酪蛋白磷酸肽-無定形磷酸鈣對酸蝕牙釉質(zhì)顯微硬度的影響喻明玲，林居紅，胡赟（401147重慶，重慶醫(yī)科大學(xué)附屬口腔醫(yī)院兒童牙病中心及口腔預(yù)防科，重慶市口腔疾病與生物醫(yī)學(xué)研究中心）[摘要]目的用顯微硬度測量法研究酪蛋白磷酸肽-無定形磷酸鈣（CPP-ACP）對碳酸飲料酸蝕后的牙釉質(zhì)的再礦化作用。方法收集臨床拔除的第三磨牙共15顆,制成牙釉質(zhì)樣本30個，隨機分為：去離子水組、CPP-ACP組、氟保護漆組，每組10個樣本。各組樣本分別用可樂酸蝕,每天7次,每次2分鐘,8小時內(nèi)完成，共7天，然后分別進行再礦化處理。去離子水組置于去離子水中，不做其他處理；CPP-ACP組和氟保護漆組分別用CPP-ACP和氟保護漆處理。分別在酸蝕前、酸蝕后和再礦化后用維氏顯微硬度計測定釉質(zhì)表面硬度。數(shù)據(jù)使用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包進行單因素方差分析(ANOVA)。結(jié)果經(jīng)可樂酸蝕后的牙釉質(zhì)表面硬度值較酸蝕前有明顯下降(P<0.05)；經(jīng)再礦化處理后，CPP-ACP組和氟保護漆組牙釉質(zhì)表面硬度值與對照組相比均有明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)；且CPP-ACP組和氟保護漆組之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論顯微硬度測定實驗結(jié)果顯示CPP-ACP能夠提高酸蝕牙釉質(zhì)的顯微硬度，能顯著地促進酸蝕釉質(zhì)再礦化。[關(guān)鍵詞]牙酸蝕癥；酪蛋白磷酸肽-無定形磷酸鈣；顯微硬度；再礦化[中圖分類號]R783.1[文獻標志碼]AEffectofcaseinphosphopeptide-amorphouscalciumphosphateonmicrohardnessoferosivedenamelYuMingling,LinJuhong,HuYun(DepartmentofChildren'sDentalCenterandDentalPrevention,ChongqingResearchCenterforOralDiseasesandBiomedicalScience,AffiliatedHospitalofStomatology,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing,401147,China)[Abstract]ObjectiveThisinvitrostudyusedsurfacemicrohardnesstoevaluatetheremineralizationpotentialofcaseinphosphopeptide-amorphouscalciumphosphate(CPP-ACP)onhumanenamelerodedbyacarbonatedsoftdrink.MethodsFifteenthethirdmolarswerecollectedatclinicandwereprocessedintoenamelslabs.Theenamelslabswererandomlydividedinto3groups(n=10):groupdeionizedwater,groupCPP-ACP,groupfluoridevanish.Eachspecimenwasfirstimmersedinacoladrinkfor2min,seventimesadaycomplishedin8hours,intotal7days.Thenthespecimensweresubjectedtothreedifferentremineralizationprotocolsusing:deionizedwater,CPP-ACPandfluoridevanish.Vickersmicrohardnessmeasurementswereobtainedatbaseline,afterthecoladrinkerosion,andafterremineralizationstage.One-wayANOVAwasusedforstatisticalanalyses.ResultsEnamelhardnesssignificantlydecreasedafterimmersioninacoladrink(P<0.05).TheSMHoftheenamelslabtreatedwithCPP-ACPandfluoridevanishwassignificantlyincreasedcomparedwiththatofthecontrol(P<0.05)andtherewassignificantdifferencebetweenthetwogroups(P<0.05).ConclusionCPP-ACPcanincreasetheSMHoftheerodedhumanenamel,showingtheremineralizationpotential.