中藥顯微鑒定利用顯微量尺(目鏡量尺、載臺(tái)量尺)測(cè)量計(jì)算組織細(xì)胞及細(xì)胞后含物的大小顯微測(cè)量顯微描繪顯微攝影徒手或利用顯微描繪器描繪顯微鏡下所見物體的圖像利用顯微攝像裝置拍攝顯微鏡下所見物體的圖像第二部分顯微描繪與攝影1、顯微測(cè)量

在進(jìn)行顯微觀察時(shí)，有時(shí)需測(cè)定微細(xì)結(jié)構(gòu)的大小，如長(zhǎng)度、寬度（直徑）等，作為顯微鑒定的依據(jù)之一。因顯微結(jié)構(gòu)一般均很小，通常用微米（μm）作為測(cè)量單位，超過(guò)1000μm，則可以用毫米為單位。進(jìn)行顯微測(cè)量必須用專門的量尺即：目鏡量尺(目鏡測(cè)微尺)和載臺(tái)量尺(載臺(tái)測(cè)微尺)。1.2目鏡量尺的標(biāo)化目鏡量尺中每一小格的長(zhǎng)度，是隨顯微鏡的鏡筒長(zhǎng)度、目鏡與物鏡的放大倍數(shù)的改變而變化的。因此，必須標(biāo)化目鏡量尺每一小格相當(dāng)?shù)拈L(zhǎng)度；即一臺(tái)顯微鏡在不同目鏡與物鏡組合下，每一格的長(zhǎng)度。具體方法是：使兩種量尺的刻度平行，左邊的“0”刻度對(duì)齊，再找出第二條重合刻度。如圖：在10X物鏡下目鏡量尺的100小格(0～100)與載臺(tái)量尺的43小格(0～43)的長(zhǎng)度相等，則目鏡量尺的每一小格為：4.3μm。（10μm×43÷100≈4.3μm）同樣的方法可以標(biāo)化出各種放大倍數(shù)下目鏡量尺每小格的長(zhǎng)度。1.3用顯微量尺測(cè)量的方法將欲測(cè)定物體的標(biāo)本片放在載物臺(tái)上，用目鏡量尺測(cè)量目的物的小格數(shù)，乘以標(biāo)化出的目鏡量尺在該組合下每小格相當(dāng)?shù)奈⒚讛?shù)即得。測(cè)量實(shí)物時(shí)，通常使用高倍物鏡。當(dāng)測(cè)量一個(gè)物體時(shí)，要分別測(cè)量其最小值與最大值，得出該物體的長(zhǎng)度范圍。每個(gè)測(cè)量值應(yīng)取15～20個(gè)數(shù)的平均值。2、顯微描繪在顯微鑒定工作中，顯微特征圖是重要的表達(dá)形式。繪制顯微特征圖，可徒手或利用顯微描繪器描繪顯微鏡下所見物體的圖像，現(xiàn)在隨著計(jì)算機(jī)多媒體技術(shù)的發(fā)展，直接將顯微鏡中的圖像通過(guò)計(jì)算機(jī)采錄，使顯微圖像更真實(shí)、生動(dòng)。生藥繪圖的特點(diǎn)與要求

特點(diǎn)：顯微繪圖著重從研究問題的事實(shí)出發(fā)，強(qiáng)調(diào)真實(shí)性與科學(xué)性，在此基礎(chǔ)上適當(dāng)?shù)淖⒁馑囆g(shù)性的表現(xiàn)手法。

