不明原因肺炎病例的實(shí)驗(yàn)室診斷廣州市第八人民醫(yī)院檢驗(yàn)科盧業(yè)成1不明原因肺炎病例的實(shí)驗(yàn)室診斷廣州市第八人民醫(yī)院檢驗(yàn)科1主要內(nèi)容不明原因肺炎的病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)注意事項(xiàng)2主要內(nèi)容不明原因肺炎的病原學(xué)2一、不明原因肺炎的病原學(xué)肺炎

細(xì)菌性肺炎：

肺炎鏈球菌、

克雷伯菌、

葡萄球菌、

……Atypicalpneumonias支原體肺炎衣原體肺炎軍團(tuán)菌肺炎……非感染性肺炎：過(guò)敏性肺炎、肺血管炎、

急性間質(zhì)性肺炎…有流感癥狀的疾?。?/p>

普通感冒、流感、艾滋病、免疫抑制合并肺部感染…其他傳染性肺炎：

炭疽、肺鼠疫…不明原因肺炎SARS高致病性人禽流感3一、不明原因肺炎的病原學(xué)肺炎

細(xì)菌性肺炎：

肺炎鏈球菌、

克SARS的病原學(xué)SARS-CoV屬冠狀病毒科冠狀病毒屬的有包膜病毒。病毒基因組為單股正鏈RNA，30,000個(gè)核苷酸組成；與經(jīng)典冠狀病毒僅有約60%同源性，但其組織形式與其他冠狀病毒相似。雙層脂膜，外膜蛋白包括糖蛋白S、M和小衣殼E蛋白。M糖蛋白僅有短的氨基末端結(jié)構(gòu)域暴露于包膜外面；長(zhǎng)而彎曲的羧基末端與單一分子的基因組RNA及多分子的堿性N蛋白組成螺旋狀核衣殼結(jié)構(gòu)。4SARS的病原學(xué)SARS-CoV屬冠狀病毒科冠狀病毒屬的有包SARS-CoV的生物學(xué)特性：室溫下在尿液里至少可存活10天，在腹瀉患者的痰液和糞便里能存活5天以上，在血液中可存活約15天，在塑料/玻璃/馬賽克/金屬/布料/復(fù)印紙等物體表面可存活2～3天。病毒對(duì)溫度敏感，隨溫度升高抵抗力下降，37℃可存活4天，56℃加熱90min、75℃加熱30min能夠滅活病毒。紫外線(xiàn)照射60min可殺死病毒。病毒對(duì)有機(jī)溶劑敏感，乙醚4℃條件下作用24小時(shí)可完全滅活病毒，75%乙醇作用5分鐘可使病毒失去活力，含氯的消毒劑作用5分鐘可以滅活病毒。5SARS-CoV的生物學(xué)特性：室溫下在尿液里至少可存活10天*屬正粘病毒科甲型流感病毒屬。呈多形性，有囊膜。

*病毒基因組為分節(jié)段單股負(fù)鏈RNA。

*能感染人的亞型有H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3等，其中感染H5N1的患者病情重，病死率高。禽流感病毒結(jié)構(gòu)示意圖6*屬正粘病毒科甲型流感病毒屬。呈多形性，有囊膜。

*病毒基因禽流感病毒的生物學(xué)特性：對(duì)乙醚、氯仿、丙酮等有機(jī)溶劑敏感。常用消毒劑易將其滅活，如氧化劑、稀酸、鹵素化合物（漂白粉和碘劑）等能迅速破壞其活性。對(duì)熱比較敏感，但對(duì)低溫抵抗力較強(qiáng)，65℃30min或煮沸2min可滅活。在較低溫糞便中可存活1周，在4℃水中可存活1個(gè)月，對(duì)酸性環(huán)境有一定抵抗力，在pH4.0也具有一定存活能力。在有甘油存在的情況下可保持活力1年以上。裸露的病毒在直射陽(yáng)光下40～48h即可滅活，如果用紫外線(xiàn)直接照射，可迅速破壞其活性。7禽流感病毒的生物學(xué)特性：對(duì)乙醚、氯仿、丙酮等有機(jī)溶劑敏感。常不明原因肺炎檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置

按《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作程序》及的要求建立國(guó)家、省和地（市）級(jí)臨床標(biāo)本三級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)網(wǎng)絡(luò)體系。衛(wèi)生部在中國(guó)CDC病毒病預(yù)防控制所(國(guó)家流感中心)和傳染病預(yù)防控制所設(shè)立國(guó)家級(jí)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。廣東省衛(wèi)生廳確認(rèn)省CDC（流感實(shí)驗(yàn)室）為我省中心實(shí)驗(yàn)室，廣州市CDC為平行中心實(shí)驗(yàn)室。并建立覆蓋全省的初篩實(shí)驗(yàn)室。8不明原因肺炎檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置按《傳染性非典型肺二、實(shí)驗(yàn)室生物安全為加強(qiáng)對(duì)傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室的管理工作，避免發(fā)生實(shí)驗(yàn)室內(nèi)感染和對(duì)環(huán)境的污染，避免由于實(shí)驗(yàn)室操作不當(dāng)造成SARS的傳播，保障實(shí)驗(yàn)室人員的安全和健康，衛(wèi)生部辦公廳于2003年6月16日印發(fā)《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室生物安全操作規(guī)范》。所有參與SARS防治和研究的實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)室工作人員都必須遵守。同時(shí)廢止2003年4月29日印發(fā)的《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室生物安全操作指南》。

9二、實(shí)驗(yàn)室生物安全為加強(qiáng)對(duì)傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室二、實(shí)驗(yàn)室生物安全

