第三章生物制品的制備原料的選擇原則：①有效成分含量高，新鮮；②原料來源豐富，產(chǎn)地較近；③原料中雜質(zhì)含量少；④原料成本低等。原料的選擇注意事項：①植物原料生長的季節(jié)性；②微生物原料的對數(shù)期；③動物原料的年齡與性別。原料的預處理與保存：①動物原料：采集后要立即處理，去除結(jié)締組織、脂肪組織等，并迅速冷凍貯存。②植物原料：要擇時采集并就地去除不用的部分，保鮮處理；③微生物原料：要及時將菌細胞與培養(yǎng)液分開，進行保鮮處理。原料的保存方法主要有：①冷凍法②有機溶劑脫水法③防腐劑保鮮常用的破碎方法：①磨切法②壓力法③反復凍融法④超聲波振蕩破碎法⑤自溶法或酶解法提取注意事項：①選擇提取試劑。②考慮提取溶劑的用量及提取次數(shù)、提取時間。③注意提取的溫度、pH、變性劑等因素。分離純化技術(shù)應(yīng)滿足的要求：①技術(shù)條件要溫和，能保持目的產(chǎn)物的生物活性；

②選擇性要好，能從復雜的混合物中有效地將目的產(chǎn)物分離出來，達到較高純化倍數(shù)；

③收率要高；

④兩個技術(shù)之間要能直接銜接，不需要對物料加以處理或調(diào)整；

⑤分離純化過程要快，能夠滿足高生產(chǎn)率的需求。分離純化主要依賴色譜分離方法。色譜技術(shù)是下游精制階段的常用手段，該法優(yōu)點是具有多種多樣的分離機制，設(shè)備簡單，便于自動化控制和分離過程中無發(fā)熱等有害效應(yīng)。蛋白質(zhì)類制品的分離純化方法：(1)沉淀法：原理是使蛋白質(zhì)膠體顆粒破壞，從而沉淀蛋白質(zhì)。常用的有鹽析法、有機溶劑沉淀法、等電點沉淀法、與靶物質(zhì)結(jié)合沉淀法（如抗體—抗原）等。(2)按分子大小分離的方法：有超濾法和透折法（即膜分離方法）、凝膠層析法、超速離心法等。其中膜分離法可用于生物大分子物質(zhì)的濃縮、分級和脫鹽。(3)按分子所帶電荷進行分離的方法：離子交換柱層析法、電泳法、等電聚焦法等。(4)親和層析法核酸類藥物生產(chǎn)方法：主要有提取法和發(fā)酵法。糖類制品的分離純化方法：（1）提取方法：①非降解法適用于從含一種粘多糖的動物組織中提取粘多糖，提取采用的溶劑是水或鹽溶液。②降解法（degradation）適用于從組織中提取結(jié)合比較牢固的粘多糖。（2）分離方法：沉淀法和離子交換層析法。脂類制品的分離純化方法：沉淀法、吸附層析法、離子交換層析法洗脫一般是采用極性逐漸增大的洗脫液來進行，非極性的先流出，極性的后流出。氨基酸類制品的分離純化方法氨基酸的生產(chǎn)方法：蛋白質(zhì)水解法（酸水解、堿水解和酶水解）、發(fā)酵法①用鹽酸水解為常用方法，其優(yōu)點是水解迅速、完全，產(chǎn)物全部是L—型氨基酸，缺點是色氨酸全部被破壞，絲氨酸等部分被破壞。②堿水解法易產(chǎn)生消旋作用，較少應(yīng)用。③酶水解法水解不夠完全。氨基酸的分離方法：有沉淀法、吸附法和離子交換法人血漿白蛋白制劑的制備白蛋白又稱清蛋白，白蛋白是血漿蛋白中含量最高（3.8～4.8%）、分子量最小、分子數(shù)最多的一類蛋白質(zhì)。從人體中分離的白蛋白有兩種：一種是從健康人血漿中分離制得的人血清白蛋白，另一種是從健康產(chǎn)婦胎盤中分離制得的胎盤白蛋白。