實(shí)訓(xùn)一顯微鏡的使用與細(xì)菌形態(tài)的觀察

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、了解普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造、原理、維護(hù)及保養(yǎng)方法。2、學(xué)會(huì)掌握普通光學(xué)顯微鏡觀察生物標(biāo)本片。3、學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡單染色法。4、掌握油鏡的使用方法和無菌操作技術(shù)。5、了解細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)和菌落培養(yǎng)特征。實(shí)訓(xùn)一顯微鏡的使用與細(xì)菌形態(tài)的觀察

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?基本原理：復(fù)式光學(xué)顯微鏡子構(gòu)造示意圖基本原理：復(fù)式光學(xué)顯微鏡子構(gòu)造示意圖2實(shí)驗(yàn)材料：1、菌種枯草芽孢桿菌12~18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，藤黃微球菌（Micrococcusluteus）約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2、染色劑呂氏堿性美藍(lán)染液（或草酸銨結(jié)晶紫染液），齊氏石炭酸復(fù)紅染液。3、儀器或其他用具顯微鏡，酒精燈，載玻片，接種環(huán)，香柏油，二甲苯，擦鏡紙，吸水紙，無菌水等。實(shí)驗(yàn)材料：3方法與步驟：細(xì)菌的簡單染色法:1、涂片;4、染色;2、干燥;5、水洗;3、固定;6、干燥;7、鏡檢;方法與步驟：4《微生物與免疫基礎(chǔ)》教學(xué)課件-實(shí)訓(xùn)[1]5實(shí)訓(xùn)二細(xì)菌的革蘭氏染色法目的要求：1、學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏染色法的操作技術(shù)。2、了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性實(shí)訓(xùn)二細(xì)菌的革蘭氏染色法6基本原理：革蘭氏染色原理：第一步：結(jié)晶紫使菌體著上紫色;第二步：碘和結(jié)晶紫形成大分子復(fù)合物，分子大，能被細(xì)胞壁阻留在細(xì)胞內(nèi);第三步：酒精脫色，細(xì)胞壁成分和構(gòu)造不同，出現(xiàn)不同的反應(yīng)。基本原理：7

G+菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖含量高，交聯(lián)度大，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖因脫水而孔徑縮小，故結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被阻留在細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞不能被酒精脫色，仍呈紫色。

Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，因其含脂量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，酒精將細(xì)胞脫色，細(xì)胞無色，沙黃復(fù)染后呈紅色。G+菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖含量高，交聯(lián)度大，當(dāng)乙醇脫色8實(shí)驗(yàn)材料：1、菌種大腸桿菌約24h營養(yǎng)瓊脂余面培養(yǎng)物，金黃色葡萄球菌約24h營養(yǎng)瓊脂余面培養(yǎng)物，蠟樣芽孢桿菌（）12~20h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2、染色劑草酸銨結(jié)晶紫染色液，路哥氏碘液，番紅染色液，95%乙醇。3、儀器或其他用具顯微鏡，酒精燈，載玻片，接種環(huán)，香柏油，二甲苯，擦鏡紙，吸水紙，無菌水等。實(shí)驗(yàn)材料：9革蘭氏染色操作過程革蘭氏染色操作過程10方法與步驟：1、制片2、初染3、媒染4、脫色5、復(fù)染6、鏡檢方法與步驟：11實(shí)訓(xùn)三常用培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、了解天然培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基的配制原理。2、掌握肉湯培養(yǎng)基、高氏Ι號(hào)培養(yǎng)基和麥芽汁培養(yǎng)基的配制方法。實(shí)訓(xùn)三常用培養(yǎng)基的制備12實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：（一）器皿的準(zhǔn)備1、玻璃器皿的清洗（1）新玻璃器皿（2）用過的玻璃器皿2、器皿的包扎