[Keywords]dentalerosion;caseinphosphopeptide-amorphouscalciumphosphate;SurfaceMicrohardness;RemineralizationSupportedbytheMedicalScienceandTechnologyResearchProjectofChongqingMunicipalHealthBureau(2012-2-126).Correspondingauthor:LinJuhong,Tel:86-23-88860090,E-mail:juhonglin@[基金項目]重慶市衛(wèi)生局2012年醫(yī)學(xué)科研計劃項目（2012-2-126）

[通訊作者]：林居紅，電話：（023）88860090，E-mail:juhonglin@牙酸蝕癥(dentalerosion)是指無細菌參與的情況下，由接觸牙面的酸或其螯合物的化學(xué)侵蝕作用而引起的牙體硬組織的慢性、病理性的牙體硬組織表面淺層喪失[1]。近年來，隨著酸性飲料消費的增加，在兒童及青少年，飲用酸性飲料成為造成牙酸蝕癥的主要危險因素，其發(fā)病率從30%~70%都有報道[2]。早期及時、有效地使用再礦化制劑可使脫礦釉質(zhì)再礦化而預(yù)防軟化牙釉質(zhì)的繼續(xù)喪失，有利于保持牙面的完整性。氟化物作為再礦化制劑長期應(yīng)用于臨床，但其使用安全性一直存在爭議。近年來，酪蛋白磷酸肽-無定形磷酸鈣(caseinphosphopeptide-amorphouscalciumphosphate，CPP-ACP)受到廣泛關(guān)注。CPP-ACP含有高濃度的具有生物活性的鈣、磷離子，無毒副作用，并且有報道指出它有抑制脫礦、促進再礦化的作用。本研究通過體外實驗比較CPP-ACP和氟保護漆作用于飲料酸蝕牙釉質(zhì)前后顯微硬度的變化，評價CPP-ACP對酸蝕牙釉質(zhì)的作用。1材料與方法1.1材料及設(shè)備CPP-ACP(ToothMousse,日本GC公司)，氟保護漆(牙科學(xué)柯伯脂含氟涂膜C型，北京鑫源恒信醫(yī)療器械有限公司，含NaF5000ppm)，可口可樂(重慶可口可樂飲料有限公司，pH2.42)，人工唾液(人工唾液配方采用ISO/TR10271：1993標準)，HVS-1000型數(shù)顯顯微硬度計(上海聯(lián)爾試驗設(shè)備有限公司)。1.2實驗方法1.2.1樣本的制備及酸蝕處理收集牙冠完整，因阻生拔除的下頜第三磨牙，體視鏡下選擇釉質(zhì)表面無齲壞、無脫礦、無隱裂、無氟斑及釉質(zhì)缺損的牙共15顆，清潔牙面，沿牙長軸近遠中向切開制備樣本30個。所有樣本包埋于環(huán)氧樹脂中，釉質(zhì)表面暴露，分別制成高10mm，直徑25mm大小的圓柱體標本，用碳硅砂紙將釉質(zhì)表面由粗至細打磨（粒度為800目、1000目、1200目、1500目、2000目），使之呈鏡面狀。在磨平釉面處留出4mm×4mm的正方形開窗區(qū),其余部分用抗酸指甲油涂抹封閉。將30個釉質(zhì)樣本隨機分為3組（n=10），對照組、CPP-ACP組和氟保護漆組。飲料選用市售瓶裝碳酸飲料可口可樂(pH=2.42)，三組樣本分別浸泡于100ml飲料中，每次2分鐘，每天7次，于8小時內(nèi)完成，共7天，間斷期置于37℃人工唾液中。每次浸泡更換新鮮可口可樂，人工唾液每24小時更換一次。7天后，將可口可樂酸蝕過的三組樣本用去離子水沖洗，吸干表面水分，放于去離子水中備用。1.2.2再礦化實驗去離子水組：去離子水處理，每天2次，每次3分鐘，共7天；CPP-ACP組：按照產(chǎn)品使用說明，用小毛刷蘸日本GCToothMousse均勻涂布于開窗處釉質(zhì)表面，靜置3分鐘，然后去離子水沖洗，每天2次，共7天；氟保護漆組：按照廠商推薦使用方法，小毛刷蘸氟保護漆均勻涂布于開窗處釉質(zhì)表面，靜置3分鐘，去離子水沖洗，每天1次，共1天。