要求：高度的科學(xué)性，如實(shí)反映物體的特征，繪圖要精確，比例要?jiǎng)蚍Q、布局要協(xié)調(diào)，主次要分明；描繪時(shí)注意線條均勻清晰，倍數(shù)要正確，注字要工整，應(yīng)從圖的右方用平行線引出，在線的盡頭注明圖各部分的名稱，全圖的名稱應(yīng)寫在圖的正下方。藿香(Agastacherugosa)莖橫切面3.1儀器與設(shè)備顯微鏡，顯微鏡攝影儀（照相機(jī)、數(shù)碼攝像頭CCD等）3、顯微攝影1.視場(chǎng)光闌的調(diào)節(jié)視場(chǎng)光闌位于鏡座之中,其作用：(1)控制照明光束的大小，根據(jù)物鏡的倍率給予不同直徑的光束面積,使所觀察的視域能受到均勻的照明。(2)控制雜散光在成像光路系統(tǒng)中的影響，特別是免除雜散光對(duì)照相系統(tǒng)的干擾，在顯微攝影時(shí)起著增減影象反差的作用。視場(chǎng)光闌位于鏡座前端的主光軸上在視野中可見視場(chǎng)光闌經(jīng)聚光鏡所形成的多邊形狀更不應(yīng)該用調(diào)節(jié)聚光鏡位置高低的方法來(lái)調(diào)節(jié)視野中的亮度！不應(yīng)該用聚光鏡的孔徑光闌來(lái)調(diào)節(jié)視野中的亮度！顯微照相機(jī)光程轉(zhuǎn)換拉桿自動(dòng)曝光機(jī)構(gòu)顯微鏡自動(dòng)曝光控制器顯微攝影傳統(tǒng)的顯微攝影是指用膠片照相機(jī)進(jìn)行顯微攝影的方法。是將顯微鏡下觀察到的圖像用顯微照相設(shè)備攝錄下來(lái)的一項(xiàng)技術(shù)。顯微攝影裝置顯微鏡、照相（攝影）機(jī)系統(tǒng)、曝光控制裝置三部分。3.3傳統(tǒng)的顯微攝影技術(shù)

顯微攝影步驟1.安裝顯微攝影裝置將相機(jī)，顯微鏡和照明設(shè)備連一起，并能在觀察鏡中看到所要拍攝的標(biāo)本。2.調(diào)整好顯微鏡聚光器和光源燈的調(diào)中，孔徑光闌和視場(chǎng)光闌的調(diào)節(jié)。3.底片選擇彩色底片、黑白底片，正片或負(fù)片，底片感光度的選擇4.曝光的確定經(jīng)驗(yàn)法，試攝法，測(cè)光表法。5.取景對(duì)焦和拍攝屈光度的調(diào)節(jié)，取景，聚焦拍攝

6.沖洗、放大沖洗底片，洗印放大照片

在此過(guò)程中，顯微鏡的正確使用、取景聚焦、曝光控制及沖洗放大是獲得優(yōu)質(zhì)圖像的關(guān)鍵。3.3傳統(tǒng)的顯微攝影技術(shù)

顯微鏡數(shù)碼照相技術(shù)是與數(shù)碼相機(jī)的工作原理是一致的，只是將CCD（chargecoupledevice電荷藕合器）直接安裝在顯微鏡上。顯微鏡上方的CCD將顯微鏡下看到的圖像(光信號(hào))，轉(zhuǎn)變?yōu)閿?shù)字信號(hào)輸出，通過(guò)相關(guān)的圖像采集軟件直接顯示在計(jì)算機(jī)顯示器上，使顯微鏡中觀察的圖像即時(shí)生成，方便存儲(chǔ)、編輯，較之傳統(tǒng)的顯微攝影具有明顯的優(yōu)勢(shì)。3.4數(shù)碼顯微攝影介紹數(shù)碼顯微攝影的優(yōu)勢(shì)：顯微圖像分辨率高，拍攝的顯微圖像清晰。(OLYMPUS-DP50

顯微照相系統(tǒng)580萬(wàn)像素；DP70達(dá)1250萬(wàn)像素)顯微鏡下的圖像實(shí)現(xiàn)同步顯示，快速聚焦、快速拍攝。顯微圖像色彩真實(shí)，原物原色顯示在屏幕上。顯微圖像可即時(shí)以數(shù)字形式保存、編輯。獲得的顯微圖像還可利用圖像分析軟件進(jìn)行定性、定量分析。色階(levels)

