KD、52KD、[抗SSA]60KD、52KD任意出現(xiàn)一條即可。干燥綜合癥〔SS〔65%SLE〔35%47KD、45KD、[抗SSB]47KD,45KD應同時出現(xiàn)。干燥綜合癥〔40%55KD[抗JO—1]多發(fā)性肌炎/皮肌炎〔PM/DM〔25%38KD、16.5KD、15KD[抗rRNP38KD]應出現(xiàn),16.5KD,15KD有時很淺。系統(tǒng)性紅斑狼瘡〔10%29KD、28KD、13.5KD[抗Sm]三條區(qū)帶應同時出現(xiàn)系統(tǒng)性紅斑狼瘡〔SLE〔30%70KD、32KD、29KD、28KD、22KD[抗U1RNP]其中70KD,32KD應任意出現(xiàn)一條區(qū)帶?；旌闲越Y(jié)締組織病〔MCTD〔95%SLE〔32%其他自身免疫性疾病86~67KD[抗ScL-70]86KD,67KD區(qū)帶應同時出現(xiàn),中間尚可見2~3條較弱區(qū)帶。彌漫性硬皮病〔PSS〔43%~70%28.5~11.5KD[抗D、E]28.5KD、18.5KD,11.5KD應同時出現(xiàn),之間尚可出現(xiàn)20KD,18KD,13.4KD區(qū)帶。混合性結(jié)締組織病〔MCTD〔19%53KD[抗DM—53]皮肌炎〔DM〔20%54KD[抗RA—54]類風濕性關(guān)節(jié)炎〔RA〔14%[臨床意義]抗SM為SLE的標志抗體?？筓1RNP為混合性結(jié)締組織病的標志抗體?？筍SA和抗SSB為干燥綜合癥的特異抗體?？笿O—1對皮肌炎有一定價值。[注意事項]濃縮洗滌液需用前稀釋。整個操作中,洗滌液用量大約每個人10毫升,可參照此稀釋。未用完洗滌液棄之,不可留下次再用。全部操作最好在生化搖擺平臺上擺動進行,改用手工間隙晃動也可,但敏感性降低。顯色劑A、B,需恢復室溫方可使用,顯色劑有顆粒時不影響檢測結(jié)果。診斷不應只建立在單個檢測基礎上,所有檢測結(jié)果必須考慮病人的臨床病史和其他檢測結(jié)果。不同試劑盒間的標準譜不能混用。不同血清標本,不同帶型,顯色強度會不一致,遇到弱陽性結(jié)果時,應仔細觀察。標準操作程序項目抗核抗體〔ANA檢測的標準操作程序方法金標免疫斑點法編寫人周曉林日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-014文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室抗核抗體〔ANA檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-014共1頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]斑點反應板上的固相混合細胞核抗原與血清中ANA結(jié)合形成復合物,膠體金標記的抗人IgG〔或IgM抗體再與復合物結(jié)合,形成肉眼可見的紅色圓斑。[操作步驟]加試劑A2滴于反應板孔中,待液體充分吸入。用樣品吸管加樣品0.15毫升〔4滴于反應板孔中,待液體充分吸入。去除藍色過濾蓋。加試劑B3滴于反應板孔中,待液體充分吸入。加試劑A1~2滴于反應板孔中,待液體吸入后觀察結(jié)果。[結(jié)果判斷]反應板孔中央出現(xiàn)紅色圓斑與紅線為陽性。只出現(xiàn)紅色橫線為陰性。圓斑與紅線均不出現(xiàn)為試劑失效。[臨床意義]抗核抗體〔ANA是以真核細胞的核成分為靶抗原的自身抗體的總稱,性質(zhì)主要是IgG。ANA滴度很高或持續(xù)陽性,常提示某些自身免疫性疾病,如：系統(tǒng)性紅斑狼瘡、藥物性紅斑狼瘡、干燥綜合癥、混合結(jié)締組織病、硬皮病、多發(fā)性肌炎、類風濕關(guān)節(jié)炎等,少數(shù)正常人,尤其是老年人血清中可測出低滴度的ANA,另外,一些特殊病毒感染性疾病〔如傳染性單核細胞增多癥也可誘導機體產(chǎn)生ANA。[注意事項]試劑盒從冰箱取出時,應恢復室溫〔大于30℃后使用。試劑B若出現(xiàn)明顯顆粒狀沉淀或變蘭色為失效。