間斷期置于37℃人工唾液中，每24小時更換一次人工唾液。1.2.3釉質(zhì)表面顯微硬度測量分別在酸蝕前、酸蝕后、再礦化實驗后測量牙釉質(zhì)表面顯微硬度（surfacemicrohardness,SMH），使用HVS-1000型維氏數(shù)字顯微硬度計，200克負荷，加載10秒。每個釉質(zhì)塊測量3個點，取其平均值。1.3統(tǒng)計學(xué)分析所得數(shù)據(jù)使用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行分析。運用自身配對t檢驗對各組實驗前后表面顯微硬度值進行比較，使用ANOVA方差分析對3組樣本實驗前后的顯微硬度值進行分析，使用SNK法進行兩兩比較,檢驗水準，=0.05。2結(jié)果組別酸蝕前酸蝕后再礦化后去離子水組CPP-ACP組氟保護漆組348.7±10.9349.9±18.7346.1±14.6268.2±13.4271.0±18.7270.0±16.3276.1±14.5339.3±19.1ab321.4±17.4a表1牙釉質(zhì)酸蝕前、酸蝕后及再礦化后表面顯微硬度值(HV,n=10,x±s)a：P<0.05，與空白對照組比較；b：P<0.05,與氟保護漆組比較三組牙釉質(zhì)樣本酸蝕前、酸蝕后和再礦化后表面顯微硬度值見表1。酸蝕前三組間牙釉質(zhì)SMH差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；經(jīng)過7天可口可樂處理后，三組釉質(zhì)SMH均較酸蝕前明顯降低，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，但酸蝕后三組間牙釉質(zhì)SMH差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。與對照組（去離子水組）相比，經(jīng)CPP-ACP和氟保護漆分別處理后的CPP-ACP組和氟保護漆組的牙釉質(zhì)SMH均比酸蝕后的顯著上升，其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，同時CPP-ACP組和氟保護漆組間的SMH差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。3討論大量研究證實，許多酸性飲料的pH值介于2.2-4.9之間，而牙釉質(zhì)脫礦的臨界pH值為5.0-5.5[3]，酸性飲料能造成牙體硬組織脫礦、牙釉質(zhì)軟化以及牙體硬組織表面淺層喪失。近年來，國內(nèi)外大量的流行病學(xué)調(diào)查研究表明：酸蝕癥在人群中普遍存在，且發(fā)病率呈上升趨勢。陳亞剛等[4]對徐州市5歲和12歲兒童酸蝕癥患病情況調(diào)查發(fā)現(xiàn)，5歲兒童牙齒酸蝕癥的患病率為10.91%,12歲兒童牙齒酸蝕癥的患病率為22.14%，酸性飲料是造成牙酸蝕癥的主要危險因素。酸蝕癥在開始階段無自覺癥狀，隨后會出現(xiàn)牙本質(zhì)過敏癥狀，嚴重者出現(xiàn)牙髓暴露甚至牙折，而且酸蝕癥和齲病及磨損也密切相關(guān)，因而早期的干預(yù)和防治非常有必要。牙體硬組織在酸的作用下，其中的礦物質(zhì)發(fā)生溶解，鈣和磷酸鹽等無機離子脫出即為脫礦[5]。眾多研究表明，牙酸蝕癥的發(fā)生過程就是牙釉質(zhì)的脫礦過程。本實驗采用可口可樂作為脫礦劑建立牙酸蝕癥模型。有研究者通過體內(nèi)及體外實驗證實，牙釉質(zhì)經(jīng)過可樂酸蝕后會脫礦而導(dǎo)致表面顯微硬度下降[6-7]。實驗采用間斷可樂浸泡法，間斷期樣本浸泡于人工唾液中，置于37℃水浴恒溫箱，模擬了正常的口腔環(huán)境及飲用飲料的生活狀態(tài)，7天后測試3組牙釉質(zhì)表面顯微硬度，各組釉質(zhì)SMH較酸蝕前有明顯降低（P<0.05），說明可口可樂對牙釉質(zhì)的損害是肯定的。唾液中的鈣、磷及其他礦物離子不斷沉積在正?；虿糠置摰V的釉質(zhì)上，并形成羥基磷灰石的過程為再礦化[8]。在牙酸蝕癥早期，通過再礦化治療可阻止牙釉質(zhì)的持續(xù)尚失，預(yù)防齲病和磨損的發(fā)生，因此針對牙面酸蝕脫礦的早期再礦化治療有著積極的意義。氟化物在傳統(tǒng)的再礦化藥物中占了主導(dǎo)地位。