第一節(jié)細(xì)胞培養(yǎng)是動物細(xì)胞工程的基礎(chǔ)第三章動物細(xì)胞過程2022/12/21890年，希普將安哥拉兔的胚胎移入比利時兔的輸卵管內(nèi)，得到了兩只安哥拉兔，這是世界上胚胎移植成功的首例1907年，哈里森用一滴淋巴液成功培養(yǎng)了蝌蚪的神經(jīng)元，首創(chuàng)了動物組織體外培養(yǎng)法1951年，張明覺等發(fā)現(xiàn)了哺乳動物精子的獲能現(xiàn)象1958年，格登用非洲爪蟾進行體細(xì)胞核移植實驗，成功培育出性成熟個體，同一時期，我國科學(xué)家童第周等開展了魚類細(xì)胞核移植工作1959年，試管家兔誕生，之后，多種試管動物相繼出生1975年，米爾斯坦和科勒等創(chuàng)立了單克隆抗體技術(shù)動物細(xì)胞工程（含胚胎工程）的發(fā)展歷程1978年，小鼠的桑椹胚被成功分割，次年，科學(xué)家分割綿羊胚胎獲得了同卵羔羊1981年，埃文斯等成功分離和培養(yǎng)了小鼠的胚胎干細(xì)胞1996年，世界上第一只體細(xì)胞克隆羊多莉在英國誕生，隨后多種克隆動物相繼問世2006年，山中伸彌等獲得了誘導(dǎo)多能干細(xì)胞，我國科學(xué)家用這種細(xì)胞培育出了小鼠2014年，世界上第一個用單細(xì)胞基因組測序進行遺傳病篩查的試管嬰兒在我國誕生2017年，我國科學(xué)家首次培育了體細(xì)胞克隆猴2022/12/2？從社會中來

在治療大面積燒傷時，通常采用的方法是取燒傷病人的健康皮膚進行自體移植。但對這樣的病人來說，自體健康皮膚非常有限，使用他人皮膚來源又不足，而且會產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。那么，怎樣才能獲得大量的自體健康皮膚？能不能用自體皮膚的單個細(xì)胞培養(yǎng)出可供移植的皮膚？通過細(xì)胞培養(yǎng)構(gòu)建的人造皮膚

可以從病人身上取少量正常、健康的皮膚在體外進行培養(yǎng)、擴增。目前，科學(xué)家還在研究對皮膚干細(xì)胞進行培養(yǎng)，以獲得適合臨床上使用的人造皮膚。1.動物細(xì)胞培養(yǎng)一、動物體細(xì)胞可在體外適宜條件下進行培養(yǎng)

從動物體獲得相關(guān)組織，分散成單個細(xì)胞后，在適宜環(huán)境下讓細(xì)胞生長和增殖的過程。（3）幼齡和老齡動物細(xì)胞、分化程度不同的細(xì)胞中，哪些細(xì)胞更易于培養(yǎng)？胚胎或幼齡動物的細(xì)胞較成體的細(xì)胞更易培養(yǎng)。（1）地位：動物細(xì)胞工程的基本技術(shù)（2）原理：細(xì)胞增殖（有絲分裂）2.動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件【資料1】培養(yǎng)的細(xì)胞就像體內(nèi)細(xì)胞一樣，需要一些基本的營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子，如氨基酸、葡萄糖、無機鹽、維生素、核苷酸等。不同組織來源的細(xì)胞需要不同的生長因子，而且需求量也不同，所以必須精心設(shè)計這些成分的搭配比例。充足的營養(yǎng)：

培養(yǎng)基中應(yīng)含有細(xì)胞所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)，通常還要添加血清。動物細(xì)胞培養(yǎng)基（合成培養(yǎng)基）的主要成分是什么？較植物組培培養(yǎng)基有何獨特之處？主要成分：（葡萄糖、氨基酸）、（水、無機鹽）、維生素和動物血清等。獨特之處有：1、液體培養(yǎng)基2、成分中有動物血清等1.培養(yǎng)動物細(xì)胞需要定期更換培養(yǎng)液,其目的是什么?

為防止細(xì)胞代謝產(chǎn)生的有毒物質(zhì)危害細(xì)胞,應(yīng)定期更換培養(yǎng)液。2.合成培養(yǎng)基是用人工方法模擬合成的,是否需要加入天然成分?為什么?

需要。由于人們并沒有完全了解動物細(xì)胞所需要的全部物質(zhì),因此需要在合成培養(yǎng)基中加入一定比例的血清或其他天然成分?！举Y料2】細(xì)菌、真菌和病毒等均可造成細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的污染，而離體培養(yǎng)的細(xì)胞已經(jīng)失去了對微生物和有毒物質(zhì)的防御能力，一旦受到污染或有毒自身代謝產(chǎn)物積累等，培養(yǎng)的細(xì)胞就會死亡。無菌、無毒環(huán)境：對培養(yǎng)液和培養(yǎng)用具進行滅菌、無菌環(huán)境下操作、同時培養(yǎng)液需定期更換，清除細(xì)胞代謝物，防止細(xì)胞代謝物積累對細(xì)胞造成傷害。

為保證培養(yǎng)基無菌、無毒,可以向培養(yǎng)基中加入什么物質(zhì)?