標準操作程序項目抗雙鏈脫氧核糖核酸〔抗ds-DNA檢測的標準操作程序方法金標滲濾法編寫人周曉林日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-015文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室抗雙鏈脫氧核糖核酸〔抗ds-DNA檢測的標準操作程序WHDEYY-JYK-MY-015共1頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]斑點金免疫滲濾試驗單位為三層反應盒,血清中抗ds-DNA抗體透過過濾層與反應層NC膜上抗ds-DNA〔斑點結(jié)合。未結(jié)合物滲入下面吸墊層加入金標抗IgG形成紅色斑點為抗ds-DNA抗體陽性,否則斑點無色不顯示。[操作步驟]取出所需測定板,按順序編號。加入待測血清100微升于測定板上濾器孔內(nèi)。待血清完全滲濾干后,除去過濾器。加金標液3滴于測定板小孔內(nèi)待干。加洗滌液2滴于測定板小孔內(nèi),待干即可判斷結(jié)果。[結(jié)果判斷]陽性：在小孔中央的膜上同時出現(xiàn)紅色的點和線。如"—""."陰性：在小孔中央的膜上出現(xiàn)紅色的線條。如"—"。無效：在小孔中央的膜上無任何顯色。[臨床意義]抗ds-DNA抗體是系統(tǒng)性紅斑狼瘡〔SLE標記抗體。即僅在SLE病人可檢出該抗體,陽性率在30%左右?？筪s-DNA抗體陽性與SLE活動期及紅斑狼瘡性腎炎發(fā)生有關(guān)。SLE活動期抗體檢出率明顯增高。[注意事項]結(jié)果判斷中不論陽性,陰性反應膜中央都會顯示一條紅線,其為試劑質(zhì)量對照。滴加標本中不能含有紅細胞,以免干擾結(jié)果的觀察。使用不同方法、來源及批號試劑盒前必須仔細閱讀其說明書,具體操作參閱試劑盒說明書加以改動。待測血清應新鮮,某些陽性血清4℃保存一周抗ds-DNA抗體就難以測出。標準操作程序項目弓形蟲抗體檢測的標準操作程序〔IgG方法ELISA方法編寫人周曉林日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-016文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室弓形蟲抗體檢測的標準操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-016共1頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]采用ELISA間接抗體兩步法測TOX,用TOX抗原包被反應板,加入待檢樣本后再加入酶標記第二抗體。加底物顯色為陽性,證明標本中含弓形蟲抗體,含量與顯色程度成正比。[操作步驟]試劑盒放置室溫20~30分鐘。濃縮洗滌液用蒸餾水10倍稀釋。將待測血清分別用試劑盒配套稀釋液作1：100稀釋〔將樣品稀釋液1毫升加入一清潔小試管中,加10微升待測樣品,充分混勻。取包被板條固定在96孔板架上,分別加入上述稀釋血清100微升每孔,同時設陰、陽性對照各2孔,每孔100微升,另留一孔不加任何液體為空白對照,置37℃30分鐘。甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液洗3次,每次浸泡一分鐘后甩凈,扣干。除空白孔外每孔加酶標記物一滴,37℃30分鐘。同〔3各孔加顯色液A、B液各一滴〔50微升,混勻,37℃避光顯色10分鐘,加終止液每孔50微升,混勻后用酶標儀450nm波長測OD值。[結(jié)果判斷]以空白孔調(diào)零,450nm波長測定OD值。陽性對照值大于或等于0.25,陰性對照值小于或等于0.10證明實驗成立。如陰性對照值小于0.07,按0.07計算,S/N值大于或等于3.0,則判為陽性〔即樣品OD值大于或等于0.21判為陽性,如S/N值小于3.0則為陰性。S/N=待測樣品OD值/陰性對照OD值平均值[臨床意義]弓形蟲感染是一種人畜共患疾病,由貓與其他寵物感染人的可能性最大。后天感染輕型者常無癥狀,但血清中可查到抗體；重型者可引起各種癥狀,如高熱,肌肉、關(guān)節(jié)疼痛,淋巴結(jié)腫大等。通過胎盤宮內(nèi)感染者,可引起死胎、早產(chǎn),出生后可表現(xiàn)一系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀以及眼及內(nèi)臟的先天損害。弓形蟲抗體IgG陽性提示為TOX繼往感染。[注意事項]染菌、嚴重溶血或高血脂的待測樣品可能引起錯誤結(jié)果,應重新采樣。臨床醫(yī)生應結(jié)合臨床癥狀進行診斷,并對抗體水平進行動態(tài)觀察。