病毒致瘤因素及其致瘤機理一、致瘤病毒：（一）致瘤病毒的定義（二）DNA致瘤病毒（三）RNA致瘤病毒二、致瘤病毒的致瘤機理（一）病毒癌基因（二）病毒癌基因及其前身細胞癌基因（三）病毒癌基因的基因產(chǎn)物（癌基因章詳細講）（四）致癌機制病毒致瘤因素及其致瘤機理一、致瘤病毒：

參考書：腫瘤基礎(chǔ)理論（朱世能主編）腫瘤學(xué)（曾益新主編）腫瘤分子生物學(xué)（孫靖中主編）預(yù)防腫瘤學(xué)基礎(chǔ)（湖醫(yī)腫瘤所編）腫瘤分子細胞生物學(xué)（陳意生、史景泉主編）參考書：腫瘤基礎(chǔ)理論（朱世能主編）一、致瘤病毒：

（一）致瘤病毒的定義1971年Henle提出腫瘤病毒的標(biāo)準(zhǔn)1.在人類腫瘤中檢測出病毒、病毒決定性抗原、或病毒相關(guān)核酸2.注射病毒可誘導(dǎo)非人類的靈長目動物（如猿、猴等）發(fā)生腫瘤3.在體外培養(yǎng)，病毒可使正常細胞轉(zhuǎn)化4.患者的抗病毒相關(guān)抗原抗體的頻率或滴定度明顯高于健康人或患其他腫瘤的病人一、致瘤病毒：

（一）致瘤病毒的定義1971年Henle提病毒致瘤必須具備下列證據(jù)：病毒感染在腫瘤發(fā)生之前腫瘤細胞中顯示病毒特異性抗原或特異性顆粒病毒DNA整合到宿主細胞的基因組中整合的病毒基因在體外能導(dǎo)致細胞惡性轉(zhuǎn)化，這些惡性細胞并能傳代消滅病毒應(yīng)該使該腫瘤不形成或至少使腫瘤的發(fā)病明顯減少腫瘤基礎(chǔ)理論：（朱世能主編）病毒致瘤必須具備下列證據(jù)：腫瘤基礎(chǔ)理論：（朱世能主編）雞肉瘤濾液

注射到小雞小雞得肉瘤提取病毒，電鏡觀察1910年Rous第一個發(fā)現(xiàn)腫瘤病毒：1966年得諾貝爾獎！雞肉瘤濾液注射到小雞小雞得肉瘤提取病毒，電鏡觀察1910年一些重要的致瘤病毒：發(fā)現(xiàn)年份發(fā)現(xiàn)者致瘤病毒

Ellermann/Bing雞白血病病毒

Rous雞肉瘤病毒1932Shope雞纖維瘤病毒1933Shope兔乳頭狀瘤病毒

Lucke蛙腎癌病毒1936Bittner小鼠乳腺癌病毒1951Gross小鼠白血病病毒

Gross/Stewart多瘤病毒1960Sweet/HillemanSV40病毒1962Trentin人腺病毒12型1964Epstein/BarrEB病毒1966Moloney小鼠肉瘤病毒1970Morgan猴皰疹病毒、、、、、1980Gall/Yoshida人類細胞白血病病毒一些重要的致瘤病毒：發(fā)現(xiàn)年份發(fā)現(xiàn)者（二）DNA致瘤病毒乳-多-空病毒人類乳頭狀瘤病毒HPV

（24種亞型）多瘤病毒科PY

小鼠多瘤病毒人類BK病毒人類JC病毒猴空泡病毒SV40腺病毒科（人）

高致瘤性、致瘤性、無致瘤性皰疹病毒科α-皰疹病毒單純皰疹病毒,水痘-帶狀病毒

β-皰疹病毒巨細胞病毒(CMV)

γ-皰疹病毒EB病毒乙型肝炎病毒(HBV)（二）DNA致瘤病毒乳-多-空病毒人類乳頭狀瘤病毒

衣殼核心殼粒被膜DNA致瘤病毒的共同特點:

超微結(jié)構(gòu)和DNA結(jié)構(gòu)

20面體對稱型,除皰疹病毒外皆無被膜(Envelope)核心----DNA和蛋白質(zhì)復(fù)合物外-------衣殼(Capsid)---由殼粒組成(Capsomere)衣殼核心殼粒被膜DNA致瘤病毒的共同特點:

超微結(jié)構(gòu)和DDNA病毒（無被膜）噬菌體DNA病毒（無被膜）噬菌體病毒的形狀和大小病毒的形狀和乙型病毒性肝炎病毒基因圖病毒直徑nm殼粒DNA結(jié)構(gòu)多瘤病毒4372雙股環(huán)狀乳頭狀瘤病毒5372雙股環(huán)狀皰疹病毒100162雙股線狀腺病毒70-90252雙股線狀肝炎病毒不完全環(huán)狀CentimeterMilliMicronano乙型病毒性肝炎病毒基因圖病毒水平感染,進入細胞后,因細胞的特性不同產(chǎn)生不同的結(jié)果,即為對細胞的選擇性允許細胞:(permissivecell)