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：13試管、三角瓶棉塞制作方法試管、三角瓶棉塞制作方法14實(shí)訓(xùn)四細(xì)菌的接種及人工培養(yǎng)法實(shí)驗(yàn)?zāi)康模海?）掌握無菌操作的概念和基本操作技術(shù)。（2）了解細(xì)菌常用培養(yǎng)基以及培養(yǎng)條件。（3）了解平板劃線分離菌種的原理。（4）掌握平板劃線分離菌種的操作要點(diǎn)。實(shí)訓(xùn)四細(xì)菌的接種及人工培養(yǎng)法15基本原理：1、常用的微生物接種、分離工具及制備（1）接種針、接種環(huán)和接種鉤；（2）涂布器；（3）其它接種工具基本原理：162、微生物的接種方法：斜面接種（點(diǎn)接、中央劃線、稀波狀蜿蜒劃線法、密波狀蜿蜒劃線法、分段劃線、縱向劃線、挖塊接種法）；液體接種法（由斜面培養(yǎng)基接入液體培養(yǎng)基、由液體培養(yǎng)基接種到液體培養(yǎng)基）；穿刺接種法（垂直法、水平法）；平板接種法（點(diǎn)接、劃線接種、涂布接種）；

2、微生物的接種方法：17斜面接種操作程序斜面接種操作程序18穿刺接種的兩種操作法穿刺接種的兩種操作法19倒平板的方法倒平板的方法20劃線分離法劃線分離法21涂布分離法涂布分離法22實(shí)訓(xùn)五放線菌形態(tài)觀察實(shí)驗(yàn)?zāi)康模海?）掌握放線菌的一般接種方法。（2）掌握插片法、壓印法的操作技術(shù)。（3）觀察和了解放線菌的個(gè)體特征和菌落特征。實(shí)訓(xùn)五放線菌形態(tài)觀察23方法與步驟：（1）斜面接種（2）插片法（3）平板劃線接種（4）壓印法方法與步驟：24實(shí)訓(xùn)一顯微鏡的使用與細(xì)菌形態(tài)的觀察

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、了解普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造、原理、維護(hù)及保養(yǎng)方法。2、學(xué)會(huì)掌握普通光學(xué)顯微鏡觀察生物標(biāo)本片。3、學(xué)習(xí)微生物涂片、染色的基本技術(shù)，掌握細(xì)菌的簡單染色法。4、掌握油鏡的使用方法和無菌操作技術(shù)。5、了解細(xì)菌的個(gè)體形態(tài)和菌落培養(yǎng)特征。實(shí)訓(xùn)一顯微鏡的使用與細(xì)菌形態(tài)的觀察

實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?5基本原理：復(fù)式光學(xué)顯微鏡子構(gòu)造示意圖基本原理：復(fù)式光學(xué)顯微鏡子構(gòu)造示意圖26實(shí)驗(yàn)材料：1、菌種枯草芽孢桿菌12~18h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物，藤黃微球菌（Micrococcusluteus）約24h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2、染色劑呂氏堿性美藍(lán)染液（或草酸銨結(jié)晶紫染液），齊氏石炭酸復(fù)紅染液。3、儀器或其他用具顯微鏡，酒精燈，載玻片，接種環(huán)，香柏油，二甲苯，擦鏡紙，吸水紙，無菌水等。實(shí)驗(yàn)材料：27方法與步驟：細(xì)菌的簡單染色法:1、涂片;4、染色;2、干燥;5、水洗;3、固定;6、干燥;7、鏡檢;方法與步驟：28《微生物與免疫基礎(chǔ)》教學(xué)課件-實(shí)訓(xùn)[1]29實(shí)訓(xùn)二細(xì)菌的革蘭氏染色法目的要求：1、學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏染色法的操作技術(shù)。2、了解革蘭氏染色法的原理及其在細(xì)菌分類鑒定中的重要性實(shí)訓(xùn)二細(xì)菌的革蘭氏染色法30基本原理：革蘭氏染色原理：第一步：結(jié)晶紫使菌體著上紫色;第二步：碘和結(jié)晶紫形成大分子復(fù)合物，分子大，能被細(xì)胞壁阻留在細(xì)胞內(nèi);第三步：酒精脫色，細(xì)胞壁成分和構(gòu)造不同，出現(xiàn)不同的反應(yīng)。基本原理：31