確保樣品稀釋準確,請按此中方法進行稀釋〔將樣品稀釋液1毫升加入一清潔小試管中,加10微升待測樣品,充分混勻。不同批號試劑不可混用。標準操作程序項目弓形蟲抗體檢測的標準操作程序〔IgM方法ELISA方法編寫人周曉林日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-017文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室弓形蟲抗體檢測的標準操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-017共1頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]采用ELISA間接抗體兩步法測TOX,用TOX抗原包被反應板,加入待檢樣本后再加入酶標記第二抗體。加底物顯色為陽性,證明標本中含弓形蟲抗體,含量與顯色程度成正比。[操作步驟]試劑盒放置室溫20~30分鐘。濃縮洗滌液用蒸餾水10倍稀釋。將待測血清分別用試劑盒配套稀釋液作1：100稀釋〔將樣品稀釋液1毫升加入一清潔小試管中,加10微升待測樣品,充分混勻。取包被板條固定在96孔板架上,分別加入上述稀釋血清100微升每孔,同時設陰、陽性對照各2孔,每孔100微升,另留一孔不加任何液體為空白對照,置37℃30分鐘。甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液洗3次,每次浸泡一分鐘后甩凈,扣干。除空白孔外每孔加酶標記物一滴,37℃30分鐘。同〔3各孔加顯色液A、B液各一滴〔50微升,混勻,37℃避光顯色10分鐘,加終止液每孔50微升,混勻后用酶標儀450nm波長測OD值。[結(jié)果判斷]以空白孔調(diào)零,450nm波長測定OD值。陽性對照值大于或等于0.25,陰性對照值小于或等于0.10證明實驗成立。如陰性對照值小于0.07,按0.07計算,S/N值大于或等于3.0,則判為陽性〔即樣品OD值大于或等于0.21判為陽性,如S/N值小于3.0則為陰性。S/N=待測樣品OD值/陰性對照OD值平均值[臨床意義]弓形蟲感染是一種人畜共患疾病,由貓與其他寵物感染人的可能性最大。后天感染輕型者常無癥狀,但血清中可查到抗體；重型者可引起各種癥狀,如高熱,肌肉、關(guān)節(jié)疼痛,淋巴結(jié)腫大等。通過胎盤宮內(nèi)感染者,可引起死胎、早產(chǎn),出生后可表現(xiàn)一系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀以及眼及內(nèi)臟的先天損害。弓形蟲抗體IgM陽性提示為TOX急性感染。[注意事項]染菌、嚴重溶血或高血脂的待測樣品可能引起錯誤結(jié)果,應重新采樣。臨床醫(yī)生應結(jié)合臨床癥狀進行診斷,并對抗體水平進行動態(tài)觀察。確保樣品稀釋準確,請按此中方法進行稀釋〔將樣品稀釋液1毫升加入一清潔小試管中,加10微升待測樣品,充分混勻。不同批號試劑不可混用。標準操作程序項目風疹病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgG方法ELISA方法編寫人周曉林日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-018文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室風疹病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-018共1頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]采用ELISA間接抗體兩步法測RUV,用RUV抗原包被反應板,加入待檢樣本后再加入酶標記第二抗體。加底物顯色為陽性,證明標本中含RUV抗體,含量與顯色程度成正比。[操作步驟]試劑盒放置室溫20~30分鐘。濃縮洗滌液用蒸餾水10倍稀釋。將待測血清分別用試劑盒配套稀釋液作1：100稀釋〔將樣品稀釋液1毫升加入一清潔小試管中,加10微升待測樣品,充分混勻。取包被板條固定在96孔板架上,分別加入上述稀釋血清100微升每孔,同時設陰、陽性對照各2孔,每孔100微升,另留一孔不加任何液體為空白對照,置37℃30分鐘。甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液洗3次,每次浸泡一分鐘后甩凈,扣干。