白蛋白工藝要點：①絡(luò)合：對于絡(luò)合所要求的pH值，可以略高些，這樣，白蛋白絡(luò)合完全，絡(luò)合物形成一個相當硬的塊，傾倒上清液方便，損失少。但不能太高，以防絡(luò)合血漿中的其它蛋白，影響解離與白蛋白制劑的純度。若pH值偏低，絡(luò)合不完全，絡(luò)合物松軟，甚至成湯狀，不利于傾去上清液。血漿攪拌用NaHCO3調(diào)節(jié)pH至8.5-8.7之間，緩慢加入與血漿等體積的2.3%利凡諾溶液，邊加邊攪拌，充分絡(luò)合后，靜置2~4h，分離上清與絡(luò)合物沉淀。加入2.3%利凡諾溶液比加入5%利凡諾溶液的效果好？因為加5%利凡諾溶液常造成滅活時白蛋白部分變性或者分裝困難。加入2.3%利凡諾溶液的體積一般不超過血漿體積的一半。這可能是加入利凡諾溶液除去了解離物中過多的Cl-而澄清，或者是加入的利凡諾（過量）使白蛋白與利凡諾的絡(luò)合物反溶，從而使造成混濁的物質(zhì)消失，達到澄清的目的。②解離：生產(chǎn)中要嚴格控制溶液的溫度。25℃左右室溫，絡(luò)合物形成一個硬塊，利于去上清和解離。溫度太低，雖然不影響絡(luò)合，但絡(luò)合物呈稀糊狀，傾倒上清液時常會丟失部分絡(luò)合物，而且絡(luò)合物內(nèi)殘存較多的利凡諾的水溶液。解離溫度要維持在40℃左右，是解離反應(yīng)的最適溫度。解離液的pH值在1.28~1.45之間，解離效果良好。絡(luò)合物中加入解離液并攪拌均勻后，將解離后混合溶液pH值控制在6.0左右較理想。以解離后解離混合溶液pH值決定加入解離液的體積。解離后解離混合液的pH值高于6.5時，表明加入的解離液少了，有部分絡(luò)合物未被解離開；低于5.85，表明加入的解離液多了，解離過度。這兩種情況下，解離效果均不佳。在沉淀中加約二分之一血漿體積的滅菌蒸餾水解離所得到的絡(luò)合物沉淀，將解離混合物溶液用0.5mol/LHCl調(diào)節(jié)pH至5.5-6.0，加NaCl至0.15%～0.2%，充分攪拌、方法：（1）加入活性炭法：在解離效果略差，即能夠較順利地離心，得到部分或全部稍混濁的濾液，但不能正常進行壓濾時，加入適當?shù)幕钚蕴坑跒V液中，攪攔均勻后，立即離心，由于活性炭吸附溶液中粘稠物質(zhì)，形成大顆粒，經(jīng)離心可以除去雜質(zhì)，起到澄清的作用。（2）加入利凡諾法：在解離時，在由加入的鹽酸或（和）鹽過多而造成解離物的濾液混濁的情況下，變性前后，向解離物中加入適量的利凡諾溶液均會起到澄清的作用，而回收率卻不會降低太多。變性前加利凡諾溶液比變性后加利凡諾溶液的效果顯著。由于前者在變性過程中反應(yīng)溫度升高了，反應(yīng)時間增加了。（3）多次絡(luò)合法：如果解離效果極差，用以上兩種方法處理都難以達到澄清的目的，那只有采取多次絡(luò)合法，即在盡量除去解離物中粘稠物質(zhì)后，將其pH值調(diào)至9.0~9.2，加入適量的5%利凡諾溶液，進行重絡(luò)合，繼爾重解離，一般都會得到很理想結(jié)果。如果仍然出現(xiàn)解離不良的現(xiàn)象，重復以上處理過程，直到得到滿意的結(jié)果。這種方法使產(chǎn)品純度高，外觀變黃（棕），同時也使成本提高，回收率降低。③去雜蛋白：白蛋白具有生物活性，凡是使蛋白質(zhì)變性的溫度都會使白蛋白變性。