雜交瘤技術(shù)【原理】以聚乙二醇）（HAT和單個細胞培養(yǎng)（克隆化，最終獲得機能產(chǎn)生所需單克隆抗體又能長期體外繁殖的雜交瘤細（一）小鼠骨髓瘤細胞HGPRT或TK的缺陷株；④能與B⑤融合率高。目前最常用的是NS-1和SP2/O細胞株（二）免疫脾細胞多采用與骨髓瘤細胞同源的純系BALB/c弗氏佐劑。（三）細胞融合是產(chǎn)生雜交瘤細胞的中心環(huán)節(jié)。一般用分子量1000D1500D4000DPEG作細胞融合劑，30~50基本方法是將骨髓瘤細胞與脾細胞按1:2~0例混合，加入PEG2minPEG融合作用，融合細胞形成具有兩個或多個核的異核體，最終產(chǎn)生雜交細胞。（四）雜交瘤細胞的選擇性培養(yǎng)腫瘤細胞合成DNA（氨基蝶呤另一條為替代途徑，葉酸代謝受阻時，細胞通過HGPRT和TK苷酸，進而合成DNA。HAT培養(yǎng)液含三種成分：次黃嘌呤、氨基蝶呤）和胸腺嘧啶核苷T，經(jīng)HAT培養(yǎng)液篩選后，只有具備兩親本細胞雙重特性的雜交瘤細胞能長期生存并產(chǎn)生抗體，成為制造單克隆抗體的細胞源。細胞類型正常培養(yǎng)細胞TK胞缺陷細HGPRT胞缺陷細雜交瘤細胞正常培養(yǎng)基++++HAT基培養(yǎng)+--+成一定大小的免疫復合物，使反應(yīng)也出現(xiàn)濁度。精確度高、簡便快速、易于自動化【影響因素】1、抗原抗體的比例鉤狀效應(yīng)highdosehookeffe：免疫濁度測定，抗原過量導致形成的免疫復合物分子小，發(fā)生再解離，濁度下降，光散射減少。2、抗體的質(zhì)量：特異性強、效價高、親和力強、R型抗體3、抗原抗體反應(yīng)的環(huán)境：反應(yīng)液最適pH6.5~8.，離子強度大（常用磷酸鹽緩沖液PBS為反應(yīng)液）4、增濁劑：如聚乙二醇PEG、吐溫-20【分類】速率比濁法和終點比濁法；透射免疫濁法和散射免疫比濁法；免疫膠乳比濁法凝集反應(yīng)與沉淀反應(yīng)有何異同一、相同點：階段；③有相同的反應(yīng)機制和影響因素。二、不同點不同點反應(yīng)時間稀釋對象結(jié)果

凝集反應(yīng)或可溶性抗原致敏的顆粒第一階段：數(shù)秒至數(shù)分鐘抗體出現(xiàn)凝集塊

沉淀反應(yīng)第一階段：幾秒至幾十秒時抗原出現(xiàn)沉淀物時間分辨熒光免疫測定TRFIA命長、自然熒光干擾少、標準曲線范圍寬等優(yōu)點，已在臨床檢測中廣泛使用?！净驹怼?、時間分辨：通常各種組織、蛋白或其他化合物，在激發(fā)光照射下都能發(fā)出一定波長的自熒1~10n20n（10~10002stokestoke（通常為273nm激發(fā)發(fā)射光譜不重疊，用簡單的濾光片就能把激發(fā)光和發(fā)射光分開，可消除激發(fā)光散射引起的干擾。3613nm10nm615nm±5nm350~600nm615nm±5nm本底熒光。鑭系元素的激發(fā)光譜則較寬，通常為300~350nm，非常有利于增加激發(fā)能，提高檢測的靈敏度。4Eu3+1000秒，由光導纖維閃光管的控制系統(tǒng)。比活性是指單位時間內(nèi)每個標記分子可被探測到的信號量。在測量時間內(nèi)，Eu3+可被反復激發(fā)，每次激發(fā)后，他可很快由激發(fā)態(tài)回到基態(tài)，發(fā)射熒光；然后又可被重新激發(fā)，如此每秒可有1000次激發(fā)，這就大大提高了熒光標記物的比活性。