FISH相關(guān)技術(shù)及其應(yīng)用

1ppt課件FISH相關(guān)技術(shù)及其應(yīng)用1ppt課件熒光原位雜交FluorescenceinsituHybridization(FISH)FISH-aprocesswhichvividlypaintschromosomesorportionsofchromosomeswithfluorescentmolecules熒光原位雜交是一個(gè)可以用熒光分子將染色體或部分染色體涂染的過程identifythepresenceandlocationofaregionofDNAwithinmorphologicallypreservedchromosomepreparations,thencanidentifieschromosomalabnormalities在保持染色體形態(tài)的基礎(chǔ)上識(shí)別某一段DNA存在與否、位置是否改變，因此可識(shí)別染色體異常oftenusedduringMphasebutisnowusedoninterphaseaswell常用于中期分裂相的分析，現(xiàn)在也用于間期細(xì)胞的分析2ppt課件熒光原位雜交FluorescenceinsituHy熒光原位雜交優(yōu)勢(shì):

lesslabor-intensivemethod省時(shí)省力forconfirmingthepresenceofaDNAsegmentwithinanentiregenomethanotherconventionalmethods相比于在基因組中證實(shí)DNA片段存在的其他常規(guī)方法3ppt課件熒光原位雜交優(yōu)勢(shì):lesslabor-intensiFISH操作步驟Denaturethechromosomes染色體變性Denaturetheprobe探針變性Hybridization雜交Fluorescencestaining熒光染色Examineslidesorstoreinthedark顯微分析4ppt課件FISH操作步驟Denaturethechromoso探針類型5ppt課件探針類型5ppt課件Yq12重復(fù)序列探針6ppt課件Yq12重復(fù)序列探針6ppt課件重復(fù)序列探針-14、22著絲粒7ppt課件重復(fù)序列探針-14、22著絲粒7ppt課件單色FISH-1號(hào)著絲粒探針8ppt課件單色FISH-1號(hào)著絲粒探針8ppt課件單色FISH(端粒探針)9ppt課件單色FISH(端粒探針)9ppt課件位點(diǎn)特異性探針10ppt課件位點(diǎn)特異性探針10ppt課件全染色體探針11ppt課件全染色體探針11ppt課件雙色FISH12ppt課件雙色FISH12ppt課件多色熒光原位雜交13ppt課件多色熒光原位雜交13ppt課件SpectralKaryotyping(SKY)光譜核型分析14ppt課件SpectralKaryotyping(SKY)光譜核型24色FISH15ppt課件24色FISH15ppt課件多色FISH（著絲粒和端粒特異性探針）16ppt課件多色FISH（著絲粒和端粒特異性探針）16ppt課件M-FISH（染色體條帶特異性探針）17ppt課件M-FISH（染色體條帶特異性探針）17ppt課件IB665B376B12IB568D11S4170D11S1348D11S921D11S1322D11S935D11S4045D11S3969D11S1779D11S1330B344A5D11S4205IB3011D11S4172D11S1362AFM337TC5D11S4143D11S1886D11S1343D11S4078D11S1793D11S4129D11S4107D11S4089D11S4402D11S4094D11S4399B1005B31111.111.2111.2213.213.313.1242514.214.314.113.413.52112131415.115.215.315.415.5111222.322.222.123.223.123.318ppt課件IB6651111.111.2111.2213.213.31間期FISH19ppt課件間期FISH19ppt課件