65℃④熱處理：在60±0.5℃⑤檢驗方法：凍干品白色疏松物體。白蛋白含量占95%以上，水分<1%，水溶后pH為6.6-7.2，硫酸銨殘量<0.01%，細菌學和熱原質(zhì)檢測合格。尿激酶工藝要點：①收尿：男性尿，8h內(nèi)處理。調(diào)尿液pH6.5以下。②硅藻土吸附：加入1%的硅藻土，5℃③洗脫：硅藻土吸附物用5℃④除熱原、色素：收集液用飽和NaH2PO4，調(diào)pH8.0，加NaCl調(diào)電導至22M/Ω，過DEAE-SephadexA50層析柱，收集流出活性部分。⑤CMC濃縮：流出液用1mol/LHAc調(diào)至pH4.2，用蒸餾水調(diào)電導至16-17M/Ω，通過CM-C層析柱。用10倍體積的pH4.2的HAC-NaAc緩沖液洗滌柱床。洗后用0.1%氨水0.1mol/LNaCl溶液洗脫尿激酶。收集活性組分，雜質(zhì)被吸附。⑥產(chǎn)品質(zhì)量：無色澄清液或白色凍干粉末。酶活力>15000IU/mg蛋白質(zhì)。絨膜促性激素（HCG）工藝要點：①吸附粗品：HCl調(diào)孕婦尿至pH4-5，加苯甲酸—乙醇飽和液（孕婦尿：苯甲酸乙醇飽和液：乙醇=1:0.075:5）攪拌1h靜置2-3h，過濾，棄濾液，得吸附物。在攪拌下加入95%乙醇，至苯甲酸全部溶解有絮狀沉淀產(chǎn)生，靜置過夜，離心，沉淀用95%乙醇和丙酮洗滌，干燥得粗制品。②提?。杭?0倍量的4℃③離子交換層析：CM-Sepharose柱用0.01mol/L的醋酸鹽緩沖液平衡后樣品上柱。依次用pH4.8、0.01mol/L的醋酸鹽緩沖液和pH5.9、0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液洗滌出兩個峰（雜質(zhì)）。再用pH8.5、0.2mol/L的醋酸鹽緩沖液洗脫，得到的第3峰即為HCG。④羥基磷灰石柱層析：柱用pH6.8、0.5mmol/L磷酸鹽緩沖液平衡。樣品用pH6.8、0.5mmol/L的磷酸鹽緩沖液進行層析上柱。洗脫先用pH6.8、0.5mmol/L再用pH6.81.0mmol/L的磷酸鹽緩沖液。得到I、II活性峰。然后冷凍干燥。HCG純品的比活性為10,000-12,000IU/mg蛋白質(zhì)。白細胞介素-2（IL-2）工藝要點：①誘生：刺激人外周血白細胞，37℃②病毒滅活和固液分離：HCl調(diào)節(jié)pH再用NaOH調(diào),除去變性雜蛋白。③分級沉淀：加飽和硫酸銨溶液至0.35飽和度，4℃④除鹽：除沉淀溶于pH6.5、10mmol/L的磷酸鈉緩沖液（PBS）中（內(nèi)含2%（g/100mL）正丁醇,0.15mol/LNaCl）。用pH6.5的10mmol/LPBS透析24h（更換5次透析外液）。⑤藍色瓊脂糖層析：透析內(nèi)液通過Sepharose4B層析柱，用200mL平衡柱緩沖液洗去不吸附蛋白，再用含0.4mol/LNaCl的PBS液洗滌親和柱，最后用含1.0mol/LNaCl的PBS液解吸IL-2活性組分。⑥凝膠層析：活性組分經(jīng)超濾濃縮，上UltrogelACA44層析柱，柱用含0.1%聚乙二醇MW6000的2%正丁醇和pH7.6的0.5mol/L甘氨酸的0.2mol/LTris-HCl洗脫，得IL-2。動物來源生物制品的制備胰島素的工藝要點①提?。