病毒入細胞后繁殖,產(chǎn)生有感染的子病毒同時細胞溶解死亡(溶解性感染)不會導(dǎo)致細胞轉(zhuǎn)化

稱增殖性感染非允許細胞:(Non-permissivecell)

病毒入細胞后不繁殖,不產(chǎn)病毒細胞繼續(xù)存活能以某種方式存在發(fā)生整合,導(dǎo)致細胞轉(zhuǎn)化

稱非增殖性感染(2)DNA致瘤病毒的感染和復(fù)制水平感染,進入細胞后,因細胞的特性不同產(chǎn)生不同的結(jié)果,即病毒致瘤因素及其致瘤機理課件病毒的復(fù)制周期（ReplicationCycle）吸附、穿入、脫殼、生物合成、裝配釋放病毒的復(fù)制周期（ReplicationCycle）吸附HIV---CD4EBV---CR-2鼻病毒—ICAM-1吸附HIV---CD4病毒吸附電鏡圖病毒吸附穿入：三種方式融合（Fusion）胞飲（Viropexis）

直接進入脫殼：穿入：三種方式融合（Fusion）胞飲（Viropex致瘤性DNA病毒感染增殖性感染非增殖性感染細胞病變細胞轉(zhuǎn)化病毒抗原腫瘤抗原病毒病毒DNA腫瘤抗原病毒繁殖無病毒繁殖細胞死亡細胞惡性轉(zhuǎn)化—腫瘤細胞致瘤性DNA病毒感染增殖性感染非增殖性感染DNA病毒復(fù)制的主要步驟DNA病毒復(fù)制的主要步驟2.乳頭狀瘤病毒科:

已發(fā)現(xiàn)24種亞型主要誘發(fā)：良性乳頭狀瘤纖維乳頭狀瘤纖維瘤與腫瘤相關(guān)性：HPV-6HPV-11性傳遞的尖銳濕疣和猴乳頭狀瘤有關(guān)HPV-6HPV-16，18人宮頸癌檢出率高16，18型多見于宮頸浸潤癌陰莖癌生殖系尖銳濕疣在轉(zhuǎn)化細胞內(nèi)，環(huán)狀病毒基因組以游離基因(episome)形式存在2.乳頭狀瘤病毒科:

已發(fā)現(xiàn)24種亞型細胞分化HPV------感染表層生發(fā)細胞-----細胞分裂形成乳頭狀瘤底層增殖細胞-------不生成病毒僅有少量病毒顆粒表層角化細胞-------細胞停止分裂有很好允許作用產(chǎn)生大量HPV細胞分化HPV------感染表層生發(fā)細胞-----細胞分裂

3.皰疹病毒科病毒高相關(guān)腫瘤弱相關(guān)腫瘤α-皰疹病毒病毒復(fù)制周期短可引起宿主細胞病變

單純皰疹病毒Ⅰ---口腔癌單純皰疹病毒Ⅱ---宮頸癌水痘-帶狀皰疹病毒---β-皰疹病毒病毒復(fù)制周期長

宿主細胞病變作用慢

巨細胞病毒(CMV)Kaposi肉瘤宮頸癌前列腺癌γ-皰疹病毒宿主細胞范圍窄淋巴樣細胞/T/B中復(fù)制

EB病毒Burkitt’sL喉會厭部癌鼻咽癌腭扁桃體免疫母細胞肉瘤腮腺腫瘤3.皰疹病毒科病毒EB病毒相關(guān)疾病舉例：

*非洲兒童淋巴瘤(Burkitt’s淋巴瘤）①1964年Epstein和Barr在淋巴瘤的培養(yǎng)標(biāo)本中分離到

EB病毒②所有患者都有病毒抗體存在：抗-VCA抗-MA抗-EA抗-EBNA③分子雜交法分析＞98﹪的標(biāo)本皆有EBV-DNA存在其他因素合同：感染，遺傳等EB病毒相關(guān)疾病舉例：

*非洲兒童淋巴瘤(Burkitt’*鼻咽癌

①鼻咽癌患者有高滴度的VCA和EA抗體

IgA/EAIgA/VCA鼻咽癌組96﹪82﹪對照組＜6﹪＜6﹪

廣西蒼梧縣：14829人IgA/VCA+3539人

NPC55人陽性者隨訪1~3年：又發(fā)現(xiàn)NPC32人②抗補體免疫法：癌細胞EBNA+③分子雜交法：病毒基因鼻咽癌＞90﹪慢性鼻咽炎≈20﹪其他腫瘤/正常組織陰性*鼻咽癌

