血型鑒定與交叉配血醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系陳麗華一、ABO血型鑒定鹽水凝集法玻片法試管法凝膠微柱法檢測紅細(xì)胞上存在的血型抗原，以及血清中存在的血型抗體，依據(jù)抗原抗體存在的情況判斷血型。

常規(guī)的方法包括正向定型與反向定型正向定型※：已知抗體特異性的血清檢查紅細(xì)胞抗原反向定型※：已知血型紅細(xì)胞檢查血清抗體血型鑒定原理正定型結(jié)果分析抗A血清抗B血清抗A、B血清＋被檢紅細(xì)胞＋—＋B型正定型結(jié)果分析O型抗A血清抗B血清抗A、B血清＋被檢紅細(xì)胞———注意：正定型時(shí)抗A（－）抗B（－）抗A、B管（＋）,應(yīng)考慮到是否為亞型。應(yīng)追蹤。正定型結(jié)果分析抗A血清抗B血清抗A、B血清＋被檢紅細(xì)胞＋＋AB型＋反定型結(jié)果分析※（被檢血清和標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞）＋A型RBC＋B型RBC+O型RBC血型－－＋－－－－＋＋＋－－A型B型O型AB型注意:被檢血清＋O型RBC凝集，應(yīng)考慮含有不規(guī)則抗體或其他血型抗體。應(yīng)追蹤。被檢血清對抗血清的要求※①高度特異，只能與相應(yīng)的紅細(xì)胞抗原發(fā)生凝集，無非特異性凝集，②高效價(jià)，抗A血清效價(jià)在1:128以上，抗B血清效價(jià)在1:64以上。③高親和力，15秒內(nèi)出現(xiàn)凝集，其強(qiáng)度為3分鐘時(shí)凝塊>1mm2。④無冷凝集素。⑤無菌。分離血清后56℃，30min滅活。ABO血型鑒定IgM抗體凝集紅細(xì)胞示意圖IgM在鹽水介質(zhì)中產(chǎn)生凝集鏡檢證實(shí)ABO血型鑒定（玻片法）抗A血清1滴抗B血清1滴加5％紅細(xì)胞懸液1滴，混勻連續(xù)轉(zhuǎn)動(dòng)玻片1～5min凝集無凝集抗A+B血清1滴②試管法：需時(shí)間短，適用于急診定型?？烧炊ㄐ?。可發(fā)現(xiàn)亞型或較弱抗原抗體反應(yīng)，結(jié)果判斷可靠，為常規(guī)檢查方法。ABO血型鑒定正反定型結(jié)果不一致的解決辦法①首先重復(fù)試驗(yàn)，如果仍然不符繼續(xù)下列試驗(yàn)。②重新采集新鮮血液標(biāo)本，以糾正因污染或樣本錯(cuò)誤造成的不符合。③多次洗滌被測紅細(xì)胞和標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，除去可能會影響試驗(yàn)結(jié)果的血漿中或紅細(xì)胞保存試劑中的化學(xué)成分。④用抗A1、抗A+B檢測紅細(xì)胞。ABO血型鑒定（鹽水法）注意事項(xiàng)⑤如懷疑血清中有抗A1，可用數(shù)份A2紅細(xì)胞標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)。⑥如果試驗(yàn)結(jié)果未見凝集，應(yīng)將反應(yīng)管至少在室溫和40℃分別放置30min，用顯微鏡檢查。⑦若懷疑是由于抗原減弱造成的正反定型不符，可進(jìn)一步做木瓜酶試驗(yàn)、直接抗球蛋白試驗(yàn)、吸收放散試驗(yàn)等加以鑒別。正反定型結(jié)果不一致的解決辦法ABO血型鑒定（鹽水法）注意事項(xiàng)2．凝膠微柱法凝膠具有分子篩效應(yīng)和親合效應(yīng)親合效應(yīng)：紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合分子篩效應(yīng)：低速離心后，凝集紅細(xì)胞懸浮在凝膠中，而未被抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則沉于凝膠底部（管底尖部）。結(jié)果觀察：肉眼/血型分析儀