航g碎胰臟，加2.3-2.6倍的86%-88%乙醇和5%的草酸，提取3h。②濃縮：30℃③除酸性蛋白：加入7倍量的蒸餾水溶解，再加3倍量冷丙酮，用氨水調(diào)pH至4.2-4.3，補加丙酮，離心去除酸性質(zhì)白沉淀。④鋅沉淀：用氨水調(diào)pH為6.2-6.4，加入3.6%醋酸鋅溶液（20%濃度），再用氨水調(diào)pH至6.0，4℃⑤除堿性蛋白、結(jié)晶：每克加冰冷的2%檸檬酸溶液50mL，6.5%醋酸鋅溶液2mL，丙酮16mL，用冰水稀釋至100mL，使充分溶解；冷至5℃以下，用氨水調(diào)至pH至8.0，過濾；濾液用10%檸檬酸溶液調(diào)pH6.0，補加丙酮，慢速攪拌3-5h使結(jié)晶析出；再轉(zhuǎn)入5超氧化物歧化酶（SOD）工藝要點：①收集：離心去黃色血漿，紅細胞用0.9%NaCI溶液離心浮洗3次。②溶血、去血紅蛋白：加去離子水，5℃③沉淀、熱處理：0℃下將上清液加入1.2-1.5倍體積的丙酮，產(chǎn)生絮狀沉淀；離心去上清液，得沉淀物；沉淀物加適量蒸餾水溶解，上清在55-65④沉淀、去不溶蛋白：澄清液在0℃⑤吸附、洗脫、超濾、凍干：透析液加到用磷酸緩沖液平衡好的DEAE-SephadexA50柱上吸附，用磷酸鉀緩沖液梯度洗脫，收集SOD活力洗脫液，超濾濃縮后，冷凍干燥得SOD成品。⑥電泳鑒定條件：0.5%瓊脂糖凝膠平板電泳法，用聚丙稀酰胺凝膠電泳方法鑒定更靈敏。用肝臟生產(chǎn)核糖核酸（RNA）工藝要點①勻漿：肝用生理鹽水洗凈，切成小塊，加入1-2倍量檸檬酸鈉、聚乙烯硫酸脂（PVS）TritonX100（pH7.0）溶液，用組織搗碎機搗成勻漿，離心。②提?。杭尤氲润w積三乙醇胺、十二烷基磺酸鈉（SDS）、乙二胺四乙酸二鈉（EDTA，pH9.0）溶液，攪拌均勻后，加等體積苯酚（含0.2%8-羥基喹啉）及等體積氯仿；室溫振蕩30min，離心20min。③除蛋白：離心清液中加入等量氯仿振蕩，反復2-3次，至中間界面無明顯蛋白層為止。④乙醇沉淀：清液中加入1/10體積KAC和兩倍體積－20℃乙醇；0⑤除糖原：將沉淀溶于含EDTA-0.01mol/LNaAc溶液中，加入等體積K2HPO4,攪拌下再加入等體積乙二醇甲醚，0℃⑥絡(luò)合：清液在0℃下攪拌加入等體積0.2mol/LNaAc溶液和1/4體積1%十六烷基三甲基溴化銨（CTAB）；0⑦洗滌：沉淀用NaAc，70%乙醇溶液反復洗滌5次，至無泡沫為止。分離純化技術(shù)和工藝的影響因素：①菌種類型及其代謝特性；②原材料和培養(yǎng)基的來源及其質(zhì)量；③生產(chǎn)工藝和條件；④初始物料的物理、化學和生物學特性。分離純化包括細胞破碎、固液分離、濃縮與初步純化、高度純化直至得到純品以及成品加工。離子交換色譜原理:通過帶電的溶質(zhì)分子與離子交換劑中可交換的離子進行交換，從而達到分離目的。離子交換劑是一類具有離子交換功能的高分子材料，功能基是由固定在骨架上的帶電基團與可進行交換的能移動的離子兩部分組成。二者所帶電荷相反，可進行交換的離子稱為反離子。反離子可與溶液中帶同種電荷的離子進行交換，這種交換反應(yīng)是可逆的，在一定條件下被交換的離子可能解吸，交換劑又恢復到原來的形式，離子交換劑通過交換和再生可以反復使用。