除空白孔外每孔加酶標記物一滴,37℃30分鐘。同〔3各孔加顯色液A、B液各一滴〔50微升,混勻,37℃避光顯色10分鐘,加終止液每孔50微升,混勻后用酶標儀450nm波長測OD值。[結(jié)果判斷]以空白孔調(diào)零,450nm波長測定OD值。陽性對照值大于或等于0.25,陰性對照值小于或等于0.10證明實驗成立。如陰性對照值小于0.07,按0.07計算,S/N值大于或等于3.0,則判為陽性〔即樣品OD值大于或等于0.21判為陽性,如S/N值小于3.0則為陰性。S/N=待測樣品OD值/陰性對照OD值平均值[臨床意義]風疹病毒易感人群為1~5歲兒童和孕婦。據(jù)統(tǒng)計,孕婦感染風疹者多在懷孕1~6周時〔大于50%,除可致流產(chǎn)、死產(chǎn)、早產(chǎn)外,所生嬰兒還可發(fā)生先天性風疹綜合癥。IgG抗體陽性提示為RUV繼往感染。[注意事項]染菌、嚴重溶血或高血脂的待測樣品可能引起錯誤結(jié)果,應重新采樣。臨床醫(yī)生應結(jié)合臨床癥狀進行診斷,并對抗體水平進行動態(tài)觀察。確保樣品稀釋準確,請按此中方法進行稀釋〔將樣品稀釋液1毫升加入一清潔小試管中,加10微升待測樣品,充分混勻。不同批號試劑不可混用。標準操作程序項目風疹病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgM方法ELISA方法編寫人周曉林日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-019文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室風疹病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-019共1頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]采用ELISA間接抗體兩步法測RUV,用RUV抗原包被反應板,加入待檢樣本后再加入酶標記第二抗體。加底物顯色為陽性,證明標本中含RUV抗體,含量與顯色程度成正比。[操作步驟]試劑盒放置室溫20~30分鐘。濃縮洗滌液用蒸餾水10倍稀釋。將待測血清分別用試劑盒配套稀釋液作1：100稀釋〔將樣品稀釋液1毫升加入一清潔小試管中,加10微升待測樣品,充分混勻。取包被板條固定在96孔板架上,分別加入上述稀釋血清100微升每孔,同時設陰、陽性對照各2孔,每孔100微升,另留一孔不加任何液體為空白對照,置37℃30分鐘。甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液洗3次,每次浸泡一分鐘后甩凈,扣干。除空白孔外每孔加酶標記物一滴,37℃30分鐘。同〔3各孔加顯色液A、B液各一滴〔50微升,混勻,37℃避光顯色10分鐘,加終止液每孔50微升,混勻后用酶標儀450nm波長測OD值。[結(jié)果判斷]以空白孔調(diào)零,450nm波長測定OD值。陽性對照值大于或等于0.25,陰性對照值小于或等于0.10證明實驗成立。如陰性對照值小于0.07,按0.07計算,S/N值大于或等于3.0,則判為陽性〔即樣品OD值大于或等于0.21判為陽性,如S/N值小于3.0則為陰性。S/N=待測樣品OD值/陰性對照OD值平均值[臨床意義]風疹病毒易感人群為1~5歲兒童和孕婦。據(jù)統(tǒng)計,孕婦感染風疹者多在懷孕1~6周時〔大于50%,除可致流產(chǎn)、死產(chǎn)、早產(chǎn)外,所生嬰兒還可發(fā)生先天性風疹綜合癥。IgM抗體陽性提示為RUV急性感染。[注意事項]染菌、嚴重溶血或高血脂的待測樣品可能引起錯誤結(jié)果,應重新采樣。臨床醫(yī)生應結(jié)合臨床癥狀進行診斷,并對抗體水平進行動態(tài)觀察。確保樣品稀釋準確,請按此中方法進行稀釋〔將樣品稀釋液1毫升加入一清潔小試管中,加10微升待測樣品,充分混勻。不同批號試劑不可混用。