按照《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室生物安全操作規(guī)范》的要求所有實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)采取規(guī)范的生物安全防護(hù)，并經(jīng)過(guò)相應(yīng)的專(zhuān)業(yè)技術(shù)培訓(xùn)。凡操作活病毒的試驗(yàn)必須在生物安全I(xiàn)II級(jí)（BSL-3）或以上級(jí)的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。其余的臨床試驗(yàn)可在生物安全I(xiàn)I級(jí)+（BSL-2+）實(shí)驗(yàn)室或全排式生物安全柜中進(jìn)行。從事患者樣品常規(guī)檢驗(yàn)應(yīng)使用專(zhuān)用實(shí)驗(yàn)室和儀器。10二、實(shí)驗(yàn)室生物安全按照《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室二、實(shí)驗(yàn)室生物安全下列操作必須在生物安全3級(jí)(BSL3)或以上級(jí)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行：用細(xì)胞培養(yǎng)的方法分離病毒；收集或濃縮病毒或其培養(yǎng)產(chǎn)物；用活病毒或病毒的全基因接種動(dòng)物。11二、實(shí)驗(yàn)室生物安全下列操作必須在生物安全3級(jí)(B二、實(shí)驗(yàn)室生物安全下列操作必須在生物安全2級(jí)(BSL2)或以上級(jí)實(shí)驗(yàn)室，或全排式生物安全柜中進(jìn)行：咽拭子/含漱液/痰液/尿/糞便/血清和血液等樣品的診斷檢測(cè)；溶解、固定或用其他方法處理滅活的病毒和(或)無(wú)傳染性的病毒基因片段；常規(guī)的細(xì)菌和毒素檢查；可能產(chǎn)生氣溶膠的樣品處理；臨床樣品的包裝、分裝；離心管和離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的封閉和開(kāi)啟。12二、實(shí)驗(yàn)室生物安全下列操作必須在生物安全2級(jí)(B二、實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)施上述操作的人員應(yīng)具備如下防護(hù)措施：佩帶N95級(jí)口罩，調(diào)整口罩的鼻金屬夾，保證呼吸氣體確經(jīng)口罩過(guò)濾；佩帶可以遮蓋臉部的防護(hù)面罩或防護(hù)眼罩；佩帶外科手術(shù)帽，并遮蓋住雙側(cè)耳部；佩帶2層外科手術(shù)乳膠手套。每完成一次可能接觸含有病原的樣品的操作后，應(yīng)更換外層手套，再進(jìn)行下一步操作；在普通實(shí)驗(yàn)白大衣外再穿著外科手術(shù)衣或連體隔離服(最好為防水材料)，雙上肢佩帶袖套，并用乳膠手套袖端將袖口覆蓋、繃緊。雙下肢穿著褲套，雙腳穿鞋套，并用鞋套上部橡皮筋將褲套下段繃緊。13二、實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)施上述操作的人員應(yīng)具備如下防二、實(shí)驗(yàn)室生物安全操作場(chǎng)地的消毒及污染物的處理：實(shí)驗(yàn)完畢后，應(yīng)將所有可用高壓消毒的用品和樣品在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行高壓消毒，不可用高壓消毒的物品應(yīng)用70％乙醇消毒，實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面和污染的設(shè)備表面應(yīng)用對(duì)脂包膜病毒有效的消毒劑消毒。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用紫外線(xiàn)燈消毒。14二、實(shí)驗(yàn)室生物安全操作場(chǎng)地的消毒及污染物的處理：14二、實(shí)驗(yàn)室生物安全按照《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室生物安全操作規(guī)范》的要求:

從事SARS患者樣品臨床常規(guī)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室亦應(yīng)具備生物安全2級(jí)(BSL2)或以上實(shí)驗(yàn)室條件，具有專(zhuān)用的檢驗(yàn)室，使用專(zhuān)用儀器設(shè)備，如血球計(jì)數(shù)儀、血?dú)夥治鰞x、血液生化分析儀等。15二、實(shí)驗(yàn)室生物安全按照《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室生三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存1、采集對(duì)象疑似病例，臨床診斷，確診病例。密切接觸者，一周內(nèi)出現(xiàn)流感樣癥狀者。不明原因肺炎住院患者。其他根據(jù)需要采集的對(duì)象：可能暴露于SARS/禽流感病毒或潛在感染性材料的人員中出現(xiàn)的不明原因肺炎病例（如從事SARS/禽流感科研、檢測(cè)、試劑和疫苗生產(chǎn)等相關(guān)工作人員）。16三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存1、采集對(duì)象16三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存2、標(biāo)本采集人員按照《全國(guó)不明原因肺炎病例監(jiān)測(cè)實(shí)施方案（試行）》的規(guī)定：經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)醫(yī)生、護(hù)士或疾控機(jī)構(gòu)的專(zhuān)業(yè)人員負(fù)責(zé)標(biāo)本的采集，并填寫(xiě)標(biāo)本登記表。采集標(biāo)本時(shí)應(yīng)按照有關(guān)規(guī)范做好個(gè)人安全防護(hù)。17三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存2、標(biāo)本采集人員17三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存3、標(biāo)本的種類(lèi)及采集時(shí)機(jī)（之一）上呼吸道標(biāo)本：鼻拭子(或咽拭子)、含漱液；下呼吸道標(biāo)本：鼻咽或氣管抽取液、支氣管/肺泡灌洗液和肺組織活檢標(biāo)本；血液標(biāo)本：血清和EDTA抗凝全血；糞便/尿液標(biāo)本；尸檢標(biāo)本：主要是肺和氣管，應(yīng)多部位取材。18三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存3、標(biāo)本的種類(lèi)及采集時(shí)機(jī)（之三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存3、標(biāo)本的種類(lèi)及采集時(shí)機(jī)（之二）

SARS預(yù)警病例的采樣：至少采集鼻咽拭子（含漱液）、糞便（肛拭）和血清；急性期應(yīng)盡早采集（發(fā)病后7天內(nèi)）；恢復(fù)期在發(fā)病后2～4周時(shí)（發(fā)病20天后）采集；每隔3天采集一次標(biāo)本進(jìn)行病毒核酸和血清抗體檢測(cè)；病程兩周后,可每隔5天采樣一次。19三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存3、標(biāo)本的種類(lèi)及采集時(shí)機(jī)（之三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存3、標(biāo)本的種類(lèi)及采集時(shí)機(jī)（之三）