5、信號增強：免疫反應(yīng)完成后，形成Eu3+標記的抗原抗體復合物，其在弱堿性溶液中的激發(fā)熒光信號較弱，加入酸性增強液可使Eu3+標記的抗原抗體復合物的pH降至2~3，Eu3+從復合物上完全解離，游離的Eu3+可被增強液中的螯合劑所螯合，在協(xié)同劑等成分的作用下，與增強液中的β-二酮體生成以Eu3+為核心的保護性膠態(tài)分子團，它是具有高強度熒光的穩(wěn)定螯合物，信號的增強效果可達上百萬倍。（二）標記物和標記方法1、標記物：用于本技術(shù)測定的標記物是鑭系元素，其中銪）和鋱）命特別長且熒光強度高，多用這兩元素作為標記物，其中Eu3+鑭系元素在游離狀態(tài)下的熒光相對較弱，與螯合劑如）螯合物后，可使熒光強度增強。螯合物的熒光壽命與配體有關(guān)。2（或抗體））-EDTA-EDTA-DTTA和（DTPAEu3+螯合劑可先螯合Eu3+（一步法Eu3+（兩步法（牛血清白蛋白，多聚賴氨酸等）接，再標記Eu3+（三）方法類型1Eu3+標記抗體結(jié)合，形成固相抗體-待測抗原-Eu3+Eu3+340nmEu3+613nm的熒光。經(jīng)時間分辨熒光檢測儀測定并推算出待檢抗原的含量。2Eu3+固相中加入熒光增強液，測定熒光強度，所得熒光強度與待檢抗原含量負相關(guān)。3、固相抗原競爭法：與固相抗體競爭法類似，只是第一步改成將待檢抗原和固相抗原競爭性結(jié)合定量的Eu3+標記抗體。（四）方法評價1、優(yōu)點：靈敏度高，檢出下限為10^-18mol/（普通熒光免疫計數(shù)僅為10^-8mol/。分析4~5個數(shù)量級。標記結(jié)合物穩(wěn)定，有效使用期長。測量快速，易于自動化。本法在靈敏度、穩(wěn)定性和測量自動化程度等方面均可與RIA法中最有發(fā)展前途的一項技術(shù)。2酶聯(lián)免疫吸附試驗）（即形成固相抗原或抗體（既保留免疫活性又保留酶的活性（測定其中的抗體或抗原和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體（一）ELISA檢測抗原的方法主要有：1、雙抗體夾心法：適用于至少兩個抗原決定簇）的Ag體復合物，為“雙抗體夾心催化底物成為有色產(chǎn)物，根據(jù)產(chǎn)物的顯色程度進行抗原的定性或定量檢測。臨床上常用于乙肝表面抗原HBsAg、甲胎蛋白AFP、人絨毛膜促性腺激素HCG等項目的檢測。2、雙位點一步法：該法是針對抗原分子上兩個不同且空間距離較遠的抗原決定簇，效應(yīng)，甚至出現(xiàn)假陰性結(jié)果，必要時可將標本適當稀釋后重新測定）3、競爭法：適用于小分子Ag（只有一個AD。顯色。（二）ELISA檢測抗體的方法主要有：1、間接法：檢測Ab最常用的方法。常用酶標記羊抗人IgG。2、雙抗原夾心法：靈敏度和特異性高于間接法，臨床上乙型肝炎表面抗體HBsAb的測定常用此法。3、競爭法：當相應(yīng)抗原材料中含有難以去除的雜質(zhì)，不易得到足夠的純化抗原或抗原性質(zhì)不穩(wěn)定時，可采用此方法。主要用于測定HBcAb和HBeAb。原理見下：HBcAb的競爭法：先將核心抗原包被在固相載體上形成固相抗原本和酶標記的特異性核心抗體，此時待測標本中的HBcAb與酶標記HBcAb競爭性地與固HBcAb的含量負相關(guān)。HBeAbHBeAb包被在固相載體上形成固相抗體，同時加入待測標本和中和抗原HBeAg，此時待測標本中的HBeAb和固相抗體競爭性地結(jié)合中和抗原HBeAg，溫育后洗滌，加入酶標記的HBeAb，酶標記抗體與結(jié)合于固相抗體上的特異性抗原結(jié)合，溫育后洗滌，加入底物顯色，顯色強弱與待測標本中HBeAb的含量呈負相關(guān)。4、捕獲法：又稱反向間接法，主要用于血清中特定Ig類別的測定，最常用于病原體急性感染診斷中IgM型抗體檢測。