在培養(yǎng)基中加入抗生素,能抑制細(xì)菌和真菌的生長,從而預(yù)防污染。

【資料4】開放培養(yǎng)時一般把細(xì)胞置于95%空氣和5%二氧化碳組成的氣體環(huán)境中。氧氣參與細(xì)胞的呼吸作用，二氧化碳可以調(diào)節(jié)、維持培養(yǎng)基的pH。大多數(shù)細(xì)胞的適宜pH為7.2-7.4。氣體環(huán)境：氣體主要有O2和CO2，O2是細(xì)胞代謝所必需，CO2維持培養(yǎng)液PH。采用培養(yǎng)皿或松蓋培養(yǎng)瓶于95%空氣+5%CO2的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)?！举Y料3】人體細(xì)胞培養(yǎng)的標(biāo)準(zhǔn)溫度為36.5±0.5℃，偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝就會受到影響。培養(yǎng)的細(xì)胞對低溫的耐受能力高于對高溫的耐受力。適宜的溫度、pH和滲透壓：（36.5℃±0.5℃，pH（7.2-7.4）

取動物組織制成細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液進行原代培養(yǎng)分瓶進行傳代培養(yǎng)動物胚胎、幼齡動物機械法或胰蛋白酶、膠原蛋白酶處理將組織分散成單個細(xì)胞用培養(yǎng)液將細(xì)胞制成細(xì)胞懸液一類細(xì)胞能夠懸浮在培養(yǎng)液中生長增殖大多數(shù)需要貼附于某些基質(zhì)表面才能生長增殖直接用離心法收集重新用胰蛋白酶等處理，使之分散成單個細(xì)胞，然后再用離心法收集2022/12/23.動物細(xì)胞培養(yǎng)的過程接觸抑制現(xiàn)象——當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞通常會停止分裂。原代培養(yǎng)圓球形細(xì)胞剛開始鋪展貼壁生長（100×）培養(yǎng)的動物細(xì)胞貼壁生長,并進行有絲分裂（100×）細(xì)胞單層貼壁生長鋪滿瓶壁后,出現(xiàn)接觸抑制（100×）接觸抑制現(xiàn)象——當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長到表面相互接觸時，細(xì)胞通常會停止分裂。由于細(xì)胞之間有接觸抑制的特性，一般的正常細(xì)胞并不重疊于其他細(xì)胞之上生長，而是單層生長。癌細(xì)胞由于無接觸抑制而能夠繼續(xù)移動和增殖，導(dǎo)致細(xì)胞向三維空間擴展，發(fā)生堆積。是否接觸抑制可作為區(qū)別正常細(xì)胞與癌細(xì)胞的標(biāo)志之一。原代培養(yǎng)①有限細(xì)胞系：是___________核型，如人的成纖維細(xì)胞可傳30-50代，相當(dāng)于150-300個細(xì)胞周期；②連續(xù)細(xì)胞系：發(fā)生轉(zhuǎn)化了的細(xì)胞系（_____________發(fā)生改變），具有___________核型；A.惡性細(xì)胞系：失去了接觸抑制現(xiàn)象B.良性無限細(xì)胞系：獲得了不死性，但________接觸抑制現(xiàn)象，不致癌。1.細(xì)胞系二、動物細(xì)胞培養(yǎng)包括原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)

原代培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代成功后即成細(xì)胞系，能連續(xù)培養(yǎng)下去的細(xì)胞系稱為連續(xù)細(xì)胞系或無限細(xì)胞系，不能連續(xù)培養(yǎng)下去的細(xì)胞系稱為有限細(xì)胞系；二倍體遺傳物質(zhì)異倍體保留連續(xù)細(xì)胞株：可以連續(xù)多次傳代的細(xì)胞株有限細(xì)胞株：可以傳代次數(shù)有限的細(xì)胞株2.細(xì)胞株二、動物細(xì)胞培養(yǎng)包括原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)

通過一定的選擇或純化方法，從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得的具有特殊性質(zhì)的細(xì)胞稱為細(xì)胞株。一般具有恒定的

、病毒敏感性或抗性及其他生化特性染色體組型3.細(xì)胞克隆二、動物細(xì)胞培養(yǎng)包括原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)1.概念：把一個__________從群體中分離出來單獨培養(yǎng)，使之繁衍成一個新的細(xì)胞群體的技術(shù)；2.基本要求：必須保證分離出來的細(xì)胞是一個而不是多個，即必須肯定所建成的克隆來源于

；克隆后細(xì)胞群__________一致，

均一；3.應(yīng)用：①培養(yǎng)正常或癌變的細(xì)胞，可用于生理、病理、藥理等方面的研究；

②細(xì)胞培養(yǎng)用于器官移植、損傷組織器官的修復(fù)、獲得細(xì)胞代謝產(chǎn)物等。單細(xì)胞單個細(xì)胞基因型遺傳性狀比較項目植物組織培養(yǎng)動物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖培養(yǎng)基性質(zhì)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖促--動物血清培養(yǎng)結(jié)果植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白取材植物幼嫩部分或花藥胚胎或幼齡動物的器官或組織其他條件無菌無毒，適宜條件無菌無毒，適宜條件比較動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)2.下列屬于動物細(xì)胞培養(yǎng)與植物組織培養(yǎng)區(qū)別的是(

)A.動物細(xì)胞培養(yǎng)基與植物細(xì)胞培養(yǎng)基的成分有所不同B.動物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在無菌條件下進行C.動物細(xì)胞培養(yǎng)可發(fā)生遺傳物質(zhì)改變,而植物組織培養(yǎng)不能D.植物組織培養(yǎng)和動物細(xì)胞培養(yǎng)都體現(xiàn)了細(xì)胞的全能性A2.在將動物組織塊分散成單個細(xì)胞時,可以使用胰蛋白酶。由此判斷以下推測不合理的是(

)A.動物細(xì)胞之間可能依靠蛋白質(zhì)相互聯(lián)系B.處理時一定要注意處理時間、加酶量C.胰蛋白酶一定不會對動物細(xì)胞造成損傷