純化生物可以采用兩種方式：一是將目的產(chǎn)物離子化，然后被交換到介質(zhì)上，雜質(zhì)不被吸附而從柱中流出，稱之為“正吸附”，其優(yōu)點是目的產(chǎn)物純度高，起到濃縮作用，適于產(chǎn)物濃度低、工作液量大的溶液；二是將雜質(zhì)離子化后交換，目的產(chǎn)物不被交換而直接流出，稱之為“負吸附”，適用于目的產(chǎn)物濃度高的工作液，只可除去50%～70%的雜質(zhì)，產(chǎn)物的純度不高。B、影響因素①蛋白質(zhì)的等電點和表面電荷的分布影響其離子交換的性能②交換基團和交換介質(zhì)的種類、吸附和洗脫的條件（pH、離子強度、反離子）等。③等電點處于極端位置（pI＜5或pI＞8）的基因工程產(chǎn)物應(yīng)首選離子交換色譜方法，往往一步即可除去幾乎全部的雜質(zhì)。反相色譜和疏水色譜原理:根據(jù)蛋白質(zhì)疏水性的差異來分離純化。反相色譜是利用溶質(zhì)分子中非極性基團與非極性固定相之間相互作用力的大小，以及溶質(zhì)分子中極性基團與流動相中極性分子之間在相反方向作用力的大小的差異進行分離。進行生物大分子反相色譜分離時，常用的固定相為硅膠烷基鍵合相；流動相多采用低離子強度的酸性水溶液，并加入一定比例的能與水互溶的乙腈、甲醇、異丙醇等有機溶劑。由于固定相骨架的疏水性強，吸附的蛋白質(zhì)需要用有機溶劑才能洗脫下來。疏水色譜的原理與反相色譜相似，主要是利用蛋白質(zhì)分子表面上的疏水區(qū)域（非極性氨基酸的側(cè)鏈）和介質(zhì)的疏水基團（苯基或辛基）之間的相互作用，無機鹽的存在能使相互作用力增強。所用介質(zhì)表面的疏水性比反相色譜所用介質(zhì)的弱，為有機聚合物鍵合相或大孔硅膠鍵合相，流動相一般為pH6～8的鹽水溶液。在高鹽濃度時，蛋白質(zhì)分子中疏水性部分與介質(zhì)的疏水基團產(chǎn)生疏水性作用而被吸附；鹽濃度降低時蛋白質(zhì)的疏水作用減弱，目的蛋白質(zhì)被逐步洗脫下來，蛋白質(zhì)的疏水性越強，洗脫時間越長。與反相色譜相比，疏水色譜回收率較高，蛋白質(zhì)變性的可能性小。二者比較：反相色譜和疏水色譜的差異在于前者在有機相中進行，蛋白質(zhì)經(jīng)過反相流動相與固定相作用有時會發(fā)生部分變性，而且后者通常在水溶液中進行，蛋白質(zhì)在分離過程中一般仍保持其天然構(gòu)象。親和色譜基本概念：親和層析是利用待分離物質(zhì)與其特異性配基之間特異性的親和力進行分離的一類特殊的層析技術(shù)。配基（ligand）：被固定在基質(zhì)上的分子稱為配基，配基和基質(zhì)是以共價鍵結(jié)合的?；|(zhì)（matrix）：亦稱為載體（vector），是構(gòu)成固定相的骨架。2）親和層析有如下特點：純化過程簡單、迅速；分離效率高；產(chǎn)物純度高；必須針對某一分離對象制備專一的配基及尋求穩(wěn)定的層析條件。3）親和層析的基本原理①親和的一對分子中的一方以共價鍵形式與不溶性載體相連作為固定相吸附劑。②當含有混合組份的樣品（流動相）通過此固定相時，只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì)，才能被固定相吸附結(jié)合，其它沒有親和力的無關(guān)組份就隨流動相流出。③然后改變流動相成份，將結(jié)合的親和物洗脫下來。