①鼻咽癌患者有高滴度的VCA和EA抗體④WesternBlot:鼻咽癌組織中有EB病毒蛋白表達

LMPEBNA1EBNA2~6鼻咽癌74﹪81﹪-其他腫瘤/正常組織---

LMP-1表達上調(diào)凋亡調(diào)節(jié)基因bcl-2---阻止受感染細胞凋亡—癌細胞增生⑤EB病毒W(wǎng)片段可能是轉(zhuǎn)化基因：W+Y.H轉(zhuǎn)染3T3細胞細胞轉(zhuǎn)化裸鼠成瘤（纖維肉瘤）④WesternBlot:鼻咽癌組織中有EB病毒蛋白表達

puro

SV

GFPpSV40

polyA

LMP1

pSV40

pCMV

HSV

SV

polyA

polyA

PAT-GFP-LMP1結(jié)構(gòu)示意圖PatersonInstituteforCancerResearch,ChristieCRCResearchCenter,Manchester,UK材料方法與技術(shù)路線puroSVCNE1電轉(zhuǎn)染puromycin堿裂解法、PG8000、EcoRⅠ熒光顯微鏡(GFP)流式細胞儀(GFP)免疫組化(CS1-4)Westernblot(S12)材料方法與技術(shù)路線CNE1CNE1GCNE1GLPAT-GFP-LMP1PAT-GFPCNE1電轉(zhuǎn)染puromycin堿裂解法、PG8000、Ec材料方法與技術(shù)路線細胞增殖實驗細胞周期體內(nèi)倍增時間、生長率平板克隆形成率裸鼠體內(nèi)成瘤率裸鼠移植瘤潛伏期角蛋白表達裸鼠移植瘤轉(zhuǎn)移率流式細胞儀PI、Hoechst3325

雙熒光染色DNA片斷分析免疫組化Westernblot平板克隆形成試驗轉(zhuǎn)移能力增殖能力惡性程度凋亡放射敏感性CNE1CNE1GCNE1GL材料方法與技術(shù)路線細胞增殖實驗平板克隆形成率裸鼠移植瘤轉(zhuǎn)移率惡性腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移原發(fā)灶侵襲正常組織轉(zhuǎn)移瘤MMPsMMP-2MMP-9降解細胞外基質(zhì)基底膜立題依據(jù)惡性腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移原發(fā)灶侵襲正常組織轉(zhuǎn)移瘤MMPsMMP-臨床病理部分：技術(shù)路線慢性鼻咽炎（30例）鼻咽癌（30例）鼻咽癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶（24例）LMP1MMP-2MMP-9免疫組化法臨床病理部分：技術(shù)路線慢性鼻咽炎（30例）鼻咽癌（30例）鼻結(jié)果臨床病理部分：LMP1MMP-2MMP-9positiverate%020406080100鼻咽炎鼻咽癌轉(zhuǎn)移灶轉(zhuǎn)移灶臨床標(biāo)本免疫組化結(jié)果結(jié)果臨床病理部分：LMP1MMP-2MMP-9positivLMP1在NPC及NPC轉(zhuǎn)移灶組織中的表達情況：LMP1在NPC及NPC轉(zhuǎn)移灶組織中的表達情況：MMP-2、MMP-9在NPC及NPC轉(zhuǎn)移灶中的表達MMP-2、MMP-9在NPC及NPC轉(zhuǎn)移灶中的表達實驗病理部分：技術(shù)路線CNE1CNE1CNE1CNE1CNE1GLCNE1CNE1CNE1CNE1GLCNE1CNE1CNE1GLCNE1GLCNE1GLCNE1GLCNE1-GL細胞亞克隆篩選CNE1CNE2ZCNE1GLMMP-2MMP-9免疫組化法Western-BlotCNE1CNE1GL基底膜粘附實驗細胞運動實驗重組基底膜侵襲實驗粘附能力運動能力侵襲能力實驗病理部分：技術(shù)路線CNE1CNE1CNE1CNE1CNE實驗病理部分：結(jié)果CNE1、CNE2Z和CNE1GL細胞MMP-2、MMP-9表達情況（98.2%）（1.8%）（92.6%）（7.4%）491/5009/500463/50037/500CNE1-GL（47.6%）（52.4%）（29.6%）（70.4%）238/500262/500148/500352/500CNE2Z（30.2%）（69.8%）（15.5%）（84.5%）151/500349/50077/500423/500CNE1陽性強陽性強陽性陽性MMP-2MMP-9細胞系MMP-2MMP-9Highpositiverate%020406080100CNE1CNE2ZCNE1GL實驗病理部分：結(jié)果CNE1、CNE2Z和CNE1GL細胞MM實驗病理部分：結(jié)果MMP-2和MMP-9在三組細胞中的表達（Western-Blot結(jié)果）：實驗病理部分：結(jié)果MMP-2和MMP-9在三組細胞中的表達（實驗病理部分：結(jié)果CNE1和CNE1-GL細胞與基底膜成分粘附實驗OD值細胞系

Mean±S.D.