原理：首先將針對IgM中所有的IgM（特異非特異）即可被固相抗體捕獲。第二步加入特異性抗原，其與固相載體上捕獲的IgM特異性抗體結(jié)合，再加入針對特異性抗原的酶標記抗體，形成固相抗人μ鏈IgM-抗原-酶標記抗體復合物，最后加入底物顯色，即可對待測標本中抗原特異性IgM進行定性或定量測定。此法臨床上常用于病原體急性感染的實驗室診斷，如急性甲肝時可檢測HAV-IgM抗體，急性乙型肝炎時可檢測抗HBc-IgM抗體。電化學發(fā)光免疫分析（ECLIA）【原理】是以電化學發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕標記抗體（抗原，以三丙胺（TPA）為電子供體，在電場中因電子轉(zhuǎn)移而發(fā)生特異性化學發(fā)光反應(yīng)（它包括電化學和化學發(fā)光兩個過程。在啶釕標記抗體復合物，復合物進入流動室，同時注入TPA緩沖液。當磁性微粒流經(jīng)電極表TPA在電極表面進行電子轉(zhuǎn)移，產(chǎn)影響標記物的理化特性；③試劑靈敏度高，穩(wěn)定性好。生物素-親合素系統(tǒng)【特點】：高特異性、高敏感性、穩(wěn)定強、實用性強（或分離）節(jié)一、應(yīng)用于固相載體的包被環(huán)節(jié)鏈霉親合素（親合素）為弱酸性蛋白，可以吸附在固相載體（聚苯乙烯微孔板或納米微球（或抗體（抗體）通過生物素與固相材料表面的鏈霉親合素結(jié)合，實現(xiàn)間接包被。此種包被模式不但可增加抗原（或抗體）包被數(shù)量，也可減少空間位阻效應(yīng)，提高抗原（或抗體）的利用效率。此外，若固相材料不與生物素化抗原（或抗體）結(jié)合，待生物素化抗原（或抗體）體（或抗原）二、應(yīng)用于檢測系統(tǒng)的信號放大生物素-親合素系統(tǒng)用于檢測信號放大，可提高標記免疫分析的敏感性。基本方式有生物素））素標記在第一抗體上稱為直接法，如生物素標記在第二抗體上稱為間接法。（酶蛋白4物素，且一個生物素大分子可標記多個生物素而產(chǎn)生級聯(lián)放大效應(yīng)，提升檢測敏感性。②實際應(yīng)用中的ABC法：預(yù)先按一定比例將親合素與生物素標記示蹤物質(zhì)（如生物素標記ALP）混合，形成可溶性的親合素-生物素化酶標復合物，同時確保預(yù)留一定位點與生物素化的抗體（或抗原）結(jié)合。此種方法能減少操作步驟，又能實現(xiàn)標準化操作（ABC法應(yīng)用于雙抗體夾心ELISA中，形成ABC-ELISA，為常用方法。（（一）斑點金免疫滲濾試驗（DIGFA）快速結(jié)合并起到濃縮作用，達到快速檢測目的（一般5min左右完成）陽性反應(yīng)在膜上呈現(xiàn)紅色斑點。本法簡化了操作步驟，達到簡便的目的，已成為“床旁檢測POCT”的主要方法之一?！痉椒愋汀浚褐醒氤始t色斑點（膠體金聚集。②間接法：將抗原包被在硝酸纖維素膜上，依次滴加待測標本、洗滌液和膠體金標記抗人IgG抗體，再加洗滌液洗滌，陽性者即在膜中央呈紅色斑點（膠體金聚集的IgG的干擾，易產(chǎn)生假陽性，臨床上較少使用。（二）斑點金免疫層析試驗（DICA）【原理】是將膠體金標記和蛋白質(zhì)層析技術(shù)相結(jié)合的，以硝酸纖維素膜為載體的快速固相DICA中，滴加在膜一端的標本溶液受載體末的毛細管作用向另一端移被固相化，無關(guān)物則越過該區(qū)域而被分離，然后通過膠體金的呈色條帶來判讀實驗結(jié)果?！