流式細胞術原理/用途/制樣要求張波（藥理室ozhang_lzu@sina.流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁!流式細胞儀是什么儀器，

什么時候會用到？流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁!2009年1月20日1月23日2月2日流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁!流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁!BDFACSCalibur流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁!流式細胞儀可檢測到的細胞參數(shù)

非熒光信號顆粒度細胞大小前向角散射光（FSC）細胞相對大小及其表面積

側向角散射光（SSC）細胞顆粒度及細胞內細胞器的相對復雜性流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁!外周全血細胞散射光雙參數(shù)點圖流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁!流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁!圖AnnexinV/PI雙標記分析細胞凋亡和壞死流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁!樣本處理流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁!植物樣本的制作流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁!步驟一：

選擇合適的熒光染料必須被流式細胞儀上所配備激光器所激發(fā)激發(fā)光譜在儀器上濾光片能夠接受范圍內熒光素光譜的重疊應當盡量減少流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁!步驟二：染色體積溫度孵育時間對照流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁!散點圖密度圖二維等高圖直方圖圖報告中常見的幾種流式細胞圖流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁!流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁!2.用單染色的細胞調節(jié)儀器補償流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁!流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁!數(shù)據(jù)分析設門設定陰性與陽性群體的界限確定陽性與陰性細胞群體統(tǒng)計陽性或陰性細胞群體的百分率，平均熒光值，絕對數(shù)或抗體結合數(shù)流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁!流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁!流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁!流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁!流式細胞術流式細胞術（FlowCytometry,簡稱FCM）是一種可以快速、準確、客觀，并且同時檢測單個微粒（通常是細胞）的多項特性的技術，同時可以對特定群體加以分選研究對象為生物顆粒，如各種細胞、染色體、微生物、及人工合成微球等研究的微粒特性包括多種物理及生物學特征，并加以定量流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁!流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁!血液涂片流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁!ReviewQuestionDeadcellsareknowntobesmallerandtoexhibitmoreinternalplexitythanlivecells.Whichofthepopulationsonthisplotwouldyouexpecttobedead?AB流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁!流式細胞儀可檢測到的細胞參數(shù)

熒光信號流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁!Two-ColorCellAnalysisWhichofthethreepopulationshasthemostAbAbindingsites?AbAAbB流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁!細胞懸液的制備細胞懸液：分離PBMC、PRP等：操作復雜，分離、離心步驟導致細胞特定群體丟失，并可能引入某些誤差直接使用外周血、骨髓：最接近生理狀況，操作簡便，樣本用血量小灌洗液、體腔積液培養(yǎng)細胞、細胞系實體組織：病理組織：新鮮樣本/石蠟包埋樣本針吸組織：新鮮樣本鞘液、洗液等：清潔無顆粒雜質（.22濾膜）流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁!流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第29頁!OpticsLaserFluorochromeDetectorParameterFilterFITCGFPFL1530/30PEPIFL2585/42PerCPPerCP-CY5.5FL3670LPAPCFL4661/16488nm635nm流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第30頁!步驟三：數(shù)據(jù)收集和分析畫圖尋找目標細胞調整儀器設置到合適的狀態(tài)我們可以得到怎樣的結果？它們意味著什么？流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第31頁!儀器設置調節(jié)用未染色細胞調整儀器PMT電壓流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第32頁!開機需準備試劑建議首次試機避免進行大量試驗，僅需準備下列樣品（1）NegativeControl（不加任何抗體）。（2）CD3-FITC（FL1單染）（3）CD19-PE（FL2單染）（4）CD3-FITC/CD19-PE（FL1/FL2雙染）。流式細胞術簡介共38頁，您現(xiàn)在瀏覽的是第33頁!關于同型對照例：一個雙色染色的實驗抗體AFITC，抗體BPE對應的同型對照是IgG1FITC,IgG1PE那么需要準備的是陰性對照：細胞加上IgG1FITC,IgG1PE單陽性對照：FITC:細胞加上AbAFITC,IgG1PEPE:細胞加上AbBPE,IgG1F