CNE10.9519±0.068CNE1-GL1.2508±0.0711實驗病理部分：結(jié)果CNE1和CNE1-GL細胞與基底膜成分粘實驗病理部分：結(jié)果CNE1和CNE1-GL細胞運動實驗結(jié)果細胞系例數(shù)Mean±S.D.CNE1CNE1-GL33123.667±5.50855.667±5.044方差分析：兩組比較P＜0.001CNE1和CNE1-GL細胞侵襲實驗結(jié)果細胞系例數(shù)Mean±S.D.CNE1CNE1-GL33339.00±35.8376157.67±23.1805方差分析：兩組比較P＜0.01實驗病理部分：結(jié)果CNE1和CNE1-GL細胞運動實驗結(jié)果細CNE1細胞運動實驗結(jié)果（HE染色×200）CNE1-GL細胞運動實驗結(jié)果（HE染色×200）CNE1細胞運動實驗結(jié)果（HE染色×200）CNE1-GL細CNE1細胞侵襲實驗結(jié)果（HE染色×200）CNE1-GL細胞侵襲實驗結(jié)果（HE染色×200）CNE1細胞侵襲實驗結(jié)果（HE染色×200）CNE1-GL細4.基因組/轉(zhuǎn)化基因/病毒抗原

*基因組：直線雙鏈長度為140~235kb

封閉環(huán)狀（如EB病毒）在細胞核的核小體中由宿主細胞DNA聚合酶進行復(fù)制

例EBV基因組：DNA長度173kb分子量110×106道爾頓*轉(zhuǎn)化基因:HSV-I23kbMtrISV40:LT

HSV-II7.5kbMtrIIHPV:E6,E722kbMtrIII腺V:E1A,E1B

EBVW片段*病毒抗原：EBNA2LMP4.基因組/轉(zhuǎn)化基因/病毒抗原

*基因組：直線雙鏈長度為（三）RNA致瘤病毒1.概述：10多個科僅有一個科的少數(shù)病毒致瘤

病毒類型病毒名稱可引起腫瘤

RNAC型病毒白血病

B型病毒乳腺癌

HTLV(HIV)人T細胞白血病/淋巴瘤特點：均含逆轉(zhuǎn)錄酶，故稱逆轉(zhuǎn)錄病毒/逆病毒（Retrovirus）2.超微結(jié)構(gòu)及生物學(xué)分類：

①超微結(jié)構(gòu)：圓形/類圓形中央：擬核nucleoid外層：被膜（糖蛋白+脂類）envelope（三）RNA致瘤病毒1.概述：10多個科僅有一個科的少數(shù)②內(nèi)源性/外源性RNA致瘤病毒

內(nèi)源性前病毒外源性RNA致瘤病毒來源多來源正常組織多來自惡性腫瘤傳播方式性細胞垂直傳遞感染方式水平傳播

整合于宿主細胞感染因子水平傳播

中的病毒基因可感染生殖細胞

轉(zhuǎn)為垂直傳播病毒復(fù)制基本靜止感染細胞中復(fù)制不復(fù)制病毒不引起細胞死亡致瘤作用不致瘤有致瘤作用

除經(jīng)誘導(dǎo)體外使細胞轉(zhuǎn)化（放射/化學(xué)物）②內(nèi)源性/外源性RNA致瘤病毒外源性致瘤病毒的復(fù)制：V-RNA逆轉(zhuǎn)錄酶ss-V-cDNAds-V-DNA聚合酶V-DNAV-mRNAV-RNA+protein外源性致瘤病毒的復(fù)制：V-RNA逆轉(zhuǎn)錄酶ss-V-cDNAd

③急性和慢性RNA致瘤病毒:

按致瘤潛伏期和體外轉(zhuǎn)化能力

致瘤潛伏期體外轉(zhuǎn)化能力病毒復(fù)制致癌基因急性~

3~4周有缺失性病毒有V-onc需輔助病毒轉(zhuǎn)化蛋白才能復(fù)制細胞轉(zhuǎn)化慢性~4~12月無非缺失性病毒無V-onc可復(fù)制完整病毒③急性和慢性RNA致瘤病毒:

3.RNA致瘤病毒的基因結(jié)構(gòu)：病毒基因排列：

gagpolenvonc主要結(jié)構(gòu)多聚酶被膜腫瘤蛋白基因基因基因基因基因產(chǎn)物：主要結(jié)構(gòu)蛋白逆轉(zhuǎn)錄酶被膜糖蛋白轉(zhuǎn)化蛋白V-onc:編碼與細胞惡性轉(zhuǎn)化有關(guān)的轉(zhuǎn)化蛋白只有急性RNA病毒有v-onc3.RNA致瘤病毒的基因結(jié)構(gòu)：病毒基因排列：二、致瘤病毒的致瘤機理病毒：病毒癌基因正常細胞：原癌基因癌細胞：癌基因

胚胎期細胞分化(正常成熟細胞)癌細胞

癌基因活性-----------------二、致瘤病毒的致瘤機理（一）病毒癌基因RNA-V:H-rasK-rasablfossis…20多種（慢性病毒不含癌基因）DNA-V:EBV:EBNA2,LMP-1???SV40:A基因（早期基因）編碼T抗原細胞癌基因與病毒癌基因同源：病毒癌基因來源于細胞癌基因（后一章講）（一）病毒癌基因RNA-V:H-rasK-ra（二）病毒癌基因及其前身細胞癌基因原癌基因：在正常細胞中適度表達，是維持細胞最基本功能（生長和分化等）所必需的。

目前認為：

RNA致瘤病毒中的癌基因?qū)嶋H是來源于細胞的癌基因，當(dāng)逆轉(zhuǎn)錄病毒DNA整合入細胞后，在細胞DNA和病毒DNA之間發(fā)生轉(zhuǎn)錄作用，使病毒捕捉到細胞癌基因而成為病毒癌基因組的組成部分。（三）病毒癌基因的基因產(chǎn)物（癌基因章詳細講）（二）病毒癌基因及其前身細胞癌基因（四）致癌機制