痉椒愋汀浚弘p抗體夾心法、競爭法、間接法（三）臨床應(yīng)用及評價1、特點：操作簡便、快捷以及操作人員不需技術(shù)培訓，無需特殊儀器設(shè)備，試劑穩(wěn)定、便于保存等特點。2、靈敏度問題：靈敏度不及酶標法和酶發(fā)光免疫測定法，臨床應(yīng)用中應(yīng)引起高度重視。3、臨床應(yīng)用：臨床只能作為定性半定量試驗，目前主要應(yīng)用于正常體液中不存在的物質(zhì)（如傳染病抗原和抗體以及毒品類藥物）和正常含量極低而在特殊情況下異常升高的物質(zhì)（如人絨毛膜促性腺激素HCG。斑點酶免疫吸附試驗（Dot-ELISA）【原理】與常規(guī)的ELISA-ELISA附力（100%）的硝酸纖維素）NC染色?！炯夹g(shù)要點】1、抗原包被膜：加少量（1~2μL）抗原于膜上。由于NC膜吸附力強，故需在包被后進行封閉。2、抗原抗體反應(yīng)：滴加樣品血清，其中的待檢抗體即與NC膜上抗原結(jié)合；洗滌后再滴加酶標二抗。3、顯色反應(yīng)：滴加能形成不溶有色沉淀的底物溶液（HRP標記物，常用二氨基聯(lián)苯胺陽性者即可在膜上出現(xiàn)肉眼可見的染色斑點?！痉椒ㄔu價】斑點-ELISA的優(yōu)點為：ELISA高6~8ELISA約節(jié)約10NC膜可長期保存-2℃可長達半年，不影響其活性。免疫印跡試驗（IBT）亦稱酶聯(lián)免疫電轉(zhuǎn)移印跡法EITB，通常又稱Western-blt性定量檢測、多肽分子的質(zhì)量測定及病毒的抗體或抗原檢測等?！炯夹g(shù)要點】1SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳SDS：抗原等蛋白樣品經(jīng)SDS處理后帶負電荷，在不可見（只有染色后才顯出電泳區(qū)帶。2、電轉(zhuǎn)移：將在凝膠中已經(jīng)分離的條帶轉(zhuǎn)移至硝酸纖維素膜上，選用低電壓）電流1~2A，通電45min轉(zhuǎn)移即可完成。此階段分離效果肉眼仍不可見。3、酶免疫定位：將印有蛋白質(zhì)條帶的硝酸纖維素膜（相當于包被了抗原的固相載體）依次與特異性抗體和酶標第二抗體作用后常用的HRP底物為3,3（呈棕色）或4-1（呈藍紫色帶清晰可辨。并可根據(jù)SDS時加入的分子量標準，確定各組分的分子量?！痉椒▽W評價】1只有那些能識別耐變形表位的抗體可與抗原結(jié)合，所以在該試驗中常選用多克隆抗體。2、IBT3、IBT法在臨床應(yīng)用中存在一定局限性。非標記抗體酶免疫組織化學染色抗原聯(lián)系在一起。該方法避免了酶標記時對抗體的損傷，同時也提高了方法的敏感性【技術(shù)類型】（一）過氧化物酶抗過氧化物酶酶）法（抗酶抗體與酶組成可溶性復合物（PAP復合物構(gòu)，非常穩(wěn)定。通過橋抗體（第二抗體，將特異性識別組織抗原的第一抗體與PAP起來，此時要求特異性第一抗體與第三抗體的動物種屬相同法操作簡便，分三步；落的弊端；敏感性高；背景著色淡（二）雙橋PAP法該法建立在PAP法的基礎(chǔ)上。其基本原理是在PAP法中通過兩次連接橋抗體和PAP復合物而建立起來的，通過雙橋可結(jié)合更多的PAP復合物于抗原分子上，以增強敏感性。這種放大方式重復使用橋抗體，使橋抗體與PAP復合物中抗酶抗體的未飽和Fc段結(jié)合，或橋抗體與特異性第一抗體未飽和的Fc段結(jié)合。如此對抗原有明顯放大作用，對于組織細胞微量抗原的檢測又實用價值。（三）堿性磷酸酶抗堿性磷酸酶法）法因部分組織細胞內(nèi)含內(nèi)源性過氧化物酶，限制了HRP化學反應(yīng)。本法是用堿性磷酸酶）代替HRP建立的堿性磷酸酶）法，簡稱APAAP。其技術(shù)要點與PAP法相似。