在數(shù)字圖像中，顏色的總數(shù)稱“色域”，色域中每一個(gè)具體值叫色階。紅(R)、綠(G)、藍(lán)(B)３中基色從0～255分成256個(gè)等級(jí)即色階，色階其實(shí)就是色彩的層次感，也可以理解為顏色的濃淡，對(duì)于數(shù)字圖像的質(zhì)量評(píng)價(jià)，色階的豐富與分辨率同樣重要。Bit(位)色彩位數(shù)又稱色彩深度，數(shù)碼攝像頭的色彩深度指標(biāo)反映了攝像頭能正確記錄色調(diào)有多少，色彩位數(shù)的值越高，就越可能更真實(shí)地還原圖像亮部及暗部的細(xì)節(jié)。目前數(shù)碼攝像頭的色彩位數(shù)都達(dá)到了3×8＝24位(256×256×256共計(jì)1.67億種顏色)，即可以生成真彩色的圖像?？傊饰粩?shù)是反映數(shù)碼相機(jī)的色彩分辨能力，色彩深度值越高，就越能真實(shí)地還原色彩。

圖像儲(chǔ)存格式常用的圖像儲(chǔ)存格式有jpeg、tiff、gif、bmp

Jpeg(JointPhotographicExpertsGroup聯(lián)合圖片專家組)格式Jpeg格式的圖像質(zhì)量可以選擇，從1～12，數(shù)值越大，圖像質(zhì)量越好，文件也就越大；數(shù)值越小圖像被壓縮越多，那么圖像色彩就損失越多。另在格式選項(xiàng)中，如果要優(yōu)化色彩質(zhì)量就要選擇基線已優(yōu)化項(xiàng)。Gif(GraphicInterchangeFormat圖形交換模式)圖像格式，也是計(jì)算機(jī)圖像常用的格式之一。Gif不是側(cè)重于圖像的高壓縮率，而是在不破壞圖像質(zhì)量的前提下壓縮并還原(Gif圖像具有可逆性)。Gif圖像的缺點(diǎn)是只能表示256色。多用于網(wǎng)絡(luò)傳輸。BMP(Bitmap-File)圖形文件是Windows操作系統(tǒng)中的標(biāo)準(zhǔn)圖像文件格式，是最簡(jiǎn)單的圖像格式。在Windows環(huán)境下運(yùn)行的所有圖像處理軟件都支持BMP格式。這種格式的特點(diǎn)是包含的圖像信息較豐富，幾乎不壓縮，由此導(dǎo)致了它與生俱生來(lái)的缺點(diǎn)--占用磁盤空間過(guò)大。以O(shè)lympus顯微數(shù)字照相DP50為例介紹3.6數(shù)碼顯微攝影操作DP50具有高分辨率和高靈敏性，使用150萬(wàn)像素的CCD，可獲得相當(dāng)于580萬(wàn)像素的極精確的數(shù)字圖像。在數(shù)據(jù)方面，通過(guò)最先進(jìn)的色彩數(shù)字轉(zhuǎn)換程序，其圖像是35mm照相機(jī)分辨率的4倍。有效記錄像素則根據(jù)使用者的需要可選擇2,776×2,074，1392×1040和640×480分辨率。

DP50不僅在色彩方面而且甚至是熒光樣品都保證獲得卓越的彩色圖像。4.

設(shè)置拍攝影像的模式

A.選擇常光模式或熒光模式（圖中②）

B.選擇自動(dòng)模式或手動(dòng)模式（圖中③）

C.選擇拍攝影像的大小（圖中④）②③④5.

設(shè)置成像范圍，選擇光點(diǎn)曝光表(spotmeter)的大?。▓D中⑤）⑤⑥⑦6.

調(diào)整樣本的取景范圍及焦距7.

移動(dòng)光點(diǎn)曝光表到樣本上測(cè)光(圖中⑥)，調(diào)節(jié)曝光值（圖中⑦）（該軟件的曝光值設(shè)置范圍1/10000S～60S）Olympus顯微數(shù)字照相DP50操作步驟：⑨9.