※DNA致瘤病毒的致瘤機理：病毒DNA整合激活原癌基因惡變至宿主細胞DNA細胞遺傳細胞代謝細胞分化惡變性狀改變調(diào)節(jié)功能增殖失控紊亂病毒基因組轉(zhuǎn)化細胞膜結(jié)合改變細惡變編碼產(chǎn)物蛋白細胞DNA結(jié)合胞調(diào)節(jié)（四）致癌機制

※DNA致瘤病毒的致瘤機理：獲得性環(huán)境因素（化學(xué)、物理、病毒）體細胞基因組突變遺傳性突變激活促進生長的癌基因滅活腫瘤抑制基因癌基因產(chǎn)物的表達抑癌基因產(chǎn)物的喪失惡性腫瘤獲得性環(huán)境因素體細胞遺傳性突變激活促進生長的滅活腫瘤抑制癌基轉(zhuǎn)化蛋白致瘤性DNA病毒轉(zhuǎn)化細胞的機理轉(zhuǎn)化性V-mRNA病毒核漿轉(zhuǎn)化蛋白致瘤性DNA病毒轉(zhuǎn)化細胞的機理轉(zhuǎn)化性V-mRNA病毒※RNA致瘤病毒的致瘤機理

*急性RNA致瘤病毒（有病毒癌基因，致瘤潛伏期短）病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄酶病毒c-DNA病毒c-DNA整合至宿主細胞DNA病毒基因組中LTR的轉(zhuǎn)錄激活作用病毒基因組包含病毒癌基因高度表達病毒癌基因產(chǎn)物作用導(dǎo)致細胞惡性轉(zhuǎn)化※RNA致瘤病毒的致瘤機理

*急性RNA致瘤病毒（有病毒癌基*慢性RNA致瘤病毒（無病毒癌基因，致瘤潛伏期長）U3RU5U3RU5RU5RU5細胞DNALTRgag----pol-----envLTR細胞原癌基因正常病毒DNA含有病毒的癌基因產(chǎn)物L(fēng)TR:前病毒末端重復(fù)順序U5-:LTR5’端順序，含病毒啟動子U3-:LTR3’端順序R:20個核苷酸左右的短順序，使合成的起始部位*慢性RNA致瘤病毒（無病毒癌基因，致瘤潛伏期長）U3R正鏈RNA病毒復(fù)制的主要步驟正鏈RNA病毒復(fù)制的主要步驟負鏈RNA病毒復(fù)制的主要步驟負鏈RNA病毒復(fù)制的主要步驟病毒致瘤因素及其致瘤機理一、致瘤病毒：（一）致瘤病毒的定義（二）DNA致瘤病毒（三）RNA致瘤病毒二、致瘤病毒的致瘤機理（一）病毒癌基因（二）病毒癌基因及其前身細胞癌基因（三）病毒癌基因的基因產(chǎn)物（癌基因章詳細講）（四）致癌機制病毒致瘤因素及其致瘤機理一、致瘤病毒：

參考書：腫瘤基礎(chǔ)理論（朱世能主編）腫瘤學(xué)（曾益新主編）腫瘤分子生物學(xué)（孫靖中主編）預(yù)防腫瘤學(xué)基礎(chǔ)（湖醫(yī)腫瘤所編）腫瘤分子細胞生物學(xué)（陳意生、史景泉主編）參考書：腫瘤基礎(chǔ)理論（朱世能主編）一、致瘤病毒：

（一）致瘤病毒的定義1971年Henle提出腫瘤病毒的標(biāo)準(zhǔn)1.在人類腫瘤中檢測出病毒、病毒決定性抗原、或病毒相關(guān)核酸2.注射病毒可誘導(dǎo)非人類的靈長目動物（如猿、猴等）發(fā)生腫瘤3.在體外培養(yǎng)，病毒可使正常細胞轉(zhuǎn)化4.患者的抗病毒相關(guān)抗原抗體的頻率或滴定度明顯高于健康人或患其他腫瘤的病人一、致瘤病毒：

（一）致瘤病毒的定義1971年Henle提病毒致瘤必須具備下列證據(jù)：病毒感染在腫瘤發(fā)生之前腫瘤細胞中顯示病毒特異性抗原或特異性顆粒病毒DNA整合到宿主細胞的基因組中整合的病毒基因在體外能導(dǎo)致細胞惡性轉(zhuǎn)化，這些惡性細胞并能傳代消滅病毒應(yīng)該使該腫瘤不形成或至少使腫瘤的發(fā)病明顯減少腫瘤基礎(chǔ)理論：（朱世能主編）病毒致瘤必須具備下列證據(jù)：腫瘤基礎(chǔ)理論：（朱世能主編）雞肉瘤濾液