流式細胞術(shù)FCM性進行多參數(shù)定量分析和分選的新技術(shù)。一、細胞分析原理1、樣品進入流動室：將懸浮分散的單細胞懸液，經(jīng)特異熒光染料染色后，放人樣品管。在氣體壓力的作用下，懸浮在樣品管中的單細胞懸液形成樣品流垂直進入流式細胞儀的流動室，沿流動室的軸心向下流動。23、信號的產(chǎn)生與接收：染色的細胞在測量區(qū)受激光照射后發(fā)出熒光，同時產(chǎn)生光散射。這就可得到細胞大小和核酸含量等指標。二、細胞分選原理當某類細胞的特性與要分選的細胞相同時分離液法主要用于分離PBMCsl分離時先將分層液置試管底層，然后將肝素抗HanksPBS晰的界面。水平式離心后，離心管中會出現(xiàn)幾個不同層次的液體和細胞帶：Ficol95%90~9580%25℃時可影響細胞收率。熱的蛋白質(zhì)。補體的三條激活途經(jīng)比較：經(jīng)典途徑

MBL

旁路途徑激活物質(zhì)

抗原抗體復合物

MBL相關(guān)絲氨酸蛋白肽聚糖、酵母多糖、脂酶 多糖起始分子C1qC2C4C3參與成分C1C4C2C3C4C2C3MASPC3BD因子共同末端C5~C9C5~C9C5~C9所需離子Ca2+，Mg2+Ca2+Mg2+C3轉(zhuǎn)化酶C4b2bC4b2bC3bBb（p）C5轉(zhuǎn)化酶C4b2b3bC4b2b3bC3bnBb（p）是否依賴Ab是否否生物學作用參與特異性免疫的效參與非特異性免疫的參與非特異性免疫的應(yīng)階段于感染后期發(fā)效應(yīng)階段于感染早期效應(yīng)階段于感染早揮作用 發(fā)揮作用 發(fā)揮作用乙型肝炎病毒的檢驗1HBsAg（乙肝病毒表面抗原RIAELISA是乙型肝炎早期診斷的重要指標。目前可采用CLIA對血清中的HBsAg進行定量檢測，對肝炎患者動態(tài)評價病情與藥物療效很有價值。HBV的外殼部分。血清中檢出HBsAgALT升高周，到恢復期HBsAg滴度逐漸降低乃至消失。僅為HBV感染的標志，不反映病毒有無復制、復制程度及預(yù)后。2HBsAb（乙肝病毒表面抗體目前常用固相RIA與ELISA法檢測之。接受HBVHBsAbHBVHBs以外的標志物，則應(yīng)視為HBsAb陽性可提示急性感染后的恢復期。3HBeAg（乙肝病毒e抗原：為病毒復制標志，多存在于HBsAg肝患者血清HBeAg持續(xù)陽性3在血清中的出現(xiàn)時間稍后于HBsAg，是HBV肝臟損害程度成正比，因此HBeAg是乙肝患者有較強傳染性的標志。4HBeAb（乙肝病毒e抗體：多出現(xiàn)于急性肝炎恢復期的患者中，比HBsAb常在HBsAg即將消失或已經(jīng)消失時檢出，可長期存在。當血清HBeAgHBe（但不是保護性抗體HBeAg的血清學轉(zhuǎn)換是指HBeAg含量消失同時伴HBeAb出現(xiàn)，是目前臨床上慢性乙肝治療的近期目標（最初目標是減少乙肝病毒的DNA復制。5HBcAb（乙肝病毒核心抗體）IgMIgG?？笻BcIgM是機體感染后最早在血液中出現(xiàn)的特異抗體，是新近感染或病毒復制的標志?？笻Bc-IgG高滴度的HBcAb存在常表示體內(nèi)有HBV復制。HBcAb陽性時表示乙肝現(xiàn)癥感染或既往感染?？笻Bc不是保護性抗體，高滴度抗HBc-IgM是急性或近期感染的重要指標，在慢性肝炎活動期也可呈陽性，標志著乙肝病毒在復制，有傳染性?？笻Bc-IgG可持續(xù)存在數(shù)年至數(shù)十年，是既往感染的標志。大三陽：以上指標中的1、3、5為陽性；小三陽：以上指標中的1、4、5為陽性。6、HBcAb-IgM：是早期HBV感染的特異性血清標志。