ABO血型鑒定【原理】凝膠具有分子篩效應(yīng)和親合效應(yīng)，在微株凝膠介質(zhì)中紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，經(jīng)低速離心，凝集的紅細(xì)胞懸浮在凝膠上層，而未和抗體結(jié)合的紅細(xì)胞則沉于凝膠底部（管底尖部）※?！酒鞑摹课⒘课鼧訕?，一次性吸頭，微柱凝膠卡專用水平離心機(jī)?！驹噭刻禺愋阅z微柱卡ABO血型鑒定（凝膠微柱法）【操作】（1）將被檢者紅細(xì)胞（不用洗滌）配成2％～3％生理鹽水懸液，向已標(biāo)記好的特異性凝膠微柱卡的微管反應(yīng)腔內(nèi)加50μL.（2）立即水平離心1000r/min,10min.（3）觀察及判斷血型結(jié)果①陽性：對照管細(xì)胞沉淀在管底，檢測管凝集塊在膠上或膠中。②陰性：對照管和檢測管細(xì)胞沉淀均在管底。③試驗(yàn)失?。簩φ展芗?xì)胞在膠上或膠中，應(yīng)重新做試驗(yàn)。（4）報(bào)告方式：同生理鹽水法。ABO血型鑒定（凝膠微柱法）ABO血型鑒定錯(cuò)誤可以引起嚴(yán)重的后果。鑒定結(jié)果錯(cuò)誤因素主要有技術(shù)問題及ABO血型本身的問題。二、交叉配血

本演示文稿可能包含觀眾討論和即席反應(yīng)。使用PowerPoint可以跟蹤演示時(shí)的即席反應(yīng)，在幻燈片放映中，右鍵單擊鼠標(biāo)請選擇“會議記錄”選擇“即席反應(yīng)”選項(xiàng)卡必要時(shí)輸入即席反應(yīng)單擊“確定”撤消此框此動(dòng)作將自動(dòng)在演示文稿末尾創(chuàng)建一張即席反應(yīng)幻燈片，包括您的觀點(diǎn)。

交叉配血是在輸血前必須做的試驗(yàn)。交叉配血中最重要的是ABO血型配合，必需ABO血型相同，且交叉配血無凝集才能輸血。（一）交叉配血的重要性本演示文稿可能包含觀眾討論和即席反應(yīng)。使用PowerPoint可以跟蹤演示時(shí)的即席反應(yīng)，在幻燈片放映中，右鍵單擊鼠標(biāo)請選擇“會議記錄”選擇“即席反應(yīng)”選項(xiàng)卡必要時(shí)輸入即席反應(yīng)單擊“確定”撤消此框此動(dòng)作將自動(dòng)在演示文稿末尾創(chuàng)建一張即席反應(yīng)幻燈片，包括您的觀點(diǎn)。

獻(xiàn)血者受血者紅細(xì)胞紅細(xì)胞血清血清主側(cè)次側(cè)交叉配血目的①發(fā)現(xiàn)ABO血型鑒定的錯(cuò)誤。②發(fā)現(xiàn)不規(guī)則凝集素。如冷凝集素。③發(fā)現(xiàn)其他血型抗體和一些不規(guī)則抗體。（三）交叉配血方法

1、室溫鹽水配血法（只能檢出IgM型血型抗體）2、聚凝胺法3、抗人球蛋白法4、蛋白酶法5、微柱凝膠法方法選擇原則①無輸血及妊娠史者，只需作鹽水配血?！谟休斞罚瑡D女有原因不明的流產(chǎn)史及新生兒溶血病者，應(yīng)用木瓜酶或抗人球蛋白、聚凝胺介質(zhì)法。③有多發(fā)性骨髓瘤，進(jìn)行性結(jié)核，肝損傷，輸過右旋糖酐的病人，為避免假陽性，作抗人球蛋白配血。