CompositeMouseKaryotypewithCentromeric&TelomericEndsoftheGeneticMaps

20ppt課件CompositeMouseKaryotypewiMouseChromosome16telBACDetectingMouseTrisomy1621ppt課件MouseChromosome16telBAC21小鼠三色FISH22ppt課件小鼠三色FISH22ppt課件FISH在輻射生物損傷檢測(cè)中的應(yīng)用23ppt課件23ppt課件背景放射醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)毙哉丈涫鹿屎蠖唐趦?nèi)用非穩(wěn)定性染色體畸變（dic+r）進(jìn)行劑量估算是目前的“金標(biāo)準(zhǔn)”；對(duì)于早先受照和慢性受照，由于dic+r影響細(xì)胞分裂而丟失，用于易位分析有較大的限制；染色體易位不影響細(xì)胞分裂，不會(huì)隨細(xì)胞分裂而丟失，理論上電離輻射誘導(dǎo)的dic和易位是相同的，因此染色體易位畸變分析可能用于回顧性劑量估算；24ppt課件背景放射醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)毙哉丈涫鹿屎蠖唐趦?nèi)用非穩(wěn)定性染色體畸變?nèi)旧w易位畸變的分析G顯帶：步驟繁瑣、帶型不易控制、分析比較難熒光原位雜交（FISH）25ppt課件染色體易位畸變的分析G顯帶：步驟繁瑣、帶型不易控制、分析比較FISH在放射醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用形式：染色體彩涂(ChromosomePainting)，或者加泛著絲粒探針應(yīng)用：原爆幸存者、切爾諾貝利核電站受照人員、清掃工人、前蘇聯(lián)Techa河周圍居民(Mayak核設(shè)施傾倒核廢料)、英國Sellafield核設(shè)施工作人員、巴西Goiana事故受照人員26ppt課件FISH在放射醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用形式：染色體彩涂(ChromosoFISH估算劑量的方法建立吸收劑量與基因組易位率的劑量效應(yīng)曲線(標(biāo)準(zhǔn)曲線);分析和計(jì)算要估算劑量人員的外周血淋巴細(xì)胞的基因組易位率；參照標(biāo)準(zhǔn)曲線估算全身吸收劑量27ppt課件FISH估算劑量的方法建立吸收劑量與基因組易位率的劑量效應(yīng)曲Lucas公式PAINT方法僅分析少數(shù)幾條染色體，觀察到的易位率轉(zhuǎn)化成全基因組易位率，參照公式：Fp=2.05fp(1-fp)FGFp:FISH分析觀察到的染色體易位率FG:全基因組染色體易位率fp:探針涉及的染色體占整個(gè)基因組的份額28ppt課件Lucas公式PAINT方法僅分析少數(shù)幾條染色體，觀察到雙色：Fp=2.05[fg(1-fg)+fr(1-fr)-fgfr]FG三色：Fp=2.05[fg(1-fg)+fr(1-fr)+fy(1-fy)-(fgfr+fgfy+frfy]FG29ppt課件雙色：29ppt課件應(yīng)用的假設(shè)輻射所誘導(dǎo)的染色體易位率是保持不變的，至少變化很小；雙著絲粒和易位均發(fā)生在兩條不同染色體的兩個(gè)斷裂上，輻射造成的斷裂點(diǎn)在染色體上分布是隨機(jī)的，斷裂點(diǎn)的重接也是隨機(jī)的，雙著絲粒和易位的發(fā)生率應(yīng)相當(dāng)。染色體畸變?cè)谌旧w上和染色體間的分布是隨機(jī)的，每條染色體發(fā)生畸變的概率應(yīng)與染色體長度成正比30ppt課件應(yīng)用的假設(shè)輻射所誘導(dǎo)的染色體易位率是保持不變的，至少變化很小影響因素年齡、吸煙與否：自發(fā)易位頻率

19－49歲為新生兒的3倍，50－79歲老年人是新生兒的10倍，作者認(rèn)為在低于50歲時(shí)，染色體自發(fā)易位頻率與年齡成直線關(guān)系，但從50－60歲開始，自發(fā)易位頻率顯著增高，偏離直線，吸煙者偏離更大。Lucas對(duì)35名健康對(duì)照(0－98歲)的自發(fā)染色體易位頻率進(jìn)行分析，認(rèn)為自發(fā)易位頻率與年齡不是直線關(guān)系，而為二次方程模式。