注射到小雞小雞得肉瘤提取病毒，電鏡觀察1910年Rous第一個發(fā)現(xiàn)腫瘤病毒：1966年得諾貝爾獎！雞肉瘤濾液注射到小雞小雞得肉瘤提取病毒，電鏡觀察1910年一些重要的致瘤病毒：發(fā)現(xiàn)年份發(fā)現(xiàn)者致瘤病毒

Ellermann/Bing雞白血病病毒

Rous雞肉瘤病毒1932Shope雞纖維瘤病毒1933Shope兔乳頭狀瘤病毒

Lucke蛙腎癌病毒1936Bittner小鼠乳腺癌病毒1951Gross小鼠白血病病毒

Gross/Stewart多瘤病毒1960Sweet/HillemanSV40病毒1962Trentin人腺病毒12型1964Epstein/BarrEB病毒1966Moloney小鼠肉瘤病毒1970Morgan猴皰疹病毒、、、、、1980Gall/Yoshida人類細胞白血病病毒一些重要的致瘤病毒：發(fā)現(xiàn)年份發(fā)現(xiàn)者（二）DNA致瘤病毒乳-多-空病毒人類乳頭狀瘤病毒HPV

（24種亞型）多瘤病毒科PY

小鼠多瘤病毒人類BK病毒人類JC病毒猴空泡病毒SV40腺病毒科（人）

高致瘤性、致瘤性、無致瘤性皰疹病毒科α-皰疹病毒單純皰疹病毒,水痘-帶狀病毒

β-皰疹病毒巨細胞病毒(CMV)

γ-皰疹病毒EB病毒乙型肝炎病毒(HBV)（二）DNA致瘤病毒乳-多-空病毒人類乳頭狀瘤病毒

衣殼核心殼粒被膜DNA致瘤病毒的共同特點:

超微結(jié)構(gòu)和DNA結(jié)構(gòu)

20面體對稱型,除皰疹病毒外皆無被膜(Envelope)核心----DNA和蛋白質(zhì)復(fù)合物外-------衣殼(Capsid)---由殼粒組成(Capsomere)衣殼核心殼粒被膜DNA致瘤病毒的共同特點:

超微結(jié)構(gòu)和DDNA病毒（無被膜）噬菌體DNA病毒（無被膜）噬菌體病毒的形狀和大小病毒的形狀和乙型病毒性肝炎病毒基因圖病毒直徑nm殼粒DNA結(jié)構(gòu)多瘤病毒4372雙股環(huán)狀乳頭狀瘤病毒5372雙股環(huán)狀皰疹病毒100162雙股線狀腺病毒70-90252雙股線狀肝炎病毒不完全環(huán)狀CentimeterMilliMicronano乙型病毒性肝炎病毒基因圖病毒水平感染,進入細胞后,因細胞的特性不同產(chǎn)生不同的結(jié)果,即為對細胞的選擇性允許細胞:(permissivecell)

病毒入細胞后繁殖,產(chǎn)生有感染的子病毒同時細胞溶解死亡(溶解性感染)不會導(dǎo)致細胞轉(zhuǎn)化

稱增殖性感染非允許細胞:(Non-permissivecell)

病毒入細胞后不繁殖,不產(chǎn)病毒細胞繼續(xù)存活能以某種方式存在發(fā)生整合,導(dǎo)致細胞轉(zhuǎn)化

稱非增殖性感染(2)DNA致瘤病毒的感染和復(fù)制水平感染,進入細胞后,因細胞的特性不同產(chǎn)生不同的結(jié)果,即病毒致瘤因素及其致瘤機理課件病毒的復(fù)制周期（ReplicationCycle）吸附、穿入、脫殼、生物合成、裝配釋放病毒的復(fù)制周期（ReplicationCycle）吸附HIV---CD4EBV---CR-2鼻病毒—ICAM-1吸附HIV---CD4病毒吸附電鏡圖病毒吸附穿入：三種方式融合（Fusion）胞飲（Viropexis）

直接進入脫殼：穿入：三種方式融合（Fusion）胞飲（Viropex致瘤性DNA病毒感染增殖性感染非增殖性感染細胞病變細胞轉(zhuǎn)化病毒抗原腫瘤抗原病毒病毒DNA腫瘤抗原病毒繁殖無病毒繁殖細胞死亡細胞惡性轉(zhuǎn)化—腫瘤細胞致瘤性DNA病毒感染增殖性感染非增殖性感染DNA病毒復(fù)制的主要步驟DNA病毒復(fù)制的主要步驟2.乳頭狀瘤病毒科:

已發(fā)現(xiàn)24種亞型主要誘發(fā)：良性乳頭狀瘤纖維乳頭狀瘤纖維瘤與腫瘤相關(guān)性：HPV-6HPV-11性傳遞的尖銳濕疣和猴乳頭狀瘤有關(guān)HPV-6HPV-16，18人宮頸癌檢出率高16，18型多見于宮頸浸潤癌陰莖癌生殖系尖銳濕疣在轉(zhuǎn)化細胞內(nèi)，環(huán)狀病毒基因組以游離基因(episome)形式存在2.乳頭狀瘤病毒科:

