實(shí)驗(yàn)六：

小鼠精巢細(xì)胞減數(shù)分裂標(biāo)本的制備與觀察【背景知識(shí)】

減數(shù)分裂（Meiosis）是發(fā)生于生殖細(xì)胞的一種特殊的細(xì)胞分裂方式，DNA復(fù)制一次，而細(xì)胞連續(xù)分裂兩次，形成單倍體的精子和卵子。減數(shù)分裂遠(yuǎn)比有絲分裂復(fù)雜，經(jīng)兩次細(xì)胞分裂，分別稱減數(shù)分裂Ⅰ、減數(shù)分裂Ⅱ，兩次分裂間又一個(gè)較短的間期，這個(gè)間期DNA不復(fù)制。

示意圖二、減數(shù)分裂II可分為前、中、后、末四個(gè)四期，與有絲分裂相似。

實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)滴片法制備單細(xì)胞懸液染色體的一般方法。以小鼠精巢細(xì)胞染色體制片為標(biāo)本觀察減數(shù)分裂過(guò)程中不同時(shí)期的染色體。

【試驗(yàn)原理】雄性動(dòng)物精子發(fā)生于睪丸曲精細(xì)管的生精上皮細(xì)胞，由其中的精原細(xì)胞經(jīng)多次有絲分裂和生長(zhǎng)，形成初級(jí)精母細(xì)胞，初級(jí)精母細(xì)胞經(jīng)減數(shù)分裂形成次級(jí)精母細(xì)胞，次級(jí)精母細(xì)胞有絲分裂成精細(xì)胞，再經(jīng)一系列變化成精子。因此，通過(guò)分離曲細(xì)精管、剪碎并加入液體吹打，可使官腔各種細(xì)胞游離出來(lái)，然后經(jīng)過(guò)低滲、固定、染色等過(guò)程就可制成包含減數(shù)分裂各期的標(biāo)本。小鼠曲細(xì)精管管腔【實(shí)驗(yàn)材料及用品】

1、

材料：成年雄性小白鼠2、

用品：注射器、平皿、尖頭鑷子、剪刀（普通剪刀、眼科小剪刀）、吸管、離心管、離心機(jī)、玻片等。

【實(shí)驗(yàn)操作】1、注射秋水仙素，增加中期分裂相。試驗(yàn)前4－5小時(shí)，小鼠腹腔注射秋水仙素0.5ml（100g/ml）。2、取睪丸并清洗。斷頸處死小鼠，剖開(kāi)腹部，取出腎形睪丸，放入盛有4－5ml2％檸檬酸鈉溶液的平皿中清洗并去掉外面脂肪等物，棄污液。

3、挑出曲細(xì)精管并剪碎。另加檸檬酸鈉溶液1ml，用尖頭鑷尖或解剖針將曲細(xì)精管拉出，并用眼科剪盡量將其剪碎。【實(shí)驗(yàn)操作】

6、預(yù)固定。向離心管中加入1ml31甲醇冰醋酸，輕輕吹打混勻，靜置2min，1000rpm離心8min，棄上清。

7、固定。向上述沉淀中加入5ml31甲醇冰醋酸，吹打混勻，靜置10－20min，1000rpm離心8min，棄上清。

8、再固定。加5ml11甲醇冰醋酸，吹打混勻，靜置5min，1000rpm離心8min，棄上清，加3－4滴11甲醇冰醋酸固定液懸浮細(xì)胞。

【實(shí)驗(yàn)操作】9、滴片。滴一滴細(xì)胞懸液于冰水中剛撈出的濕載玻片上，自然干燥。10、染色。Gimesa染液染20-30min，流水洗去多余染液，待干

【注意事項(xiàng)】1、收集盡量多的細(xì)胞2、加入低滲液后一定要輕輕吹打，以免細(xì)胞核提前破裂，引起染色體外遺、無(wú)規(guī)則排列。3、滴片時(shí)玻片一定要帶水4、注意染色。

【結(jié)果觀察】

觀察各期細(xì)胞核及染色體。作業(yè)：繪制所看到的中期Ⅰ和中期Ⅱ的染色體圖，說(shuō)明其中染色單體組成情況。

羽髓細(xì)胞的收集剪掉盲端沖洗培養(yǎng)血細(xì)胞的收集（1）用吸管先將培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入離心管中（10ml帶刻度）