不能定論31ppt課件影響因素年齡、吸煙與否：自發(fā)易位頻率31ppt課件用PAINT估算劑量的限制性標(biāo)準(zhǔn)曲線大多為急性照射的；易位是否穩(wěn)定存在？細(xì)胞壽命(長壽命6年)、復(fù)雜易位10年左右基本穩(wěn)定染色體發(fā)生畸變的概率是否與染色體長度成正比有些小片段的易位會(huì)錯(cuò)誤地計(jì)為正常：分辨率－－最小彩染片段為11.1±0.08Mb，未彩染片段為14.6±0.6Mb32ppt課件用PAINT估算劑量的限制性標(biāo)準(zhǔn)曲線大多為急性照射的；32p染色體涂染（ChromosomePAINTING）RERF33ppt課件染色體涂染RERF33ppt課件多色FISH方法Biotin標(biāo)記----綠色熒光Dig-標(biāo)記----紅色熒光Biotin+Dig-標(biāo)記----黃色熒光34ppt課件多色FISH方法Biotin標(biāo)記----綠色熒光34ppt課雙著絲粒和易位FDicNormal8TrTrDic+F(7:9)Translocation(8:other)35ppt課件雙著絲粒和易位FDicNormal8TrTrDic+F(問題應(yīng)用方面的工作方法的實(shí)施：21個(gè)BAC探針的平衡問題推廣的難度與PAINT方法的比較？36ppt課件問題應(yīng)用方面的工作36ppt課件研究內(nèi)容比較本實(shí)驗(yàn)室建立的FISH方法和PAINT方法建立的劑量效應(yīng)曲線：給予正常外周血樣品離體照射一系列的劑量（0~5Gy），制備染色體標(biāo)本，用本室建立的端粒和著絲粒組合的方法（用1、2或4號(hào)染色體）進(jìn)行分析，建立劑量-效應(yīng)曲線，與已經(jīng)建立的PAINT劑量-效應(yīng)曲線進(jìn)行比較；在實(shí)際劑量估算應(yīng)用中比較：收集早先事故病人（受照后短期內(nèi)有生物劑量）的外周血，制備染色體標(biāo)本，用兩種方法進(jìn)行分析，進(jìn)行劑量估算。37ppt課件研究內(nèi)容比較本實(shí)驗(yàn)室建立的FISH方法和PAINT方法建立的BACFISH方法觀察到的染色體易位正常中期分裂相4號(hào)染色體易位38ppt課件BACFISH方法觀察到的染色體易位正常中期分裂相4號(hào)染色用BACFISH分析05.00Gy60Co射線誘導(dǎo)的染色體易位

39ppt課件用BACFISH分析05.00Gy60Co射線誘導(dǎo)用BACFISH分析05.00Gy60Co射線誘導(dǎo)的染色體易位劑量效應(yīng)曲線Y=0.043D2+0.0008D+0.0048R2＝0.9997

40ppt課件用BACFISH分析05.00Gy60Co射線誘導(dǎo)用染色體涂染方法觀察到的染色體易位正常中期分裂相發(fā)生染色體易位41ppt課件用染色體涂染方法觀察到的染色體易位正常中期分裂相發(fā)生染色體易用染色體涂染方法分析05.00Gy60Co射線離體照射誘發(fā)的淋巴細(xì)胞染色體易位

42ppt課件用染色體涂染方法分析05.00Gy60Co射線離體照用染色體涂染方法建立的05.00Gy60Co射線離體照射誘發(fā)淋巴細(xì)胞染色體易位劑量效應(yīng)曲線Y=0.043D2+0.006D+0.0036R2＝0.9998

