實驗三微生物大小的測定與顯微鏡直接計數(shù)法(一）、微生物大小的測定目的要求1.學(xué)習(xí)并掌握用測微尺測定微生物大小的方法。2.增強微生物細胞大小的感性認識。實驗原理鏡臺測微尺為中央部分刻有精確等分線的載玻片，將1mm等分100格，每格長0.01mm。只用于校正目鏡測微尺。目鏡測微尺是可放入目鏡內(nèi)的圓形小玻片，精確等分50小格或100小格。由于不同顯微鏡或不同目鏡和物鏡組合放大倍數(shù)不同，目鏡測微尺每小格所代表的實際長度也不一樣。因此，測量前需先用鏡臺測微尺進行校正。

球菌以直徑表示大??；桿菌用寬×長表示。實驗步驟安裝目鏡測微尺校正目鏡測微尺將鏡臺測微尺刻度面朝上放在顯微鏡載物臺上。分別在低、高倍鏡、油鏡下用鏡臺測微尺校正目鏡測微尺計算鏡臺測微尺：將1mm等分為100小格，每小格長0.01mm（即10μm）。目鏡測微尺每格長度（μm）=（兩重合線間鏡臺測微尺格數(shù)×10）/兩重合線間目鏡測微尺格數(shù)菌體大小測定取下鏡臺測微尺，換上酵母菌水浸片，在高倍鏡下測定酵母菌的長和寬。選擇有代表性的10個細胞進行測定，取平均值。實驗結(jié)果記錄（書P50）1）將目鏡測微尺校正結(jié)果填入下表接目鏡放大倍數(shù)：——接物鏡接物鏡倍數(shù)目鏡測微尺格數(shù)鏡臺測微尺格數(shù)目鏡測微尺每格代表的長度/um低倍鏡高倍鏡油鏡2）將啤酒酵母測定結(jié)果填入下表測定次數(shù)目鏡測微尺每格代表的長度/um寬長菌體大小/um目鏡測微尺格數(shù)寬度/um目鏡測微尺格數(shù)長度/um123456789１０平均值目的要求1.明確血細胞球計數(shù)板計數(shù)的原理。2.掌握使用血細胞計數(shù)板進行微生物計數(shù)的方法。（二）酵母菌的顯微鏡直接計數(shù)制備適當(dāng)濃度的菌懸液取潔凈的血球計數(shù)板蓋上蓋玻片靜置5分鐘用高倍鏡計數(shù)加樣品設(shè)5個中方格的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B計數(shù)板為25個中方格(本次試驗)

：1ml菌液的總菌數(shù)=A/5×25×104×B計數(shù)板為16個中方格：1ml菌液的總菌數(shù)=A/5×16×104×B注意事項取樣時先要搖勻菌液；加樣時計數(shù)室不可有氣泡；一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5-10個菌體為宜；每個計數(shù)室選5個中格（4個角和中央）計數(shù)；位于格線上的菌體一般數(shù)上不數(shù)下，數(shù)右不數(shù)左；若芽體大小達到母細胞的一半，則作為兩個菌體計數(shù)。血球計數(shù)板使用完畢，用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，以免損壞網(wǎng)格刻度；洗凈后自行晾干或吹風(fēng)機吹干。實驗結(jié)果（書P５５）測定你所制備的樣品的含菌量。A表示五個中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/mＬ12345第一室第二室思考題為什么更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必須用鏡臺測微尺重新對目鏡測微尺進行校正？在不改變目鏡和目鏡測微尺，而改用不同放大倍