拍攝，圖⑨按下按鈕，圖像拍攝完成10.

檢查所拍攝圖像的質(zhì)量11.保存圖像（tiff格式）在數(shù)碼顯微攝影中應(yīng)注意的問題：1、設(shè)定白平衡

根據(jù)拍攝對(duì)象，預(yù)先校正白平衡，防止所拍攝圖像出現(xiàn)偏色。2、選擇曝光時(shí)間

手動(dòng)曝光時(shí)，通常選用曝光時(shí)間在1/240S～1/30S之間。3、選擇曝光模式常用的曝光模式有：Fine/Quick;手動(dòng)/自動(dòng)。Fine模式下能得到質(zhì)量?jī)?yōu)良的圖像，但在觀察活體標(biāo)本時(shí)則優(yōu)先選擇Quick模式，此時(shí)，快速捕捉模式得到的圖像質(zhì)量會(huì)更好。4、選擇圖像大小一般的軟件均有可供選擇的圖像大?。?40×480，1024×768，1280×1024，2250×1800等等；分辨率大則圖像所占空間就大，則反之。5、捕捉與保存圖像選擇質(zhì)量好的圖像及時(shí)捕捉，保存圖像要對(duì)文件名指定文件格式、保存路徑等。3.7

數(shù)碼顯微圖像的處理技術(shù)

（了解Photoshop軟件功能）

Photoshop圖像處理軟件功能強(qiáng)大，實(shí)用而有效，是處理、編輯圖像最常用的軟件。經(jīng)顯微鏡采集的圖像一般需進(jìn)行處理，如對(duì)圖像進(jìn)行裁剪、編輯、添加文字符號(hào)等等，使之符合我們編寫鑒定報(bào)告、發(fā)表科學(xué)論文的要求。Photoshop工作區(qū)菜單欄選項(xiàng)欄工具箱現(xiàn)用圖像區(qū)域調(diào)板Photoshop主要功能使用一、圖像的調(diào)整：

1.圖像大小的調(diào)整2.畫面的旋轉(zhuǎn)3.畫布大小的調(diào)整4.畫面的剪裁二、圖像色彩調(diào)整（在色彩調(diào)整前必須保證顯示器的顏色準(zhǔn)確）1.色階調(diào)整（可以重新安排畫面色彩亮度水平分布）2.曲線工具（利用“曲線”可以在圖像的整個(gè)色調(diào)范圍內(nèi)最多調(diào)整14個(gè)不同的點(diǎn)）3.色相/飽和度的調(diào)整4.亮度/對(duì)比度的調(diào)整5.色彩平衡調(diào)整Photoshop主要功能使用三、圖像素材的取舍：

1.使用選擇菜單2.利用套繩工具進(jìn)行選擇（套繩、多邊套繩、磁性套繩）3.利用魔術(shù)棒進(jìn)行選擇四、圖像的修飾1.利用仿制圖章工具2.利用修復(fù)畫筆工具3.利用涂抹工具五、添加文字六、電子圖版的制作1、電子圖版的格式：國(guó)內(nèi)的期刊要求提供TIFF格式的圖版國(guó)外的期刊要求提供TIFF或EPS格式的圖版2、圖版尺寸：圖版的大小與期刊版面有關(guān)，16開版面(185mm×260mm)，圖版尺寸為15cm×21cm；大16開版面(210mm×285mm)，圖版尺寸為17cm×22cm。3、分辨率：用于出版的圖片其分辨率必須達(dá)到每英寸300個(gè)像素或更高。4、圖片的選擇：對(duì)于顯微圖像，應(yīng)選擇代表性強(qiáng)、特征明顯，圖像清晰的圖片；一般同品種編輯到同一圖版中。在圖版布置上，主要特征應(yīng)放在圖版的上方與中間位置，次要特征則放在偏圖版下方的位置。六、電子圖版的制作5、統(tǒng)一圖像的分辨率不同來(lái)源的圖像分辨率可能不同，數(shù)碼相機(jī)拍