初次感染早期即上升，數(shù)月后無論HBsAg消失與否，HBcAb-IgM表達穩(wěn)定，對于急性肝炎診斷很有價值。其效價降低常提示預(yù)后較好。長期不降至正常范圍者，提示有轉(zhuǎn)化為慢性肝炎的可能。7：即乙肝病毒前S1HBVDane粒上，在病毒感染、裝配、復制和刺激機體產(chǎn)生免疫反應(yīng)等方面有著十分重要的意義。S1抗原與HBV-DNA、HBeAgS1抗原可以隨HBeAgHBeAb陽性的慢性乙肝患者和HBV慢性無癥狀的攜帶者中，前S1S1抗原陽性常提示急性乙肝向慢性乙肝的轉(zhuǎn)變。該指標陰轉(zhuǎn)越早、療程越短，預(yù)后也越好。8：即乙肝病毒前S2抗原，其上具有高免疫性的抗原決定簇和多聚蛋白受體，為人T/BHBV了解預(yù)后及制備乙肝高效疫苗有重要意義。前S2抗原與HBsAg陽性存在顯著相關(guān)性。在急性乙肝中，前S2抗原與HBsAg都可作為HBVS2S2HBV的感染，而且對觀測疾病預(yù)后、藥物選擇及療效觀察也有作用，是對乙肝兩對半的有效補充。以上指標中的1、2、3、4、5、7、8項，在臨床上稱為乙肝七項~HbsAg HbsAb HbeAg HbeAb HbcAb+-+--+-+-++--++-+-++-+--++-+

臨床意義潛伏期或急性乙肝早期急性或慢性感染，以HbcAb-IgM鑒別；病毒復制活躍，傳染性強（大三陽）急性HBV感染趨于恢復；慢性乙肝攜帶者（小三陽）急性HBV感染恢復期，有免疫力乙肝恢復期，已有免疫力過去感染，但無法檢出HbsAg；低水平慢性感染；無癥狀攜帶者成功接種過乙肝疫苗，或以前感染過HBV，現(xiàn)已康復，有免疫力初次介導組分血管活性胺補體、MACIFN初次介導組分血管活性胺補體、MACIFNIL-4/、eotaxi、PGD2PAF細胞因子體復合物溶酶體酶細胞毒素毒素、炎癥介質(zhì)超敏反應(yīng)類型I型速發(fā)型II型細胞毒型III型免疫復合物型IV型遲發(fā)型參與成IgEIgG/MIgGTh1，Th2，CTL分效應(yīng)細肥大細胞FcR+細胞（吞噬細FcR+細胞巨噬細胞、嗜酸性粒細胞、胞和成嗜堿性粒細胞胞、NK細胞）補體CTL分PS：II/II超敏反應(yīng)是AIDIV型超敏反應(yīng)是排斥反應(yīng)的機制。常見I型超敏反應(yīng)性疾?。喝沓舴磻?yīng)（敏性休克，局部性超敏反應(yīng)（呼吸道過敏反應(yīng)、消化道過敏反應(yīng)、皮膚過敏反應(yīng)）常見II型超敏反應(yīng)性疾?。狠斞磻?yīng)，HDN，AIHA，藥物過敏性血細胞減少，肺出血腎炎綜合征、甲亢。常見II型超敏反應(yīng)性疾?。壕植棵庖邚秃衔锊rhus反應(yīng)、類Arthu反應(yīng)合物病（血清病、鏈球菌感染后的腎小球腎炎、類風濕關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡SLE）常見IV型超敏反應(yīng)性疾?。焊腥拘赃t發(fā)型超敏反應(yīng)、接觸性皮炎、移植排斥反應(yīng)。新生兒溶血?。┠缸娱g血型不合是引起HDN的主要原因。如母親為Rh陰性血型，胎兒為Rh陽性血型，在首次分娩時，胎兒血進入母體內(nèi)，母親被胎兒的Rh陽性紅細胞致敏，產(chǎn)生以IgG類為主的RhRhRh抗體便可通過胎盤進入胎兒體內(nèi)，與其紅細胞膜上的RhD抗原結(jié)合，使紅細胞被溶解破壞（血管外溶血或發(fā)生新生兒溶血。初次分娩后，72h內(nèi)給母體內(nèi)注射Rh抗體，能及時清除母體內(nèi)的Rh陽性紅細胞，可有效預(yù)防再次妊娠時發(fā)生HDN?！