牙面局部用氟后，在牙釉質(zhì)或牙本質(zhì)表面形成氟磷灰石或氟化鈣，從而促進了再礦化過程。有研究指出，低濃度的氟化物的再礦化作用并不明顯[9]。但是，局部高濃度氟化物的長期應(yīng)用可能導(dǎo)致耐氟菌株的選擇性生長[10]，且耐腐菌株的致齲力高于親代野生菌[11]；而且，高濃度氟化物使用的安全性問題存在爭議，因而尋求一種安全有效的再礦化制劑很有必要。酪蛋白磷酸肽(caseinphosphopeptides，CPP)是以牛乳酪蛋白為原料，通過生物技術(shù)制得的具有生物活性的多肽，有很強的促鈣吸收活性，它黏附在無定形磷酸鈣（amorphouscalciumphosphate，ACP）的表面形成毫微簇酪蛋白磷酸肽-無定形磷酸鈣復(fù)合體（caseinphosphopeptide-amorphouscalciumphosphate,CPP-ACP），抑制其進一步的成長而結(jié)晶成核，維持了鈣磷離子在溶液中的穩(wěn)定性，成為具有生物活性的鈣、磷離子的儲庫[12]。CPP-ACP通過粘附在牙面上釋放出具有生物活性的鈣磷離子，維持了一個對于牙釉質(zhì)面鈣磷離子的過飽和狀態(tài)，有抑制牙釉質(zhì)脫礦并促進再礦化的作用[13-14]。D.Tantbiroin等[6]通過體外酸蝕實驗以及SarbinRanjitkar等[15]通過體外酸蝕-磨損實驗均證實了CPP-ACP對脫礦釉質(zhì)的再礦化作用。目前，關(guān)于CPP-ACP和氟保護漆的再礦化能力比較的研究報道還比較少。本實驗采用表面顯微硬度測試法研究CPP-ACP對酸蝕釉質(zhì)的作用。因為釉質(zhì)的礦物質(zhì)含量與硬度之間存在線性關(guān)系，顯微硬度測試可以反映牙釉質(zhì)的一個脫礦和再礦化的情況[16]。實驗研究發(fā)現(xiàn)，CPP-ACP和氟保護漆均能使可樂酸蝕后的牙釉質(zhì)表面顯微硬度增加，有使酸蝕脫礦牙釉質(zhì)再礦化的能力,且CPP-ACP組的表面顯微硬度值高于氟保護漆組（P<0.05），這與其他學(xué)者的研究結(jié)果相似[17]。此實驗結(jié)果可能和兩種制劑的使用方法有關(guān)，根據(jù)產(chǎn)品說明，CPP-ACP可以每天使用兩次，而氟保護漆推薦每半年使用一次。氟保護漆含有高濃度氟離子（5000ppm），因其使用安全性問題，所以氟保護漆僅限于專業(yè)人員定期使用，而不能作為一般的口腔護理產(chǎn)品讓大眾日常使用，在一定程度上限制了其用于牙酸蝕癥預(yù)防的應(yīng)用。有學(xué)者推測，CPP-ACP在口內(nèi)情況下使用的效果會更好，因為獲得性膜的存在能使CPP-ACP更好地結(jié)合在牙面上成為鈣磷儲庫[18]，從而更好地起到抑制脫礦和促進再礦化的作用。CPP-ACP作為一種以鈣磷為基礎(chǔ)的制劑，無毒副作用。本實驗研究顯示了CPP-ACP可以顯著提高酸蝕牙釉質(zhì)的顯微硬度，是一種有效的再礦化制劑。這為脫礦釉質(zhì)的再礦化治療提供了新方向，也為飲用酸性飲料造成的牙酸蝕癥的早期防治提供一種新思路，但其確切作用機制及有效實際應(yīng)用仍待進一步研究。參考文獻：[1]LazarchikDA,FrazierKB.Dentalerosionandacidrefluxdisease:anoverview[J].GenDent,2009,57(2):151-156.[2]HarleyK.Toothwearinthechildandtheyouth[J].BrDentJ,1999,186(10):492-496.[3]DevlinH,BassiounyMA,BostonD.HardnessofenamelexposedtoCoca-Colaandartificialsaliva[J].JOralRehabil,2006,33(1):26-30.[4]陳亞剛,李雪,胡德渝等.徐州市5歲和12歲兒童酸蝕癥調(diào)查研究[J].華西口腔醫(yī)學(xué)雜志,2009,27(5):565-567.[5]行勇軍,劉魯川,韓旭.菌斑液對釉質(zhì)脫礦和表面超微結(jié)構(gòu)影響的體外研究[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2006,28(13):1409-1412.[6]TantbirojnD,HuangA,Erics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