已發(fā)現(xiàn)24種亞型細胞分化HPV------感染表層生發(fā)細胞-----細胞分裂形成乳頭狀瘤底層增殖細胞-------不生成病毒僅有少量病毒顆粒表層角化細胞-------細胞停止分裂有很好允許作用產(chǎn)生大量HPV細胞分化HPV------感染表層生發(fā)細胞-----細胞分裂

3.皰疹病毒科病毒高相關(guān)腫瘤弱相關(guān)腫瘤α-皰疹病毒病毒復(fù)制周期短可引起宿主細胞病變

單純皰疹病毒Ⅰ---口腔癌單純皰疹病毒Ⅱ---宮頸癌水痘-帶狀皰疹病毒---β-皰疹病毒病毒復(fù)制周期長

宿主細胞病變作用慢

巨細胞病毒(CMV)Kaposi肉瘤宮頸癌前列腺癌γ-皰疹病毒宿主細胞范圍窄淋巴樣細胞/T/B中復(fù)制

EB病毒Burkitt’sL喉會厭部癌鼻咽癌腭扁桃體免疫母細胞肉瘤腮腺腫瘤3.皰疹病毒科病毒EB病毒相關(guān)疾病舉例：

*非洲兒童淋巴瘤(Burkitt’s淋巴瘤）①1964年Epstein和Barr在淋巴瘤的培養(yǎng)標(biāo)本中分離到

EB病毒②所有患者都有病毒抗體存在：抗-VCA抗-MA抗-EA抗-EBNA③分子雜交法分析＞98﹪的標(biāo)本皆有EBV-DNA存在其他因素合同：感染，遺傳等EB病毒相關(guān)疾病舉例：

*非洲兒童淋巴瘤(Burkitt’*鼻咽癌

①鼻咽癌患者有高滴度的VCA和EA抗體

IgA/EAIgA/VCA鼻咽癌組96﹪82﹪對照組＜6﹪＜6﹪

廣西蒼梧縣：14829人IgA/VCA+3539人

NPC55人陽性者隨訪1~3年：又發(fā)現(xiàn)NPC32人②抗補體免疫法：癌細胞EBNA+③分子雜交法：病毒基因鼻咽癌＞90﹪慢性鼻咽炎≈20﹪其他腫瘤/正常組織陰性*鼻咽癌

①鼻咽癌患者有高滴度的VCA和EA抗體④WesternBlot:鼻咽癌組織中有EB病毒蛋白表達

LMPEBNA1EBNA2~6鼻咽癌74﹪81﹪-其他腫瘤/正常組織---

LMP-1表達上調(diào)凋亡調(diào)節(jié)基因bcl-2---阻止受感染細胞凋亡—癌細胞增生⑤EB病毒W(wǎng)片段可能是轉(zhuǎn)化基因：W+Y.H轉(zhuǎn)染3T3細胞細胞轉(zhuǎn)化裸鼠成瘤（纖維肉瘤）④WesternBlot:鼻咽癌組織中有EB病毒蛋白表達

puro

SV

GFPpSV40

polyA

LMP1

pSV40

pCMV

HSV

SV

polyA

polyA

PAT-GFP-LMP1結(jié)構(gòu)示意圖PatersonInstituteforCancerResearch,ChristieCRCResearchCenter,Manchester,UK材料方法與技術(shù)路線puroSVCNE1電轉(zhuǎn)染puromycin堿裂解法、PG8000、EcoRⅠ熒光顯微鏡(GFP)流式細胞儀(GFP)免疫組化(CS1-4)Westernblot(S12)材料方法與技術(shù)路線CNE1CNE1GCNE1GLPAT-GFP-LMP1PAT-GFPCNE1電轉(zhuǎn)染puromycin堿裂解法、PG8000、Ec材料方法與技術(shù)路線細胞增殖實驗細胞周期體內(nèi)倍增時間、生長率平板克隆形成率裸鼠體內(nèi)成瘤率裸鼠移植瘤潛伏期角蛋白表達裸鼠移植瘤轉(zhuǎn)移率流式細胞儀PI、Hoechst3325