1、室溫鹽水配血法【原理】天然IgM類血型抗體與對應(yīng)紅細(xì)胞在室溫下的鹽水介質(zhì)中出現(xiàn)凝集反應(yīng)。通過離心，觀察受血者血清與供血者紅細(xì)胞（主側(cè)）以及受血者紅細(xì)胞與供血者血清（次側(cè)）之間有無凝集的現(xiàn)象，判斷受血者與供血者之間有無ABO血型不合的現(xiàn)象。交叉配血判斷配血是否相合※①ABO同型配血，主、次側(cè)均無溶血及凝集，血型相合，可以輸血；主、次側(cè)任何一管發(fā)生溶血或凝集，不可輸血，應(yīng)查找原因。②異型配血時(shí)，主側(cè)無凝集無溶血，次側(cè)有凝集無溶血，可以輸少量血；如主側(cè)、次側(cè)均不凝集或主側(cè)凝集，不能輸血，需查找原因交叉配血（鹽水凝集法）報(bào)告方式（1）受血者xxx（X型）血清＋供血者xxx（X型）紅細(xì)胞凝集與否及強(qiáng)弱程度（2）供血者xxx（X型）血清＋受血者xxx（X型）紅細(xì)胞凝集與否及強(qiáng)弱程度（3）受血者xxx與供血者xxx配血是否相合交叉配血（鹽水凝集法）主側(cè)配血管次側(cè)配血管DC1滴PS1滴PC1滴DS1滴1000r/min離心1min觀察上層液有無溶血輕搖試管肉眼觀察有無凝集有凝集無凝集鏡檢證實(shí)交叉配血鹽水介質(zhì)法操作示意圖【注意事項(xiàng)】1.如果對患者的輸血史或妊辰史不明，必須使用48h內(nèi)的標(biāo)本。2.不能使用溶血標(biāo)本。3.配血后，受血者/供血者的全部標(biāo)本須于2～6℃冰箱保存7d以備復(fù)查。交叉配血（鹽水凝集法）【方法學(xué)評價(jià)】本法簡易、經(jīng)濟(jì)、快速，缺點(diǎn)是僅用于檢查ABO血型系統(tǒng)的IgM血型抗體是否相配，不能檢出不相配的IgG血型抗體。交叉配血（鹽水凝集法）2、聚凝胺介質(zhì)配血法（MPT）※【原理】：①聚凝胺是帶有高價(jià)陽離子的多聚季氨鹽，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可以中和紅細(xì)胞表面的負(fù)電荷，減少細(xì)胞間排斥力，縮小了其間之距離，出現(xiàn)非特異性凝集。②低離子強(qiáng)度溶液降低紅細(xì)胞的Zeta電位，可進(jìn)一步增加抗原抗體見的吸引力。③枸櫞酸鹽解聚液可消除聚凝胺的正電荷，使非特異性凝集消散，但I(xiàn)gM或IgG類血型抗體與紅細(xì)胞產(chǎn)生的特異性凝集不會散開。交叉配血交叉配血（MPT）主側(cè)配血管次側(cè)配血管DC1滴PS1滴PC1滴DS1滴1000r/min離心1min主側(cè)、次側(cè)配血管凝集不凝集：試劑無效交叉配血凝聚胺介質(zhì)法操作示意圖LISS液0.6ml混勻加凝聚胺2滴，混勻15s棄去上清1000r/min離心1min加解聚液2滴離心判斷配血是否相合1分鐘【方法學(xué)評價(jià)】聚凝胺介質(zhì)法可加快凝集反應(yīng)速度，使原來在鹽水介質(zhì)中不能凝集紅細(xì)胞的抗體發(fā)生凝集，提高反應(yīng)靈敏度，能檢測IgM、IgG等引起溶血反應(yīng)的幾乎所有規(guī)則與不規(guī)則抗體，適用于各類輸血患者的配血。故該法具有快速、靈敏、結(jié)果可靠、能撿出完全抗體及不完全抗體等優(yōu)點(diǎn)。交叉配血（MPT）【方法學(xué)評價(jià)】本法是確定不完全抗體最可靠的方法※，但操作較繁瑣，需多次洗滌，需要時(shí)間常，試劑較貴，故始終未能成為臨床常規(guī)的配血方法。交叉配血（抗人球蛋白法）交叉配血試驗(yàn)的臨床意義

1．進(jìn)一步驗(yàn)證受血者和供血者血型鑒定是否正確，發(fā)現(xiàn)ABO系統(tǒng)的不規(guī)則抗體，以避免血型鑒定錯(cuò)誤而導(dǎo)致的輸血后的嚴(yán)重溶血反應(yīng)。

2．發(fā)現(xiàn)其他的血型抗體受、供血者如果ABO血型相同，但其他血型不同時(shí)，在交叉配血時(shí)也可出現(xiàn)凝集，為避免異型血輸入后的溶血反應(yīng)，在目前許多實(shí)驗(yàn)室都不能進(jìn)行稀有血型鑒定的情況下，全靠交叉配血發(fā)現(xiàn)這些血型的不同及免疫抗體的存在。3.當(dāng)受血者一次輸血超過1600～2000m1，或在48小時(shí)內(nèi)輸入5L或更多血時(shí),稱為大量輸血,這時(shí)就需要多個(gè)供血者的血液,在配血時(shí)不但受血者和供血者之間要交叉配血,多個(gè)供血者之間也應(yīng)互相交叉配血,為保證受血者的安全，要求主側(cè)、次側(cè)及獻(xiàn)血員之間交叉配血均不凝集時(shí)，方可輸血。