人禽流感預(yù)警病例的采樣：采集患者發(fā)病后1～3天的咽、鼻拭子或含漱液，發(fā)病后7天內(nèi)的急性期血清以及死亡病例的尸檢肺組織、氣管分泌物，進(jìn)行病毒分離、病毒核酸和血清抗體的檢測(cè)。采集患者發(fā)病后2～4周的血清標(biāo)本。20三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存3、標(biāo)本的種類(lèi)及采集時(shí)機(jī)（之三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之一）參見(jiàn)《廣東省傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作指引（試行）》、《人禽流感樣品采集、運(yùn)輸和檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（試行）》或國(guó)標(biāo)《流行性感冒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》。病毒分離標(biāo)本：注意無(wú)菌操作。血清標(biāo)本：雙份血清；空腹采血5～10ml。21三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之一）2三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之二）鼻拭子：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入4～5ml采樣液中，尾部棄去。咽拭子：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，同樣將棉簽頭浸入4～5ml采樣液中，尾部棄去。22三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之二）2三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之三）漱口液：用10ml洗液漱口。漱時(shí)讓患者頭部微后仰，發(fā)“ao”聲，讓洗液咽部轉(zhuǎn)動(dòng)。然后收集洗液。鼻洗液：頭微后仰，用移液管將1～1.5ml洗液注入一側(cè)鼻孔，囑患者同時(shí)發(fā)K音以關(guān)閉咽腔。然后讓患者低頭使洗液流出，用平皿或燒杯收集洗液。重復(fù)數(shù)次，最多可用10～15ml洗液。注意：不要使用含青霉素的標(biāo)本運(yùn)輸液，以免過(guò)敏。23三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之三）2三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之四）鼻咽抽取物：用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。先將收集器頭部插入鼻腔，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液涮洗收集器3次。肺活檢材料：在無(wú)菌條件下，用滅菌過(guò)的乳缽磨碎肺活檢組織，用NS配成20%懸液，2000rpm離心10min，取上清加入相應(yīng)抗菌素。24三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之四）2三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之五）尿液標(biāo)本：同時(shí)采集雙份10ml尿液分別加入兩個(gè)無(wú)菌螺口塑料瓶中，密封，4℃條件下立即送至有關(guān)實(shí)驗(yàn)室。糞便（或肛拭子）：同時(shí)采集10～20g糞便雙份（或用塑料桿人造纖維頭的肛拭子兩支）分別放入兩個(gè)含有10mlPBS或生理鹽水的50ml無(wú)菌有螺旋蓋的塑料瓶?jī)?nèi)，密封，4℃條件下立即送至有關(guān)實(shí)驗(yàn)室。25三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之五）2三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之六）血清標(biāo)本：應(yīng)包括雙份血清5～10ml。血液標(biāo)本2000～2500rpm離心15min，收集血清，無(wú)菌條件下移至帶有墊圈的螺旋蓋塑料血清管中?？稍?℃存放一周，長(zhǎng)期保存置-20℃。用EDTA抗凝管收集全血標(biāo)本。盡量空腹采集血液標(biāo)本。上述標(biāo)本（除全血外）若不能在規(guī)定時(shí)間內(nèi)送出，則應(yīng)盡快在－70℃保存。26三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之六）2三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存5、標(biāo)本的包裝與運(yùn)送（之一）標(biāo)本必須放入合適的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料管里。在塑料管上用油性筆寫(xiě)明樣本種類(lèi)、采樣時(shí)間、編號(hào)、姓名，并詳細(xì)填寫(xiě)“送檢登記表”，用另一塑料袋密封。將裝標(biāo)本的密封袋放入帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器內(nèi)，擰緊蓋，在二級(jí)容器上標(biāo)明有關(guān)信息。將二級(jí)容器擺放在專(zhuān)用運(yùn)輸箱內(nèi)（或疫苗運(yùn)輸箱），放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封。27三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存5、標(biāo)本的包裝與運(yùn)送（之一）三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存5、標(biāo)本的包裝與運(yùn)送（之二）同一患者兩份以上標(biāo)本，可以放在同一個(gè)二級(jí)容器內(nèi)。二級(jí)容器要承受不少于95Kpa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的柔軟物質(zhì)。病毒分離標(biāo)本可將一級(jí)容器直接放入液氮運(yùn)輸罐內(nèi)運(yùn)輸。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)識(shí)。標(biāo)本不得郵寄；應(yīng)使用航空或鐵路運(yùn)輸；近距離樣品運(yùn)送最好使用專(zhuān)車(chē)專(zhuān)人（2人）。28三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存5、標(biāo)本的包裝與運(yùn)送（之二）三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存6、標(biāo)本的保存用于病毒分離標(biāo)本應(yīng)盡快接種，24h內(nèi)接種的可于4℃暫存；不能在24h內(nèi)接種的置-70℃保存；如無(wú)-70℃保存條件，則于-20℃冰箱暫存。血清標(biāo)本可在4℃保存1～3天，-20℃或以下可長(zhǎng)期保存；標(biāo)本運(yùn)送期間應(yīng)避免反復(fù)凍融。所有標(biāo)本一式兩份，其中一份單獨(dú)保存?zhèn)鋸?fù)核。29三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存6、標(biāo)本的保存29三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存7、標(biāo)本的接收廣州、深圳、佛山、韶關(guān)、汕頭、云浮、湛江和珠海市CDC為本轄區(qū)內(nèi)標(biāo)本接收指定單位，并開(kāi)展相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作。廣東省CDC負(fù)責(zé)其它地級(jí)市樣本的接收和檢測(cè)工作。并對(duì)復(fù)核樣本檢測(cè)、鑒定和上送中國(guó)CDC。以上指定實(shí)驗(yàn)室實(shí)行24小時(shí)標(biāo)本接收制。30三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存7、標(biāo)本的接收30四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)1、經(jīng)典檢測(cè)方法病毒分離與鑒定：不適用常規(guī)檢測(cè)，用于科研和疑難病例鑒定。SARS-CoV：接種人胚肺細(xì)胞或猴腎細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒，再用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)或中和試驗(yàn)、IFA或ELISA等鑒定抗原。禽流感：用SPF雞胚單腔法和MDCK組織細(xì)胞分離培養(yǎng)，培養(yǎng)物用血凝試驗(yàn)（HA）和H5血凝抑制試驗(yàn)（HI）鑒定。微量血清中和實(shí)驗(yàn):H5活病毒，必須在BSL-3級(jí)實(shí)驗(yàn)室里操作。（具體操作參見(jiàn)國(guó)標(biāo)《流行性感冒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》）31四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)1、經(jīng)典檢測(cè)方法31四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)2、快速檢測(cè)方法1）分子生物學(xué)檢測(cè)：RT-PCR或Real-TimePCRSARS-CoV核酸檢測(cè)禽H5亞型流感病毒核酸檢測(cè)2）檢測(cè)抗原的快速診斷試劑盒：敏感性較低，只能檢測(cè)型特異性抗原。3）免疫熒光測(cè)定32四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)2、快速檢測(cè)方法32四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)SARS-CoV核酸檢測(cè)試劑首選國(guó)家推薦使用的試劑：深圳匹基的SARS-CoV