4）配基的種類抗原與抗體、DNA與互補DNA或RNA（cDNA、mRNA)、酶與其底物、激素與其受體、維生素與結(jié)合蛋白、糖蛋白與植物凝集素。5）親和層析載體的性質(zhì)與選擇親和層析載體的選擇：多孔的立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，能使被親和吸附的大分子自由通過。顆粒均勻，具有良好的流速。具有惰性，盡量減少非專一性吸附。在溫和的條件下能與配基共價偶聯(lián)。6）常用的親和層析載體纖維素、葡聚糖凝膠、瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、多孔玻璃珠、其它新型載體7）親和層析配基的選擇（Selectionofligand）1.純化對象和配基之間必須有較強的親和力。2.但親和力太高也是有害的，因為在解離配基復合物時所需的條件就要強烈，這樣可能使生物分子變性。3.配基必須具有適當?shù)幕瘜W基團，可用于和載體相連，同時又不影響配基與生物分子之間的親和力。8）載體、配基、目的物的連接9）親和層析的基本操作方法：①平衡：用平衡Buffer沖洗柱體，至基線平穩(wěn).②樣品上柱和沖洗：樣品中的目的物與層析介質(zhì)選擇性的吸附，雜質(zhì)不被吸附。用上樣Buffer沖洗柱體，雜質(zhì)被沖洗下來。形成雜質(zhì)峰（見下圖）。③洗脫：選擇適當?shù)臈l件，將吸附在親和介質(zhì)上的目的物解吸下來（見下圖）。凝膠過濾色譜以具有空隙大小一定的多孔性凝膠作為分離介質(zhì)，小分子能進入孔內(nèi)，在柱中緩慢移動，而大分子不能進入孔內(nèi)，快速移動，利用這種移動差別可使大分子與小分子分開。根據(jù)蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量和蛋白質(zhì)分子的動力學體積的大小差異，可以利用凝膠過濾來分離純化目的蛋白。一是用于蛋白質(zhì)分離過程中的脫鹽和更換緩沖液；二是用于蛋白質(zhì)分子的分級分離，細胞因子的相對分子質(zhì)量在1.5×104，很容易分離純化；另一個應(yīng)用是用于去除產(chǎn)物的多聚體及降解產(chǎn)物。四、選擇分離純化方法的依據(jù)1、根據(jù)產(chǎn)物表達形式來選擇分泌型表達產(chǎn)物的發(fā)酵液的體積很大、但濃度較低，必須在純化前進行濃縮，可用沉淀和超濾的方法濃縮。產(chǎn)物在周質(zhì)表達是介于細胞內(nèi)可溶性表達和分泌表達之間的一種形式，它可以避開細胞內(nèi)可溶性蛋白和培養(yǎng)基中蛋白類雜質(zhì)，在一定程度上有利于分離純化。為了獲得周質(zhì)蛋白，E.coli經(jīng)低濃度溶菌酶處理后，可采用滲透壓休克的方法來獲得，能夠回收到高質(zhì)量的產(chǎn)物。E.coli細胞內(nèi)可溶性表達產(chǎn)物破菌后的細胞上清，首選親和分離方法。如果沒有可以利用的單克隆抗體或相對特異性的親和配基，一般先用離子交換色譜，處于極端等電點的蛋白質(zhì)用離子交換分離能去掉大部分的雜質(zhì)。2、根據(jù)分離單元之間的銜接選擇應(yīng)選擇不同機制的分離單元來組成一套分離純化工藝，盡早采用高效的分離手段，先將含量最多的雜質(zhì)分離去除，將費用最高、最費時的分離單元放在最后階段。