43ppt課件用染色體涂染方法建立的05.00Gy60Co射線離體兩個(gè)曲線方程的比較BACFISH：Y=0.043D2+0.0008D+0.0048

R2＝0.9997PAINT：Y=0.043D2+0.006D+0.0036R2＝0.999844ppt課件兩個(gè)曲線方程的比較BACFISH：Y=0.043D2+早先事故病人的劑量估算45ppt課件早先事故病人的劑量估算45ppt課件結(jié)論用1、2和4號(hào)染色體端粒和著絲粒的BACFISH和PAINT方法建立的輻射誘發(fā)染色體易位的劑量-效應(yīng)曲線方程系數(shù)相同；初步研究兩種方法進(jìn)行回顧性劑量重建相差不大，但需要進(jìn)一步研究的驗(yàn)證46ppt課件結(jié)論用1、2和4號(hào)染色體端粒和著絲粒的BACFISH和PA47ppt課件47ppt課件48ppt課件48ppt課件小結(jié)事故受照人員在照后十年內(nèi)用FISH方法來進(jìn)行回顧性劑量重建，所得到的生物劑量是可靠的；FISH用于事故劑量分析仍需大量的工作。49ppt課件小結(jié)事故受照人員在照后十年內(nèi)用FISH方法來進(jìn)行回顧性劑量重謝謝！50ppt課件謝50ppt課件此課件下載可自行編輯修改，供參考！感謝您的支持，我們努力做得更好！此課件下載可自行編輯修改，供參考！此課件下載可自行編輯修改，供參考！感謝您的支持，我們努力做得更好！此課件下載可自行編輯修改，供參考！FISH相關(guān)技術(shù)及其應(yīng)用

53ppt課件FISH相關(guān)技術(shù)及其應(yīng)用1ppt課件熒光原位雜交FluorescenceinsituHybridization(FISH)FISH-aprocesswhichvividlypaintschromosomesorportionsofchromosomeswithfluorescentmolecules熒光原位雜交是一個(gè)可以用熒光分子將染色體或部分染色體涂染的過程identifythepresenceandlocationofaregionofDNAwithinmorphologicallypreservedchromosomepreparations,thencanidentifieschromosomalabnormalities在保持染色體形態(tài)的基礎(chǔ)上識(shí)別某一段DNA存在與否、位置是否改變，因此可識(shí)別染色體異常oftenusedduringMphasebutisnowusedoninterphaseaswell常用于中期分裂相的分析，現(xiàn)在也用于間期細(xì)胞的分析54ppt課件熒光原位雜交FluorescenceinsituHy熒光原位雜交優(yōu)勢(shì):

lesslabor-intensivemethod省時(shí)省力forconfirmingthepresenceofaDNAsegmentwithinanentiregenomethanotherconventionalmethods相比于在基因組中證實(shí)DNA片段存在的其他常規(guī)方法55ppt課件熒光原位雜交優(yōu)勢(shì):lesslabor-intensiFISH操作步驟Denaturethechromosomes染色體變性Denaturetheprobe探針變性Hybridization雜交Fluorescencestaining熒光染色Examineslidesorstoreinthedark顯微分析56ppt課件FISH操作步驟Denaturethechromoso探針類型57ppt課件探針類型5ppt課件Yq12重復(fù)序列探針58ppt課件Yq12重復(fù)序列探針6ppt課件重復(fù)序列探針-14、22著絲粒59ppt課件重復(fù)序列探針-14、22著絲粒7ppt課件單色FISH-1號(hào)著絲粒探針60ppt課件單色FISH-1號(hào)著絲粒探針8ppt課件單色FISH(端粒探針)61ppt課件單色FISH(端粒探針)9ppt課件位點(diǎn)特異性探針62ppt課件位點(diǎn)特異性探針10ppt課件全染色體探針63ppt課件全染色體探針11ppt課件雙色FISH64ppt課件雙色FISH12ppt課件多色熒光原位雜交65ppt課件多色熒光原位雜交13ppt課件SpectralKaryotyping(SKY)光譜核型分析66ppt課件SpectralKaryotyping(SKY)光譜核型24色FISH67ppt課件24色FISH15ppt課件多色FISH（著絲粒和端粒特異性探針）68ppt課件多色FISH（著絲粒和端粒特異性探針）16ppt課件M-FISH（染色體條帶特異性探針）69ppt課件M-FISH（染色體條帶特異性探針）17ppt課件IB665B376B12IB568D11S4170D11S1348D11S921D11S1322D11S935D11S4045D11S3969D11S1779D11S1330B344A5D11S4205IB3011D11S4172D11S1362AFM337TC5D11S4143D11S1886D11S1343D11S4078D11S1793D11S4129D11S4107D11S4089D11S4402D11S4094D11S4399B1005B31111.111.2111.2213.213.313.1242514.214.314.113.413.52112131415.115.215.315.415.5111222.322.222.123.223.123.370ppt課件IB6651111.111.2111.2213.213.31間期FISH71ppt課件間期FISH19ppt課件