Real-timePCR檢測(cè)試劑。中大達(dá)安基因的SARS-CoV

Real-timePCR檢測(cè)試劑。如果有條件，可以使用以下核酸檢測(cè)試劑：美國(guó)CDC研制SARS-CoV

Real-timePCR核酸檢測(cè)試劑。德國(guó)羅氏RT-PCR核酸檢測(cè)試劑，結(jié)果必須要測(cè)序。德國(guó)Artus的SARS-CoV

Real-timePCR核酸檢測(cè)試劑。33四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)SARS-CoV核酸檢測(cè)試劑四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)SARS檢測(cè)結(jié)果的確認(rèn)應(yīng)用PCR方法，符合下列三項(xiàng)之一者判斷為陽(yáng)性：同一份臨床標(biāo)本在兩個(gè)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室使用兩種不同的方法，或重復(fù)PCR方法檢測(cè)陽(yáng)性；至少兩個(gè)不同部位的標(biāo)本（如咽拭和糞便）檢測(cè)陽(yáng)性；不同病程（至少間隔2天）采集的同一種標(biāo)本（如兩份或多份咽拭）檢測(cè)陽(yáng)性；平行檢測(cè)進(jìn)展期和恢復(fù)期的血清抗體，發(fā)生陽(yáng)轉(zhuǎn)或4倍以上升高，可做出SARS-CoV感染的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)報(bào)告。34四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)SARS檢測(cè)結(jié)果的確認(rèn)34四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)禽H5亞型流感病毒核酸檢測(cè)試劑用于禽H5亞型流感病毒快速檢測(cè)、測(cè)序及排除；建議使用中國(guó)流感中心或WHO等權(quán)威部門(mén)推薦的引物和探針；建議使用德國(guó)QIAGEN的RneasyMiniKit(病毒核酸提取)和QIAquickGelExtractionKit(PCR產(chǎn)物純化)產(chǎn)品。（源于《禽流感實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)方案》）35四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)禽H5亞型流感病毒核酸檢測(cè)試四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)以下情況的禽流感疑似病例原始標(biāo)本及分離物送國(guó)家流感中心檢測(cè)、復(fù)核、確認(rèn)：分離物HA（+），同時(shí)HI（-），H5的RT-PCR檢測(cè)陽(yáng)性；分離物HA（+），同時(shí)HI（+）或H5的RT-PCR檢測(cè)陽(yáng)性；分離物HA（+），同時(shí)H5的RT-PCR檢測(cè)陽(yáng)性;病人恢復(fù)期血清比急性期H5抗體有4倍或以上增高;標(biāo)本分離陽(yáng)性，HI（-），并已排除當(dāng)前流行甲、乙型毒株的可能。（HA--血凝實(shí)驗(yàn);HI--H5血凝抑制試驗(yàn)）36四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)以下情況的禽流感疑似四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)3、血清學(xué)試驗(yàn)SARS-CoV抗體：包括IgG、IgM或總抗體，任何一種抗體發(fā)生陽(yáng)轉(zhuǎn)或4倍及以上升高，均可診斷SARS。因IgG抗體持續(xù)時(shí)間較長(zhǎng)，最好檢測(cè)IgG抗體。禽流感病毒抗體：采集急性期和恢復(fù)期的雙份血清同步檢測(cè)。恢復(fù)期抗體滴度增高4倍或以上判斷為陽(yáng)性。其他抗體：有條件的單位首先要做支原體、衣原體、HIV、RSV、腺病毒、流感病毒、軍團(tuán)菌等的排查檢測(cè)。37四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)3、血清學(xué)試驗(yàn)37四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)

SARS-CoV抗體檢測(cè)試劑首選國(guó)家推薦使用的試劑：北京華大吉比愛(ài)公司的SARS-CoVIgM/IgG抗體ELISA檢測(cè)試劑盒。軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院的SARS-CoVIgM/IgG抗體IFA檢測(cè)試劑盒。