雙熒光染色DNA片斷分析免疫組化Westernblot平板克隆形成試驗轉(zhuǎn)移能力增殖能力惡性程度凋亡放射敏感性CNE1CNE1GCNE1GL材料方法與技術(shù)路線細胞增殖實驗平板克隆形成率裸鼠移植瘤轉(zhuǎn)移率惡性腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移原發(fā)灶侵襲正常組織轉(zhuǎn)移瘤MMPsMMP-2MMP-9降解細胞外基質(zhì)基底膜立題依據(jù)惡性腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移原發(fā)灶侵襲正常組織轉(zhuǎn)移瘤MMPsMMP-臨床病理部分：技術(shù)路線慢性鼻咽炎（30例）鼻咽癌（30例）鼻咽癌頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶（24例）LMP1MMP-2MMP-9免疫組化法臨床病理部分：技術(shù)路線慢性鼻咽炎（30例）鼻咽癌（30例）鼻結(jié)果臨床病理部分：LMP1MMP-2MMP-9positiverate%020406080100鼻咽炎鼻咽癌轉(zhuǎn)移灶轉(zhuǎn)移灶臨床標(biāo)本免疫組化結(jié)果結(jié)果臨床病理部分：LMP1MMP-2MMP-9positivLMP1在NPC及NPC轉(zhuǎn)移灶組織中的表達情況：LMP1在NPC及NPC轉(zhuǎn)移灶組織中的表達情況：MMP-2、MMP-9在NPC及NPC轉(zhuǎn)移灶中的表達MMP-2、MMP-9在NPC及NPC轉(zhuǎn)移灶中的表達實驗病理部分：技術(shù)路線CNE1CNE1CNE1CNE1CNE1GLCNE1CNE1CNE1CNE1GLCNE1CNE1CNE1GLCNE1GLCNE1GLCNE1GLCNE1-GL細胞亞克隆篩選CNE1CNE2ZCNE1GLMMP-2MMP-9免疫組化法Western-BlotCNE1CNE1GL基底膜粘附實驗細胞運動實驗重組基底膜侵襲實驗粘附能力運動能力侵襲能力實驗病理部分：技術(shù)路線CNE1CNE1CNE1CNE1CNE實驗病理部分：結(jié)果CNE1、CNE2Z和CNE1GL細胞MMP-2、MMP-9表達情況（98.2%）（1.8%）（92.6%）（7.4%）491/5009/500463/50037/500CNE1-GL（47.6%）（52.4%）（29.6%）（70.4%）238/500262/500148/500352/500CNE2Z（30.2%）（69.8%）（15.5%）（84.5%）151/500349/50077/500423/500CNE1陽性強陽性強陽性陽性MMP-2MMP-9細胞系MMP-2MMP-9Highpositiverate%020406080100CNE1CNE2ZCNE1GL實驗病理部分：結(jié)果CNE1、CNE2Z和CNE1GL細胞MM實驗病理部分：結(jié)果MMP-2和MMP-9在三組細胞中的表達（Western-Blot結(jié)果）：實驗病理部分：結(jié)果MMP-2和MMP-9在三組細胞中的表達（實驗病理部分：結(jié)果CNE1和CNE1-GL細胞與基底膜成分粘附實驗OD值細胞系

Mean±S.D.

CNE10.9519±0.068CNE1-GL1.2508±0.0711實驗病理部分：結(jié)果CNE1和CNE1-GL細胞與基底膜成分粘實驗病理部分：結(jié)果CNE1和CNE1-GL細胞運動實驗結(jié)果細胞系例數(shù)Mean±S.D.CNE1CNE1-GL33123.667±5.50855.667±5.044方差分析：兩組比較P＜0.001CNE1和CNE1-GL細胞侵襲實驗結(jié)果細胞系例數(shù)Mean±S.D.CNE1CNE1-GL33339.00±35.8376157.67±23.1805方差分析：兩組比較P＜0.01實驗病理部分：結(jié)果CNE1和CNE1-GL細胞運動實驗結(jié)果細CNE1細胞運動實驗結(jié)果（HE染色×200）CNE1-GL細胞運動實驗結(jié)果（HE染色×200）CNE1細胞運動實驗結(jié)果（HE染色×200）CNE1-GL細CNE1細胞侵襲實驗結(jié)果（HE染色×200）CNE1-GL細胞侵襲實驗結(jié)果（HE染色×200）CNE1細胞侵襲實驗結(jié)果（HE染色×200）CNE1-GL細4.基因組/轉(zhuǎn)化基因/病毒抗原

*基因組：直線雙鏈長度為140~235kb

封閉環(huán)狀（如EB病毒）在細胞核的核小體中由宿主細胞DNA聚合酶進行復(fù)制

例EBV基因組：DNA長度173kb分子量110×106道爾頓*轉(zhuǎn)化基因:HSV-I23kbMtrISV40:LT

HSV-II7.5kbMtrIIHPV:E6,E722kbMtrIII腺V:E1A,E1B

EBVW片段*病毒抗原：EBNA2LMP4.基因組/轉(zhuǎn)化基因/病毒抗原

*基因組：直線雙鏈長度為（三）RNA致瘤病毒1.概述：10多個科僅有一個科的少數(shù)病毒致瘤

病毒類型病毒名稱可引起腫瘤

RNAC型病毒白血病

B型病毒乳腺癌

HTLV(HIV)人T細胞白血病/淋巴瘤特點：均含逆轉(zhuǎn)錄酶，故稱逆轉(zhuǎn)錄病毒/逆病毒（Retrovirus）2.超微結(jié)構(gòu)及生物學(xué)分類：

①超微結(jié)構(gòu)：圓形/類圓形中央：擬核nucleoid外層：被膜（糖蛋白+脂類）envelope（三）RNA致瘤病毒1.概述：10多個科僅有一個科的少數(shù)②內(nèi)源性/外源性RNA致瘤病毒

內(nèi)源性前病毒外源性RNA致瘤病毒來源多來源正常組織多來自惡性腫瘤傳播方式性細胞垂直傳遞感染方式水平傳播

整合于宿主細胞感染因子水平傳播

中的病毒基因可感染生殖細胞

轉(zhuǎn)為垂直傳播病毒復(fù)制基本靜止感染細胞中復(fù)制