標準操作程序項目巨細胞病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgG方法ELISA方法編寫人周曉林日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-020文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室巨細胞病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgGWHDEYY-JYK-MY-020共1頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]采用ELISA間接抗體兩步法測CMV,用CMV抗原包被反應板,加入待檢樣本后再加入酶標記第二抗體。加底物顯色為陽性,證明標本中含CMV抗體,含量與顯色程度成正比。[操作步驟]試劑盒放置室溫20~30分鐘。濃縮洗滌液用蒸餾水10倍稀釋。將待測血清分別用試劑盒配套稀釋液作1：100稀釋〔將樣品稀釋液1毫升加入一清潔小試管中,加10微升待測樣品,充分混勻。取包被板條固定在96孔板架上,分別加入上述稀釋血清100微升每孔,同時設陰、陽性對照各2孔,每孔100微升,另留一孔不加任何液體為空白對照,置37℃30分鐘。甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液洗3次,每次浸泡一分鐘后甩凈,扣干。除空白孔外每孔加酶標記物一滴,37℃30分鐘。同〔3各孔加顯色液A、B液各一滴〔50微升,混勻,37℃避光顯色10分鐘,加終止液每孔50微升,混勻后用酶標儀450nm波長測OD值。[結(jié)果判斷]以空白孔調(diào)零,450nm波長測定OD值。陽性對照值大于或等于0.25,陰性對照值小于或等于0.10證明實驗成立。如陰性對照值小于0.07,按0.07計算,S/N值大于或等于3.0,則判為陽性〔即樣品OD值大于或等于0.21判為陽性,如S/N值小于3.0則為陰性。S/N=待測樣品OD值/陰性對照OD值平均值[臨床意義]巨細胞病毒IgG主要用于診斷巨細胞病毒繼往感染,成人感染巨細胞病毒可引起肝炎、肺炎,孕婦感染后會造成胎兒受損,最終導致胎兒宮內(nèi)死亡,新生兒感染會造成黃疸,血小板減少性紫癜、溶血性貧血、腦損傷。[注意事項]染菌、嚴重溶血或高血脂的待測樣品可能引起錯誤結(jié)果,應重新采樣。臨床醫(yī)生應結(jié)合臨床癥狀進行診斷,并對抗體水平進行動態(tài)觀察。確保樣品稀釋準確,請按此中方法進行稀釋〔將樣品稀釋液1毫升加入一清潔小試管中,加10微升待測樣品,充分混勻。不同批號試劑不可混用。標準操作程序項目巨細胞病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgM方法ELISA方法編寫人周曉林日期2005/01/01審核人曹進平日期2005/01/01批準人陳健康日期2005/01/01文件分發(fā)部門和/或個人免疫室,醫(yī)務科本規(guī)程自20XX01月01日起實施,每2年復審一次文件編號WHDEYY-JYK-MY-021文件版本號第1版醫(yī)務科保管者院長辦公室保管者院檔案室保管者檢驗科主任實驗室名稱項目編號制定日期蕪市第二民醫(yī)院檢驗科免疫室巨細胞病毒抗體檢測的標準操作程序〔IgMWHDEYY-JYK-MY-021共1頁第1頁2005-01-01[目的]保證檢測結(jié)果準確可靠。[該SOP變動程序]本標準操作程序的變動,可由任一使用本SOP的工作人員提出,并報經(jīng)下述人員批準簽字：專業(yè)主管、科主任。[標本的采取和保存]隨機靜脈血2ml,分離血清備用。也可以使用血漿標本進行檢測。標本宜新鮮,無污染,避免溶血,避免反復凍融,不可用NaN3防腐。[測定原理]采用ELISA間接抗體兩步法測CMV,用CMV抗原包被反應板,加入待檢樣本后再加入酶標記第二抗體。加底物顯色為陽性,證明標本中含CMV抗體,含量與顯色程度成正比。[操作步驟]劑盒放置室溫20~30分鐘。濃縮洗滌液用蒸餾水10倍稀釋。將待測血清分別用試劑盒配套稀釋液作1：100稀釋〔將樣品稀釋液1毫升加入一清潔小試管中,加10微升待測樣品,充分混勻。取包被板條固定在96孔板架上,分別加入上述稀釋血清100微升每孔,同時設陰、陽性對照各2孔,每孔100微升,另留一孔不加任何液體為空白對照,置37℃30分鐘。甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液洗3次,每次浸泡一分鐘后甩凈,扣干。除空白孔外每孔加酶標記物一滴,37℃30分鐘。同〔3各孔加顯色液A、B液各一滴〔50微升,混勻,37℃避光顯色10分鐘,加終止液每孔50微升,混勻后用酶標儀450nm波長測OD值。[結(jié)果判斷]以空白