CompositeMouseKaryotypewithCentromeric&TelomericEndsoftheGeneticMaps

72ppt課件CompositeMouseKaryotypewiMouseChromosome16telBACDetectingMouseTrisomy1673ppt課件MouseChromosome16telBAC21小鼠三色FISH74ppt課件小鼠三色FISH22ppt課件FISH在輻射生物損傷檢測(cè)中的應(yīng)用75ppt課件23ppt課件背景放射醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)毙哉丈涫鹿屎蠖唐趦?nèi)用非穩(wěn)定性染色體畸變（dic+r）進(jìn)行劑量估算是目前的“金標(biāo)準(zhǔn)”；對(duì)于早先受照和慢性受照，由于dic+r影響細(xì)胞分裂而丟失，用于易位分析有較大的限制；染色體易位不影響細(xì)胞分裂，不會(huì)隨細(xì)胞分裂而丟失，理論上電離輻射誘導(dǎo)的dic和易位是相同的，因此染色體易位畸變分析可能用于回顧性劑量估算；76ppt課件背景放射醫(yī)學(xué)領(lǐng)域?qū)毙哉丈涫鹿屎蠖唐趦?nèi)用非穩(wěn)定性染色體畸變?nèi)旧w易位畸變的分析G顯帶：步驟繁瑣、帶型不易控制、分析比較難熒光原位雜交（FISH）77ppt課件染色體易位畸變的分析G顯帶：步驟繁瑣、帶型不易控制、分析比較FISH在放射醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用形式：染色體彩涂(ChromosomePainting)，或者加泛著絲粒探針應(yīng)用：原爆幸存者、切爾諾貝利核電站受照人員、清掃工人、前蘇聯(lián)Techa河周圍居民(Mayak核設(shè)施傾倒核廢料)、英國Sellafield核設(shè)施工作人員、巴西Goiana事故受照人員78ppt課件FISH在放射醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用形式：染色體彩涂(ChromosoFISH估算劑量的方法建立吸收劑量與基因組易位率的劑量效應(yīng)曲線(標(biāo)準(zhǔn)曲線);分析和計(jì)算要估算劑量人員的外周血淋巴細(xì)胞的基因組易位率；參照標(biāo)準(zhǔn)曲線估算全身吸收劑量79ppt課件FISH估算劑量的方法建立吸收劑量與基因組易位率的劑量效應(yīng)曲Lucas公式PAINT方法僅分析少數(shù)幾條染色體，觀察到的易位率轉(zhuǎn)化成全基因組易位率，參照公式：Fp=2.05fp(1-fp)FGFp:FISH分析觀察到的染色體易位率FG:全基因組染色體易位率fp:探針涉及的染色體占整個(gè)基因組的份額80ppt課件Lucas公式PAINT方法僅分析少數(shù)幾條染色體，觀察到雙色：Fp=2.05[fg(1-fg)+fr(1-fr)-fgfr]FG三色：Fp=2.05[fg(1-fg)+fr(1-fr)+fy(1-fy)-(fgfr+fgfy+frfy]FG81ppt課件雙色：29ppt課件應(yīng)用的假設(shè)輻射所誘導(dǎo)的染色體易位率是保持不變的，至少變化很??；雙著絲粒和易位均發(fā)生在兩條不同染色體的兩個(gè)斷裂上，輻射造成的斷裂點(diǎn)在染色體上分布是隨機(jī)的，斷裂點(diǎn)的重接也是隨機(jī)的，雙著絲粒和易位的發(fā)生率應(yīng)相當(dāng)。染色體畸變?cè)谌旧w上和染色體間的分布是隨機(jī)的，每條染色體發(fā)生畸變的概率應(yīng)與染色體長度成正比82ppt課件應(yīng)用的假設(shè)輻射所誘導(dǎo)的染色體易位率是保持不變的，至少變化很小影響因素年齡、吸煙與否：自發(fā)易位頻率