究寡毎贵w的檢測】抗血細胞抗體大多屬于不完全抗體，這種抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后不發(fā)生凝集現(xiàn)象。Rh抗體的檢測：為防止Rh血型不合所致死胎或HDN的發(fā)生，可對孕婦血清或胎兒羊水的Rh抗體進行檢測，最為常用的是酶介質(zhì)法。酶介質(zhì)法原理：Rh(D)抗體多為IgG與紅細胞上的特異性抗原結(jié)合。但由于IgG型不完全抗原的兩個抗原決定簇的跨度小于紅細胞因排斥力而產(chǎn)生的最小間距（250nm，所以不能將相鄰的紅細胞彼此連接形成肉眼可IgG型不完全抗體在兩個紅細胞抗原位點間連接，產(chǎn)生肉眼可見的凝集。最常用的酶是1%木瓜菠蘿蛋白酶?！九R床意義】Rh血型抗原主要有5種，其中D抗原的抗原性最強，出現(xiàn)頻率高。凡帶有D抗原者稱Rh陽性，不帶D抗原者為Rh陰性。當Rh陰性的個體受到D抗原的刺激（輸血、妊娠、器官移植）后，可產(chǎn)生D抗體，若該個體再次受到D抗原陽性血液就可發(fā)生溶血反應(yīng)。Rh血型不合所致的HDN中，母親為Rh陰性血型，但體內(nèi)產(chǎn)生了抗Rh抗體。為及早發(fā)Rh16周應(yīng)作首次Rh抗體檢測，6~8202~4Rh抗體滴度≥1:161:32Rh抗體超過1:64即應(yīng)立即采取措施，如孕婦血漿交換術(shù)等。青霉素引起的超敏反應(yīng)：青霉素可導致全部四型超敏反應(yīng)。一、I型：全身超敏反應(yīng)，青霉素可引發(fā)過敏性休克（是全身超敏反應(yīng)中最常見的。IgE抗白可通過交聯(lián)結(jié)合靶細胞表面的特異性IgE二、II型：藥物過敏性血細胞減少癥從而刺激機體產(chǎn)生抗藥物抗原表位的特異性抗體Fc三、III型：類血清病樣反應(yīng)【機制】有時使用大劑量青霉素后可出現(xiàn)，主要臨床癥狀是發(fā)熱、皮疹（風疹為主、淋巴（及其降解產(chǎn)物）體（機制同上，與體內(nèi)青霉素（及其降解產(chǎn)物）結(jié)合，形成循環(huán)免疫復合物所致。四、IV型：接觸性皮炎（霉素）可引起。青霉素及其降解產(chǎn)物與體內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合，變?yōu)橥耆乖?，致敏T淋巴細胞。當機體再次接觸青霉素時，可發(fā)生接觸性皮炎，出現(xiàn)IV型超敏反應(yīng)。皮損表現(xiàn)為：紅腫、皮疹、水皰，重者可出現(xiàn)剝脫性皮炎。（PIDD所致的疾病。包括：一、原發(fā)性B細胞缺陷病包括：B細胞先天發(fā)育不全、或不能接受T細胞傳遞的信號，Ig水平低或缺陷?！緳z驗】主要包括B細胞（及其?類）數(shù)量和功能檢測，以及B細胞產(chǎn)物Ig的檢測Ig（BrutonSCID和選擇性IgM缺陷癥B細胞表面膜免疫球蛋白）CD抗原檢測。二、原發(fā)性T細胞缺陷病包括T細胞的發(fā)生分化和功能障礙?！緳z驗】主要包括T細胞（及其?類）功能和數(shù)量的檢測（一）功能檢測：主要包括體內(nèi)和體外功能試驗1、皮膚試驗：主要檢測T細胞的遲發(fā)型超敏反應(yīng)能力，常用皮試抗原包括：結(jié)核菌素、白色念珠菌素、毛發(fā)菌素、鏈激酶-鏈道酶（SK-SD）和腮腺炎病毒等。三種以上抗原批示陽性者為正常，少于2種陽性或在48h反應(yīng)直徑＜10mm，則提示免疫缺陷或反應(yīng)性降低。2、體外試驗：通常用PHA刺激淋巴細胞的增殖、轉(zhuǎn)化實驗來判斷T細胞的功能。（二）T細胞數(shù)量及其?