如果有條件，可以使用以下抗體檢測(cè)試劑：歐盟（EuroImmunon）研制的SARS-CoVIgM/IgG抗體IFA檢測(cè)試劑盒。香港大學(xué)研制的SARS-CoVIgM/IgG抗體IFA檢測(cè)試劑盒。（源于《廣東省傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作指引（試行）》）38四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)SARS-CoV抗體檢測(cè)試劑四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)4、常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目外周血象：外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)（WBC）正?；蚪档?，淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)絕對(duì)值減少，并呈逐步減低趨勢(shì)。T淋巴細(xì)胞亞群：大多數(shù)SARS患者外周血CD3＋、CD4＋、CD8＋T淋巴細(xì)胞亞群減低，尤以CD4＋減低明顯；CD4＋/CD8＋比值正?；驕p低。大部分禽流感患者CD4＋/CD8＋比值倒置。低氧血癥：SARS患者動(dòng)脈血血氧飽和度和氧分壓都有不同程度下降，下降程度與病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。（ WHO也報(bào)告，SARS的典型臨床改變就是發(fā)熱、肺部實(shí)變、血氧飽和度和氧分壓下降。）其他：多數(shù)患者表現(xiàn)有肝功能和LD、CK的異常，并伴有電解質(zhì)代謝紊亂。符合病毒性疾病引起多器官損害的特點(diǎn)。39四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)4、常規(guī)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)項(xiàng)目39五、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)應(yīng)注意的問(wèn)題標(biāo)本采集的時(shí)機(jī)：采集不到急性期（發(fā)病7天內(nèi)）血清時(shí)，盡可能采集早期血清以了解抗體動(dòng)態(tài)變化。標(biāo)本的上送及轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)室生物安全：加強(qiáng)檢測(cè)標(biāo)本和SARS/禽流感病毒毒株的管理，嚴(yán)格執(zhí)行操作規(guī)范，防止實(shí)驗(yàn)室的感染及傳播。標(biāo)本保存的條件：流感病毒在-20℃～-40℃時(shí)不穩(wěn)定，長(zhǎng)期保存應(yīng)在-70℃溫度以下。

40五、實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)應(yīng)注意的問(wèn)題標(biāo)本采集的時(shí)機(jī)：采集不到急性期（發(fā)謝謝！41謝謝！41不明原因肺炎病例的實(shí)驗(yàn)室診斷廣州市第八人民醫(yī)院檢驗(yàn)科盧業(yè)成42不明原因肺炎病例的實(shí)驗(yàn)室診斷廣州市第八人民醫(yī)院檢驗(yàn)科1主要內(nèi)容不明原因肺炎的病原學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)注意事項(xiàng)43主要內(nèi)容不明原因肺炎的病原學(xué)2一、不明原因肺炎的病原學(xué)肺炎

細(xì)菌性肺炎：

肺炎鏈球菌、

克雷伯菌、

葡萄球菌、

……Atypicalpneumonias支原體肺炎衣原體肺炎軍團(tuán)菌肺炎……非感染性肺炎：過(guò)敏性肺炎、肺血管炎、

急性間質(zhì)性肺炎…有流感癥狀的疾?。?/p>

普通感冒、流感、艾滋病、免疫抑制合并肺部感染…其他傳染性肺炎：

炭疽、肺鼠疫…不明原因肺炎SARS高致病性人禽流感44一、不明原因肺炎的病原學(xué)肺炎

細(xì)菌性肺炎：

肺炎鏈球菌、

克SARS的病原學(xué)SARS-CoV屬冠狀病毒科冠狀病毒屬的有包膜病毒。病毒基因組為單股正鏈RNA，30,000個(gè)核苷酸組成；與經(jīng)典冠狀病毒僅有約60%同源性，但其組織形式與其他冠狀病毒相似。雙層脂膜，外膜蛋白包括糖蛋白S、M和小衣殼E蛋白。M糖蛋白僅有短的氨基末端結(jié)構(gòu)域暴露于包膜外面；長(zhǎng)而彎曲的羧基末端與單一分子的基因組RNA及多分子的堿性N蛋白組成螺旋狀核衣殼結(jié)構(gòu)。45SARS的病原學(xué)SARS-CoV屬冠狀病毒科冠狀病毒屬的有包SARS-CoV的生物學(xué)特性：室溫下在尿液里至少可存活10天，在腹瀉患者的痰液和糞便里能存活5天以上，在血液中可存活約15天，在塑料/玻璃/馬賽克/金屬/布料/復(fù)印紙等物體表面可存活2～3天。病毒對(duì)溫度敏感，隨溫度升高抵抗力下降，37℃可存活4天，56℃加熱90min、75℃加熱30min能夠滅活病毒。紫外線(xiàn)照射60min可殺死病毒。病毒對(duì)有機(jī)溶劑敏感，乙醚4℃條件下作用24小時(shí)可完全滅活病毒，75%乙醇作用5分鐘可使病毒失去活力，含氯的消毒劑作用5分鐘可以滅活病毒。46SARS-CoV的生物學(xué)特性：室溫下在尿液里至少可存活10天*屬正粘病毒科甲型流感病毒屬。呈多形性，有囊膜。

*病毒基因組為分節(jié)段單股負(fù)鏈RNA。

*能感染人的亞型有H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3等，其中感染H5N1的患者病情重，病死率高。禽流感病毒結(jié)構(gòu)示意圖47*屬正粘病毒科甲型流感病毒屬。呈多形性，有囊膜。

*病毒基因禽流感病毒的生物學(xué)特性：對(duì)乙醚、氯仿、丙酮等有機(jī)溶劑敏感。常用消毒劑易將其滅活，如氧化劑、稀酸、鹵素化合物（漂白粉和碘劑）等能迅速破壞其活性。對(duì)熱比較敏感，但對(duì)低溫抵抗力較強(qiáng)，65℃30min或煮沸2min可滅活。在較低溫糞便中可存活1周，在4℃水中可存活1個(gè)月，對(duì)酸性環(huán)境有一定抵抗力，在pH4.0也具有一定存活能力。在有甘油存在的情況下可保持活力1年以上。裸露的病毒在直射陽(yáng)光下40～48h即可滅活，如果用紫外線(xiàn)直接照射，可迅速破壞其活性。48禽流感病毒的生物學(xué)特性：對(duì)乙醚、氯仿、丙酮等有機(jī)溶劑敏感。常不明原因肺炎檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置