19－49歲為新生兒的3倍，50－79歲老年人是新生兒的10倍，作者認(rèn)為在低于50歲時(shí)，染色體自發(fā)易位頻率與年齡成直線關(guān)系，但從50－60歲開始，自發(fā)易位頻率顯著增高，偏離直線，吸煙者偏離更大。Lucas對(duì)35名健康對(duì)照(0－98歲)的自發(fā)染色體易位頻率進(jìn)行分析，認(rèn)為自發(fā)易位頻率與年齡不是直線關(guān)系，而為二次方程模式。

不能定論83ppt課件影響因素年齡、吸煙與否：自發(fā)易位頻率31ppt課件用PAINT估算劑量的限制性標(biāo)準(zhǔn)曲線大多為急性照射的；易位是否穩(wěn)定存在？細(xì)胞壽命(長壽命6年)、復(fù)雜易位10年左右基本穩(wěn)定染色體發(fā)生畸變的概率是否與染色體長度成正比有些小片段的易位會(huì)錯(cuò)誤地計(jì)為正常：分辨率－－最小彩染片段為11.1±0.08Mb，未彩染片段為14.6±0.6Mb84ppt課件用PAINT估算劑量的限制性標(biāo)準(zhǔn)曲線大多為急性照射的；32p染色體涂染（ChromosomePAINTING）RERF85ppt課件染色體涂染RERF33ppt課件多色FISH方法Biotin標(biāo)記----綠色熒光Dig-標(biāo)記----紅色熒光Biotin+Dig-標(biāo)記----黃色熒光86ppt課件多色FISH方法Biotin標(biāo)記----綠色熒光34ppt課雙著絲粒和易位FDicNormal8TrTrDic+F(7:9)Translocation(8:other)87ppt課件雙著絲粒和易位FDicNormal8TrTrDic+F(問題應(yīng)用方面的工作方法的實(shí)施：21個(gè)BAC探針的平衡問題推廣的難度與PAINT方法的比較？88ppt課件問題應(yīng)用方面的工作36ppt課件研究內(nèi)容比較本實(shí)驗(yàn)室建立的FISH方法和PAINT方法建立的劑量效應(yīng)曲線：給予正常外周血樣品離體照射一系列的劑量（0~5Gy），制備染色體標(biāo)本，用本室建立的端粒和著絲粒組合的方法（用1、2或4號(hào)染色體）進(jìn)行分析，建立劑量-效應(yīng)曲線，與已經(jīng)建立的PAINT劑量-效應(yīng)曲線進(jìn)行比較；在實(shí)際劑量估算應(yīng)用中比較：收集早先事故病人（受照后短期內(nèi)有生物劑量）的外周血，制備染色體標(biāo)本，用兩種方法進(jìn)行分析，進(jìn)行劑量估算。89ppt課件研究內(nèi)容比較本實(shí)驗(yàn)室建立的FISH方法和PAINT方法建立的BACFISH方法觀察到的染色體易位正常中期分裂相4號(hào)染色體易位90ppt課件BACFISH方法觀察到的染色體易位正常中期分裂相4號(hào)染色用BACFISH分析05.00Gy60Co射線誘導(dǎo)的染色體易位