群檢測通常應(yīng)用CD系列單克隆抗體，使用熒光抗體技術(shù)或流式細胞儀對T細胞總數(shù)及?群進行檢測。最常檢測的CD標志：CD3/4/8/25等三、原發(fā)性聯(lián)合免疫缺陷病包括：胸腺、淋巴組織發(fā)育不全及Ig四、原發(fā)性吞噬細胞缺陷病或粘附功能、殺菌活性等異常導致的疾?。ㄖ行粤＜毎€原試驗、黏附分子檢測五、原發(fā)性補體缺陷病。【檢驗】一般認為CH50、C1q、C4、C3、B因子等幾項檢測可大致反映補體缺陷的情況。繼發(fā)性免疫缺陷病SIDD誘發(fā)因素導致的免疫功能障礙引起的疾病。一、獲得性免疫缺陷綜合癥AIDS：又稱艾滋病，是人類免疫缺陷病毒HIV）感染引起的一組綜合征，患者的CD4+T統(tǒng)退行性病變。【致病機制】1HIV入侵靶細胞的機制：分子是HIV糖蛋白的特異性受體，故其主要侵犯CD4+T細胞（樹突狀神經(jīng)膠質(zhì)細胞也是其重要的靶細胞。HIV通過gp120與靶細胞表面的CD4體（CXCR4/5）結(jié)合，再由gp412HIV損傷感染的CD4+T細胞：CD4+T細胞。3、HIV可通過各種機制逃避免疫識別攻擊【免疫學特征】1、CD4+T細胞數(shù)量顯著減少、功能嚴重障礙，CD4+/CD8+比例倒置，低于0.5。2Th1Th2Th1IL-2刺激CD4+T細胞增殖；至AIDS期則以Th2細胞占優(yōu)勢，分泌Th1細胞分泌CTL的細胞毒效應(yīng)。3HIV感染巨噬樹突狀細胞后，可損傷其抗原處理和呈遞能力（但不易殺死細胞，反而使之成為HIV的庇護所，成為晚期AIDS主要來源。4Bgp120BIg血癥和產(chǎn)生多種自身抗體?！九R床表現(xiàn)】典型的有：AIDS（有巨細胞病毒、帶狀孢疹病毒、隱球菌等；②惡性腫瘤：AIDS惡性淋巴瘤，也是患者死亡的常見原因；③神經(jīng)系統(tǒng)損害：約60%AIDS患者出現(xiàn)AIDS癡呆癥。【檢驗】1、HIV抗原檢測：常用ELISA法檢測HIV核心抗原p24。2HIV抗體檢測：分為初篩和確認試驗，初篩試驗常用ELISA/膠乳凝集免疫金層析法。確認試驗主要用免疫印跡法。3、CD4+T細胞計數(shù)：計數(shù)低于500/μl易導致機會性感染；低于200/μl則發(fā)生AIDS。機體抗腫瘤的免疫效應(yīng)機制【細胞免疫機制】一、T細胞MHC-I限制的CD8+細胞毒性T細胞CTL細胞的機制：分泌多種細胞因子（如IFNγTNF等，間接殺傷腫瘤細胞。MHC-II限制的CD4+輔助性T細胞Th胞因子（如IL-2等）激活NK細胞、巨噬細胞，并增強CD8+CTL的殺傷功能而實現(xiàn)，但也有一定的直接殺傷腫瘤的作用，其在很多情況下對抗腫瘤細胞免疫應(yīng)答的誘導及免疫記憶的維持是必不可少的。γδ+T細胞與CTL相似，可直接殺傷腫瘤細胞，發(fā)揮抗腫瘤作用，但不受MHC限制，此類細胞還可分泌5GM-CSF和TNF-αIL-2的作用下細胞能夠以腫瘤浸潤淋巴細胞或淋巴因子激活殺傷細胞的形式殺傷腫瘤細胞。二、NK細胞NK細胞是能的機制：①釋放細胞毒性因子或穿孔素介導溶細胞作用，其殺傷作用無腫瘤特異性、MHC限制性和免疫記憶性；②通過Fas/FasL途徑誘導腫瘤細胞凋亡；③NK細胞表面的FcγR可與覆蓋在腫瘤細胞表面抗體的Fc段結(jié)合，通過ADCC在體內(nèi)外增強NK細胞的細胞毒作用，故T細胞免疫應(yīng)答可增強NK細胞活性。三、巨噬細胞既可作為抗原提呈細胞）傷腫瘤細胞的機制如下：APCT促進其激活，以誘導特異性抗瘤細胞（其強弱與進入腫瘤細胞內(nèi)的酶的量有關(guān)；③巨噬細胞表面有FcR，可通過