4.在急診配血時(shí),對急需情況可采用試管法配血，在15min內(nèi)發(fā)血。對特急情況應(yīng)立即發(fā)給O型濃縮紅細(xì)胞或低凝集價(jià)的O型全血。然后盡快復(fù)查血型和配血，如表現(xiàn)有配血禁忌，應(yīng)立即通知負(fù)責(zé)醫(yī)師及時(shí)處理。交叉配血試驗(yàn)的注意事項(xiàng)1．用于交叉配血的病人（受血者）血液標(biāo)本應(yīng)該是抽取的新鮮血，供血者的標(biāo)本是剛從血袋剪下來的原已加熱封閉兩端小管的血液。2．采用試管法作交叉配血試驗(yàn)，最好不用玻片法。3．用生理鹽水洗滌紅細(xì)胞去除血漿，預(yù)防纖維凝塊的形成。4．配血管中發(fā)生溶血現(xiàn)象，表明有抗原抗體反應(yīng)同時(shí)還有補(bǔ)體參與，是配血不合的嚴(yán)重情況，應(yīng)十分重視。5．鹽水配血試驗(yàn)陰性，但有反復(fù)輸血史或妊娠史的受血者，應(yīng)加酶法、抗人球蛋白法等配血。6．為確保輸血的安全，應(yīng)輸同型血。三、血型鑒定與交叉配血的異常及其克服辦法（一）責(zé)任性錯(cuò)誤血型鑒定和交叉配血的技術(shù)并不復(fù)雜，因配血錯(cuò)誤而導(dǎo)致輸入不合血液的事故中，大多數(shù)是因?yàn)椴粐?yán)格執(zhí)行操作規(guī)程或操作過程中精神不集中所致，因此為杜絕責(zé)任性錯(cuò)誤首先應(yīng)該熟悉操作規(guī)程并嚴(yán)格執(zhí)行。（二）假陰性1.標(biāo)準(zhǔn)血清不符合要求2.被檢紅細(xì)胞抗原性減弱3.紅細(xì)胞懸液濃度配置不當(dāng)4.將溶血反應(yīng)誤認(rèn)為不凝集5.血型物質(zhì)的中和作用

（三）假陽性1.紅細(xì)胞呈緡錢狀排列2.冷凝集3.全凝集與多凝集4.類B抗原5.自身免疫性溫性抗體冷凝集冷凝集素是指冷反應(yīng)型抗紅細(xì)胞抗體，這些自身抗體只能在低溫時(shí)與紅細(xì)胞膜相關(guān)抗原結(jié)合。疑為存在冷凝集時(shí)，正定型采用經(jīng)37度生理鹽水洗滌的紅細(xì)胞3次，反定型采用患者經(jīng)4度放置1hr后分離的血清，將反應(yīng)管放37度水浴5min后觀察結(jié)果。交叉配血存在冷凝集現(xiàn)象時(shí)，仍然認(rèn)為交叉配血是相合的，可以輸血。但需提醒臨床保溫輸血。紅細(xì)胞呈緡錢狀排列某些疾病如肝病、腎炎因患者血清中白蛋白含量低而致球蛋白含量相對或絕對性增高，使紅細(xì)胞成錢串狀排列，外觀類似凝集，真與假的區(qū)別是在鏡下觀察時(shí)，假凝集紅稀薄啊成錢串狀排列，形狀基本完整，加一滴等滲鹽水于玻片上并混勻后錢串狀排列消失，而真凝集加等滲鹽水紅細(xì)胞不會散開。全凝集或多凝集現(xiàn)象正常人紅細(xì)胞上有T抗原，血清中有抗T，但因紅細(xì)胞表面存在的唾液酸使T抗原無活性，如果紅細(xì)胞被細(xì)菌污染，細(xì)菌酶消化了紅細(xì)胞表面的唾液酸，暴露出T抗原而被激活，可與多數(shù)人血清凝集稱為多凝集，如與所有人血清都凝集稱為全凝集。出現(xiàn)這兩種現(xiàn)象時(shí)可用多份AB型血清加以證實(shí)，因此種現(xiàn)象與AB型血清也發(fā)生凝集，應(yīng)重新抽血。血型鑒定與交叉配血的異常及其克服辦法RBCT抗原

（無活性）RBCT抗原

（有活性）血清抗T抗體

（任何人）凝集

+細(xì)菌酶

激活

T凝集現(xiàn)象凝集特點(diǎn)：4℃>室溫>37℃。血型鑒定與交叉配血的異常及其克服辦法類B抗原ORBCARBC

凝集

ORBC類B抗原ARBC類B抗原

抗B

細(xì)菌大腸桿菌O86感染故常把O型誤定B型，A型誤定為AB型，呈假陽性。病情好轉(zhuǎn)時(shí)類B消失。交叉