即通常：①先選用非特異、低分辨的操作單元（如沉淀、超濾和吸附等），以盡快縮小樣品體積，提高產(chǎn)物濃度，去除最主要的雜質(zhì)（包括非蛋白類雜質(zhì)）；②采用高分辨率的操作單元（如具有高選擇性的離子交換色譜和親和色譜）；③凝膠排阻色譜這類分離規(guī)模小、分離速度慢的操作單元放在最后。色譜分離次序的選擇同樣重要色譜次序能夠提高分離效率，當幾種方法連用時，最好以不同的分離機制為基礎(chǔ)，經(jīng)前一種方法處理的樣品應(yīng)能適合于作為后一種方法的料液，不必經(jīng)過脫鹽、濃縮等處理。如經(jīng)鹽析后得到的樣品，不適宜于離子交換層析，但對疏水層析則可直接應(yīng)用。離子交換、疏水及親和色譜通?？善鸬降鞍踪|(zhì)濃縮的效應(yīng)凝膠過濾色譜常常使樣品稀釋在離子交換色譜之后進行疏水層析色譜就很合適，不必經(jīng)過緩沖液的更換親和層析選擇性最強，但不能放在第一步：一方面因為雜質(zhì)多，易受污染，另一方面，體積較大，需用大量的介質(zhì)，因此親和層析多放在第二步以后。3、根據(jù)分離純化工藝的要求來選擇分離純化工藝應(yīng)遵循以下原則：（1）工藝條件應(yīng)溫和，具有良好的穩(wěn)定性和重復性：不受或少受發(fā)酵工藝、條件及原材料來源的影響，在任何環(huán)境下使用都應(yīng)具有重復性，明確需嚴格控制的步驟和技術(shù)。（2）盡可能減少組成工藝的步驟：步驟越多，產(chǎn)品的后處理收率越低，但必須保證產(chǎn)品的質(zhì)量（3）組成工藝的各技術(shù)或步驟之間要相互適應(yīng)和協(xié)調(diào)（4）在工藝過程中要盡可能少用試劑，以免增加步驟，或干擾產(chǎn)品質(zhì)量（5）時間要盡可能短，因穩(wěn)定性差的產(chǎn)物隨工藝時間增加，生物活性收率會降低，產(chǎn)品質(zhì)量會下降（6）必須高效、收率高、易操作，對設(shè)備條件要求低，能耗低（7）具有較高的安全性：藥品必須保證安全、無菌、無熱原、無污染原材料的質(zhì)量控制：原材料的質(zhì)量控制是要確保編碼生物制品的DNA序列的正確性，重組微生物來自單一克隆，所用質(zhì)粒純而穩(wěn)定，以保證產(chǎn)品質(zhì)量的安全性和一致性。二、培養(yǎng)過程的質(zhì)量控制（qualitycontrollingofcultureprocess）在工程菌菌種貯存中，要求種子克隆純而穩(wěn)定；在培養(yǎng)過程中，要求工程菌所含的重組質(zhì)粒穩(wěn)定，始終無突變；在重復生產(chǎn)發(fā)酵中，工程菌表達穩(wěn)定；始終能排除外源微生物污染。產(chǎn)品應(yīng)有種子批系統(tǒng)，并證明種子批不含致癌因子，無細菌、病毒、真菌和支原體等污染，并由原始種子批建立生產(chǎn)用工作細胞庫。原始種子批須確證克隆基因DNA序列，詳細敘述種子批來源、方式、保存及預計使用期，保存與復蘇時宿主載體表達系統(tǒng)的穩(wěn)定性。三、純化工藝過程的質(zhì)量控制（qualitycontrollingofdepurationprocess）產(chǎn)品要有足夠的生理和生物學試驗數(shù)據(jù)，確證提純物分子批間保持一致性；外源蛋白質(zhì)、D