G+菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖含量高，交聯(lián)度大，當(dāng)乙醇脫色時(shí)，肽聚糖因脫水而孔徑縮小，故結(jié)晶紫-碘復(fù)合物被阻留在細(xì)胞內(nèi)，細(xì)胞不能被酒精脫色，仍呈紫色。

Gˉ菌：肽聚糖層薄，交聯(lián)松散，乙醇脫色不能使其結(jié)構(gòu)收縮，因其含脂量高,乙醇將脂溶解，縫隙加大，結(jié)晶紫-碘復(fù)合物溶出細(xì)胞壁，酒精將細(xì)胞脫色，細(xì)胞無色，沙黃復(fù)染后呈紅色。G+菌：細(xì)胞壁厚，肽聚糖含量高，交聯(lián)度大，當(dāng)乙醇脫色32實(shí)驗(yàn)材料：1、菌種大腸桿菌約24h營養(yǎng)瓊脂余面培養(yǎng)物，金黃色葡萄球菌約24h營養(yǎng)瓊脂余面培養(yǎng)物，蠟樣芽孢桿菌（）12~20h營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物。2、染色劑草酸銨結(jié)晶紫染色液，路哥氏碘液，番紅染色液，95%乙醇。3、儀器或其他用具顯微鏡，酒精燈，載玻片，接種環(huán)，香柏油，二甲苯，擦鏡紙，吸水紙，無菌水等。實(shí)驗(yàn)材料：33革蘭氏染色操作過程革蘭氏染色操作過程34方法與步驟：1、制片2、初染3、媒染4、脫色5、復(fù)染6、鏡檢方法與步驟：35實(shí)訓(xùn)三常用培養(yǎng)基的制備實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?、了解天然培養(yǎng)基、半合成培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基的配制原理。2、掌握肉湯培養(yǎng)基、高氏Ι號(hào)培養(yǎng)基和麥芽汁培養(yǎng)基的配制方法。實(shí)訓(xùn)三常用培養(yǎng)基的制備36實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：（一）器皿的準(zhǔn)備1、玻璃器皿的清洗（1）新玻璃器皿（2）用過的玻璃器皿2、器皿的包扎

實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：37試管、三角瓶棉塞制作方法試管、三角瓶棉塞制作方法38實(shí)訓(xùn)四細(xì)菌的接種及人工培養(yǎng)法實(shí)驗(yàn)?zāi)康模海?）掌握無菌操作的概念和基本操作技術(shù)。（2）了解細(xì)菌常用培養(yǎng)基以及培養(yǎng)條件。（3）了解平板劃線分離菌種的原理。（4）掌握平板劃線分離菌種的操作要點(diǎn)。實(shí)訓(xùn)四細(xì)菌的接種及人工培養(yǎng)法39基本原理：1、常用的微生物接種、分離工具及制備（1）接種針、接種環(huán)和接種鉤；（2）涂布器；（3）其它接種工具基本原理：402、微生物的接種方法：斜面接種（點(diǎn)接、中央劃線、稀波狀蜿蜒劃線法、密波狀蜿蜒劃線法、分段劃線、縱向劃線、挖塊接種法）；液體接種法（由斜面培養(yǎng)基接入液體培養(yǎng)基、由液體培養(yǎng)基接種到液體培養(yǎng)基）；穿刺接種法（垂直法、水平法）；平板接種法（點(diǎn)接、劃線接種、涂布接種）；

2、微生物的接種方法：41斜面接種操作程序斜面接種操作程序42穿刺接種的兩種操作法穿刺接種的兩種操