按《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作程序》及的要求建立國(guó)家、省和地（市）級(jí)臨床標(biāo)本三級(jí)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)網(wǎng)絡(luò)體系。衛(wèi)生部在中國(guó)CDC病毒病預(yù)防控制所(國(guó)家流感中心)和傳染病預(yù)防控制所設(shè)立國(guó)家級(jí)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室。廣東省衛(wèi)生廳確認(rèn)省CDC（流感實(shí)驗(yàn)室）為我省中心實(shí)驗(yàn)室，廣州市CDC為平行中心實(shí)驗(yàn)室。并建立覆蓋全省的初篩實(shí)驗(yàn)室。49不明原因肺炎檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置按《傳染性非典型肺二、實(shí)驗(yàn)室生物安全為加強(qiáng)對(duì)傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室的管理工作，避免發(fā)生實(shí)驗(yàn)室內(nèi)感染和對(duì)環(huán)境的污染，避免由于實(shí)驗(yàn)室操作不當(dāng)造成SARS的傳播，保障實(shí)驗(yàn)室人員的安全和健康，衛(wèi)生部辦公廳于2003年6月16日印發(fā)《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室生物安全操作規(guī)范》。所有參與SARS防治和研究的實(shí)驗(yàn)室和實(shí)驗(yàn)室工作人員都必須遵守。同時(shí)廢止2003年4月29日印發(fā)的《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室生物安全操作指南》。

50二、實(shí)驗(yàn)室生物安全為加強(qiáng)對(duì)傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室二、實(shí)驗(yàn)室生物安全

按照《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室生物安全操作規(guī)范》的要求所有實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)采取規(guī)范的生物安全防護(hù)，并經(jīng)過(guò)相應(yīng)的專(zhuān)業(yè)技術(shù)培訓(xùn)。凡操作活病毒的試驗(yàn)必須在生物安全I(xiàn)II級(jí)（BSL-3）或以上級(jí)的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。其余的臨床試驗(yàn)可在生物安全I(xiàn)I級(jí)+（BSL-2+）實(shí)驗(yàn)室或全排式生物安全柜中進(jìn)行。從事患者樣品常規(guī)檢驗(yàn)應(yīng)使用專(zhuān)用實(shí)驗(yàn)室和儀器。51二、實(shí)驗(yàn)室生物安全按照《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室二、實(shí)驗(yàn)室生物安全下列操作必須在生物安全3級(jí)(BSL3)或以上級(jí)實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行：用細(xì)胞培養(yǎng)的方法分離病毒；收集或濃縮病毒或其培養(yǎng)產(chǎn)物；用活病毒或病毒的全基因接種動(dòng)物。52二、實(shí)驗(yàn)室生物安全下列操作必須在生物安全3級(jí)(B二、實(shí)驗(yàn)室生物安全下列操作必須在生物安全2級(jí)(BSL2)或以上級(jí)實(shí)驗(yàn)室，或全排式生物安全柜中進(jìn)行：咽拭子/含漱液/痰液/尿/糞便/血清和血液等樣品的診斷檢測(cè)；溶解、固定或用其他方法處理滅活的病毒和(或)無(wú)傳染性的病毒基因片段；常規(guī)的細(xì)菌和毒素檢查；可能產(chǎn)生氣溶膠的樣品處理；臨床樣品的包裝、分裝；離心管和離心機(jī)轉(zhuǎn)頭的封閉和開(kāi)啟。53二、實(shí)驗(yàn)室生物安全下列操作必須在生物安全2級(jí)(B二、實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)施上述操作的人員應(yīng)具備如下防護(hù)措施：佩帶N95級(jí)口罩，調(diào)整口罩的鼻金屬夾，保證呼吸氣體確經(jīng)口罩過(guò)濾；佩帶可以遮蓋臉部的防護(hù)面罩或防護(hù)眼罩；佩帶外科手術(shù)帽，并遮蓋住雙側(cè)耳部；佩帶2層外科手術(shù)乳膠手套。每完成一次可能接觸含有病原的樣品的操作后，應(yīng)更換外層手套，再進(jìn)行下一步操作；在普通實(shí)驗(yàn)白大衣外再穿著外科手術(shù)衣或連體隔離服(最好為防水材料)，雙上肢佩帶袖套，并用乳膠手套袖端將袖口覆蓋、繃緊。雙下肢穿著褲套，雙腳穿鞋套，并用鞋套上部橡皮筋將褲套下段繃緊。54二、實(shí)驗(yàn)室生物安全實(shí)施上述操作的人員應(yīng)具備如下防二、實(shí)驗(yàn)室生物安全操作場(chǎng)地的消毒及污染物的處理：實(shí)驗(yàn)完畢后，應(yīng)將所有可用高壓消毒的用品和樣品在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行高壓消毒，不可用高壓消毒的物品應(yīng)用70％乙醇消毒，實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面和污染的設(shè)備表面應(yīng)用對(duì)脂包膜病毒有效的消毒劑消毒。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用紫外線(xiàn)燈消毒。55二、實(shí)驗(yàn)室生物安全操作場(chǎng)地的消毒及污染物的處理：14二、實(shí)驗(yàn)室生物安全按照《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室生物安全操作規(guī)范》的要求:

