第八周植生實驗內容1.實驗八、硝酸還原酶活性的測定

(活體法)2.實驗九的預備實驗

細胞分裂素對蘿卜子葉的保綠作用實驗八

硝酸還原酶活性的測定

八34二、實驗原理

硝酸還原酶是植物氮素代謝作用中關鍵性酶，與作物吸收和利用氮肥有關，它作用于NO3－還原為NO2－

。

NO3－＋NADH＋H＋→NO2－＋NAD＋H2O產生的NO2－可以從組織內滲透到外界溶液中，并積累在溶液中，測定反應溶液中NO2－的含量的高低，即表明酶活性的大小。

NO2－含量的測定用磺胺（對氨基苯磺酸胺sulfanil—amide）比色法，這種方法非常靈敏。

三、實驗材料、試劑與儀器材料:木薯葉或菠菜葉子、蓖麻葉、試劑:0.1mol/L磷酸緩沖液（pH7.5）、0.2mol/LKNO3）；磺胺試劑、a-苯胺試劑，NaNO2儀器:722型分光光度計、真空泵（或注射器）、保溫箱、天平、真空干燥器、鉆孔器、三角瓶、移液管、燒杯、洗耳球1．配液、取材和抽氣將新鮮葉片（蓖麻、煙草、木茨葉等）水洗，用吸水紙吸干水分，然后用1cm的鉆孔器鉆取的圓片，在天平上稱取等量的葉圓片兩份，每份0.3克，分別置于含有下列溶液的三角瓶中。（1）0.1mol/L磷酸緩沖溶液5ml+蒸餾水5ml。（2）0.1mol/L磷酸緩沖溶液5ml+0.2mol/LKNO35ml。然后將三角瓶置于真空干燥器中，接上真空泵抽氣，放氣后，葉圓片即沉于溶液中，（如果沒有真空瓶，也可以用20ml注射器代替，將反應液及葉片一起倒入）

四、方法步驟

注射器內,，用手指堵住注射器出口小孔，然后用力拉注射器使之真空，如此抽氣放氣反復進行多次，即可使葉圓片中的空氣抽去，并沉于溶液中），將三角瓶置于30℃溫箱中，使不見光，保溫作用30分鐘，然后分別吸取反應溶液1ml，以測定NO2－含量。注意取樣前葉子要進行一段時間的光合作用，以積累碳水化合物，如果組織中的碳水化合物含量低，會使得酶的活性降低，此時則可在反應溶液中加入30μmol/L的3—磷酸甘油醛或1.6——二磷酸果糖，能顯著增加NO2－的產生。3．繪制標準曲線

測定NO-2的磺胺比色法很靈敏，可以檢出低于1ug/ml的NaNO2含量，可于0～5ug/ml濃度范圍內繪制標準曲線。吸取不同濃度的溶液（例如5、4、3、2、1、0.5ug/ml）1ml于試管中，加入磺胺試劑2ml及一萘胺試劑2ml?；旌蠐u勻，靜置30分鐘（或于一定溫度的水浴中保溫30分鐘）立即于分光光色計下進行比色，（波長520nm），讀取光密度。以光密度為縱坐標，NO-2濃度為橫坐標，于毫米方格紙上繪制光密度——濃度曲線。亞硝酸鈉的含量=O.D值/0.18521.本實驗的設計有何優(yōu)﹑缺點?2.您還知道硝酸還原酶的活性的其他測定方法嗎？七、思考題第八周植生實驗內容2.實驗九的預備實驗

細胞分裂素對蘿卜子葉的保綠作用九

實驗步驟

1.溶液的配制和實驗材料的處理:

取4套培養(yǎng)皿分別加入0、5、10、20ppm的6–芐基氨基嘌呤溶液各20mL。

各培養(yǎng)皿中放入苗齡和長勢相同的蘿卜子葉0.5g，加蓋后放在25～30℃黑暗的地方培養(yǎng)。

2.葉綠素含量的測定:

一星期