從事SARS患者樣品臨床常規(guī)檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室亦應(yīng)具備生物安全2級(jí)(BSL2)或以上實(shí)驗(yàn)室條件，具有專(zhuān)用的檢驗(yàn)室，使用專(zhuān)用儀器設(shè)備，如血球計(jì)數(shù)儀、血?dú)夥治鰞x、血液生化分析儀等。56二、實(shí)驗(yàn)室生物安全按照《傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室生三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存1、采集對(duì)象疑似病例，臨床診斷，確診病例。密切接觸者，一周內(nèi)出現(xiàn)流感樣癥狀者。不明原因肺炎住院患者。其他根據(jù)需要采集的對(duì)象：可能暴露于SARS/禽流感病毒或潛在感染性材料的人員中出現(xiàn)的不明原因肺炎病例（如從事SARS/禽流感科研、檢測(cè)、試劑和疫苗生產(chǎn)等相關(guān)工作人員）。57三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存1、采集對(duì)象16三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存2、標(biāo)本采集人員按照《全國(guó)不明原因肺炎病例監(jiān)測(cè)實(shí)施方案（試行）》的規(guī)定：經(jīng)過(guò)培訓(xùn)的醫(yī)療機(jī)構(gòu)醫(yī)生、護(hù)士或疾控機(jī)構(gòu)的專(zhuān)業(yè)人員負(fù)責(zé)標(biāo)本的采集，并填寫(xiě)標(biāo)本登記表。采集標(biāo)本時(shí)應(yīng)按照有關(guān)規(guī)范做好個(gè)人安全防護(hù)。58三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存2、標(biāo)本采集人員17三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存3、標(biāo)本的種類(lèi)及采集時(shí)機(jī)（之一）上呼吸道標(biāo)本：鼻拭子(或咽拭子)、含漱液；下呼吸道標(biāo)本：鼻咽或氣管抽取液、支氣管/肺泡灌洗液和肺組織活檢標(biāo)本；血液標(biāo)本：血清和EDTA抗凝全血；糞便/尿液標(biāo)本；尸檢標(biāo)本：主要是肺和氣管，應(yīng)多部位取材。59三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存3、標(biāo)本的種類(lèi)及采集時(shí)機(jī)（之三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存3、標(biāo)本的種類(lèi)及采集時(shí)機(jī)（之二）

SARS預(yù)警病例的采樣：至少采集鼻咽拭子（含漱液）、糞便（肛拭）和血清；急性期應(yīng)盡早采集（發(fā)病后7天內(nèi)）；恢復(fù)期在發(fā)病后2～4周時(shí)（發(fā)病20天后）采集；每隔3天采集一次標(biāo)本進(jìn)行病毒核酸和血清抗體檢測(cè)；病程兩周后,可每隔5天采樣一次。60三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存3、標(biāo)本的種類(lèi)及采集時(shí)機(jī)（之三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存3、標(biāo)本的種類(lèi)及采集時(shí)機(jī)（之三）

人禽流感預(yù)警病例的采樣：采集患者發(fā)病后1～3天的咽、鼻拭子或含漱液，發(fā)病后7天內(nèi)的急性期血清以及死亡病例的尸檢肺組織、氣管分泌物，進(jìn)行病毒分離、病毒核酸和血清抗體的檢測(cè)。采集患者發(fā)病后2～4周的血清標(biāo)本。61三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存3、標(biāo)本的種類(lèi)及采集時(shí)機(jī)（之三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之一）參見(jiàn)《廣東省傳染性非典型肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作指引（試行）》、《人禽流感樣品采集、運(yùn)輸和檢測(cè)技術(shù)規(guī)范（試行）》或國(guó)標(biāo)《流行性感冒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》。病毒分離標(biāo)本：注意無(wú)菌操作。血清標(biāo)本：雙份血清；空腹采血5～10ml。62三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之一）2三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之二）鼻拭子：將棉簽輕輕插入鼻道內(nèi)鼻腭處，停留片刻后緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)退出。以同一拭子拭兩側(cè)鼻孔。將棉簽浸入4～5ml采樣液中，尾部棄去。咽拭子：用棉簽擦拭雙側(cè)咽扁桃體及咽后壁，同樣將棉簽頭浸入4～5ml采樣液中，尾部棄去。63三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之二）2三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之三）漱口液：用10ml洗液漱口。漱時(shí)讓患者頭部微后仰，發(fā)“ao”聲，讓洗液咽部轉(zhuǎn)動(dòng)。然后收集洗液。鼻洗液：頭微后仰，用移液管將1～1.5ml洗液注入一側(cè)鼻孔，囑患者同時(shí)發(fā)K音以關(guān)閉咽腔。然后讓患者低頭使洗液流出，用平皿或燒杯收集洗液。重復(fù)數(shù)次，最多可用10～15ml洗液。注意：不要使用含青霉素的標(biāo)本運(yùn)輸液，以免過(guò)敏。64三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之三）2三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之四）鼻咽抽取物：用與負(fù)壓泵相連的收集器從鼻咽部抽取粘液。先將收集器頭部插入鼻腔，接通負(fù)壓，旋轉(zhuǎn)收集器頭部并緩慢退出。收集抽取的粘液，并用采樣液涮洗收集器3次。肺活檢材料：在無(wú)菌條件下，用滅菌過(guò)的乳缽磨碎肺活檢組織，用NS配成20%懸液，2000rpm離心10min，取上清加入相應(yīng)抗菌素。65三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之四）2三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之五）尿液標(biāo)本：同時(shí)采集雙份10ml尿液分別加入兩個(gè)無(wú)菌螺口塑料瓶中，密封，4℃條件下立即送至有關(guān)實(shí)驗(yàn)室。糞便（或肛拭子）：同時(shí)采集10～20g糞便雙份（或用塑料桿人造纖維頭的肛拭子兩支）分別放入兩個(gè)含有10mlPBS或生理鹽水的50ml無(wú)菌有螺旋蓋的塑料瓶?jī)?nèi)，密封，4℃條件下立即送至有關(guān)實(shí)驗(yàn)室。66三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之五）2三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之六）血清標(biāo)本：應(yīng)包括雙份血清5～10ml。血液標(biāo)本2000～2500rpm離心15min，收集血清，無(wú)菌條件下移至帶有墊圈的螺旋蓋塑料血清管中?？稍?℃存放一周，長(zhǎng)期保存置-20℃。用EDTA抗凝管收集全血標(biāo)本。盡量空腹采集血液標(biāo)本。上述標(biāo)本（除全血外）若不能在規(guī)定時(shí)間內(nèi)送出，則應(yīng)盡快在－70℃保存。67三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存4、標(biāo)本采集的方法（之六）2三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存5、標(biāo)本的包裝與運(yùn)送（之一）標(biāo)本必須放入合適的帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料管里。在塑料管上用油性筆寫(xiě)明樣本種類(lèi)、采樣時(shí)間、編號(hào)、姓名，并詳細(xì)填寫(xiě)“送檢登記表”，用另一塑料袋密封。將裝標(biāo)本的密封袋放入帶螺旋蓋內(nèi)有橡膠圈的塑料容器內(nèi)，擰緊蓋，在二級(jí)容器上標(biāo)明有關(guān)信息。將二級(jí)容器擺放在專(zhuān)用運(yùn)輸箱內(nèi)（或疫苗運(yùn)輸箱），放入冰排，然后以柔軟物質(zhì)填充，并密封。68三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存5、標(biāo)本的包裝與運(yùn)送（之一）三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存5、標(biāo)本的包裝與運(yùn)送（之二）同一患者兩份以上標(biāo)本，可以放在同一個(gè)二級(jí)容器內(nèi)。二級(jí)容器要承受不少于95Kpa的壓力，內(nèi)襯具吸水和緩沖能力的柔軟物質(zhì)。病毒分離標(biāo)本可將一級(jí)容器直接放入液氮運(yùn)輸罐內(nèi)運(yùn)輸。所有容器必須印有生物危險(xiǎn)標(biāo)識(shí)。標(biāo)本不得郵寄；應(yīng)使用航空或鐵路運(yùn)輸；近距離樣品運(yùn)送最好使用專(zhuān)車(chē)專(zhuān)人（2人）。69三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存5、標(biāo)本的包裝與運(yùn)送（之二）三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存6、標(biāo)本的保存用于病毒分離標(biāo)本應(yīng)盡快接種，24h內(nèi)接種的可于4℃暫存；不能在24h內(nèi)接種的置-70℃保存；如無(wú)-70℃保存條件，則于-20℃冰箱暫存。血清標(biāo)本可在4℃保存1～3天，-20℃或以下可長(zhǎng)期保存；標(biāo)本運(yùn)送期間應(yīng)避免反復(fù)凍融。所有標(biāo)本一式兩份，其中一份單獨(dú)保存?zhèn)鋸?fù)核。70三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存6、標(biāo)本的保存29三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存7、標(biāo)本的接收廣州、深圳、佛山、韶關(guān)、汕頭、云浮、湛江和珠海市CDC為本轄區(qū)內(nèi)標(biāo)本接收指定單位，并開(kāi)展相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)工作。廣東省CDC負(fù)責(zé)其它地級(jí)市樣本的接收和檢測(cè)工作。并對(duì)復(fù)核樣本檢測(cè)、鑒定和上送中國(guó)CDC。以上指定實(shí)驗(yàn)室實(shí)行24小時(shí)標(biāo)本接收制。71三、標(biāo)本的采集、包裝、運(yùn)送及保存7、標(biāo)本的接收30四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)1、經(jīng)典檢測(cè)方法病毒分離與鑒定：不適用常規(guī)檢測(cè)，用于科研和疑難病例鑒定。SARS-CoV：接種人胚肺細(xì)胞或猴腎細(xì)胞培養(yǎng)分離病毒，再用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)或中和試驗(yàn)、IFA或ELISA等鑒定抗原。禽流感：用SPF雞胚單腔法和MDCK組織細(xì)胞分離培養(yǎng)，培養(yǎng)物用血凝試驗(yàn)（HA）和H5血凝抑制試驗(yàn)（HI）鑒定。微量血清中和實(shí)驗(yàn):H5活病毒，必須在BSL-3級(jí)實(shí)驗(yàn)室里操作。（具體操作參見(jiàn)國(guó)標(biāo)《流行性感冒診斷標(biāo)準(zhǔn)及處理原則》）72四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)1、經(jīng)典檢測(cè)方法31四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)2、快速檢測(cè)方法1）分子生物學(xué)檢測(cè)：RT-PCR或Real-TimePCRSARS-CoV核酸檢測(cè)禽H5亞型流感病毒核酸檢測(cè)2）檢測(cè)抗原的快速診斷試劑盒：敏感性較低，只能檢測(cè)型特異性抗原。3）免疫熒光測(cè)定73四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)2、快速檢測(cè)方法32四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)SARS-CoV核酸檢測(cè)試劑首選國(guó)家推薦使用的試劑：深圳匹基的SARS-CoV

Real-timePCR檢測(cè)試劑。中大達(dá)安基因的SARS-CoV

Real-timePCR檢測(cè)試劑。如果有條件，可以使用以下核酸檢測(cè)試劑：美國(guó)CDC研制SARS-CoV

Real-timePCR核酸檢測(cè)試劑。德國(guó)羅氏RT-PCR核酸檢測(cè)試劑，結(jié)果必須要測(cè)序。德國(guó)Artus的SARS-CoV

Real-timePCR核酸檢測(cè)試劑。74四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)SARS-CoV核酸檢測(cè)試劑四、不明原因肺炎的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)SARS檢測(cè)結(jié)果的確認(rèn)應(yīng)用PCR方法，符合下列三項(xiàng)之一者判斷為陽(yáng)性：同一份臨床標(biāo)本在兩個(gè)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室使用兩種不同的方法，或重復(fù)PCR方法檢測(cè)陽(yáng)性；至少兩個(gè)不同部位的標(biāo)本（如咽拭和糞便）檢測(cè)陽(yáng)性；不同病程（至少間隔2天）采集的同一種標(biāo)本（如兩份或多份咽拭）檢測(cè)陽(yáng)性；平行檢測(cè)進(jìn)展期和恢復(fù)期的血清抗體，發(fā)生陽(yáng)轉(zhuǎn)或4倍以上升高，可做出SARS-CoV