豬輪狀病毒臨床診斷案例?輪狀病毒(RV)，毒如其名，是哺乳動物幼獸腸道的一大宿敵。車輪狀的輪狀病毒粒子人類醫(yī)學界至今流傳著關于它的傳說：“幾乎世界上每個大于五歲的小孩都曾感染過輪狀病毒至少一次”。當輪狀病毒感染一個年出欄15萬頭仔豬的母豬場會發(fā)生什么呢？本案例將展示輪狀病毒是如何摧殘仔豬的腸絨毛，并最終長期影響母豬場的生產效益的。病史調查這是南方的一個萬頭母豬場，地處平原，四條生產線田字型排布，高度集中；豬場連續(xù)生產，欄舍周轉緊張。在很長一段時間內，產房哺乳仔豬死亡數占出生活仔數的比例偏高。該場產房哺乳仔豬某一周的死亡率為11.5%（黑色箭頭）豬場實驗室的日常腹瀉監(jiān)測結果顯示輪狀病毒長期存在（1年以上，并且期間還發(fā)生過一起持續(xù)6個月的PEDV疫情）。雖然堅持產房的嚴格洗消和全進全出，并跟胎免疫輪狀病毒的組織滅活疫苗，但輪狀病毒仍在四條生產線此起彼伏。仔豬腹瀉糞便RV檢測陽性（每條線10個產房）母豬場環(huán)境監(jiān)測RV陽性各線產房仔豬死亡原因統(tǒng)計顯示，死亡主要為處死、壓死和弱死仔豬，和腹瀉直接相關的死亡并不多。對各線死亡仔豬的日齡進行統(tǒng)計，發(fā)現10日齡之后的死亡，甚至斷奶前后的死亡異常高。這與駐場獸醫(yī)和豬場管理者反饋的弱仔、次品苗增多相一致。具體統(tǒng)計各線腹瀉仔豬的發(fā)病日齡，發(fā)現腹瀉發(fā)生的嚴重程度3線（581窩）＞4線（281窩）＞2線（139窩）＞1線（136窩），與各線仔豬死亡總數排名一致；大致有兩個發(fā)病高峰，7日齡左右和/或12日齡左右，可能與產房工作流程有關，尤其需要上產床的操作，例如補鐵剪尾去勢。臨床癥狀與尸檢大體病變由駐場獸醫(yī)挑取6頭未使用抗生素治療的活體急性腹瀉仔豬和2頭活體正常仔豬傳遞至豬場外圍的無害化處理區(qū)進行病理剖檢。外觀檢查發(fā)現，腹瀉仔豬呈糊狀或乳糜狀腹瀉，脫水癥狀較輕。糊狀或乳糜狀腹瀉，脫水癥狀較輕剖檢大體觀察發(fā)現，胃擴張，內有大量凝乳；小腸輕度到重度擴張，內容物稀薄，漿膜顏色充血潮紅或失去血色和緊張性，或無明顯改變；結腸外觀顏色異常，呈白色或黃色（正常呈灰色）。腹瀉豬腸系膜淋巴結腫大。腹瀉豬腸系膜淋巴結腫大腸黏膜無變色、灶狀壞死等炎癥性病變；腹瀉仔豬黏膜絨毛較不腹瀉豬變短、變稀疏。感謝臺灣大學劉振軒老師（美國獸醫(yī)病理學家，ACVP）傳授的現場肉眼觀察腸絨毛的方法，只需準備一根直底的玻璃試管便可以評估腸絨毛的發(fā)育情況和黏膜的損傷情況。腹瀉豬黏膜絨毛較不腹瀉豬變短、變稀疏實驗室診斷——糞便蟲卵檢查收集腹瀉仔豬直腸末端糞便，使用飽和葡萄糖NaCl漂浮液進行蟲卵檢查，結果多見大量未消化脂滴，只在一頭仔豬的糞便中發(fā)現一枚正在孵出的線蟲蟲卵。多見未消化的脂滴，只發(fā)現一枚正在孵出的線蟲蟲卵實驗室診斷——細菌分離（失敗經驗）剖檢現場接種環(huán)采集腹瀉仔豬（編號1-3號）和正常豬（編號4號）的空腸內容物和腸系膜淋巴結切面體液接種血瓊脂平板，分別進行有氧和厭氧培養(yǎng)（三菱厭氧產氣袋和密封袋），有氧生長菌落直接使用TSB培養(yǎng)基搖菌，然后菌液送檢測序公司做16S菌種鑒定，結果測序序列存在套峰，勉強能用的序列比對出一個令人疑惑的結果：雖然送檢菌液的革蘭氏染色與不動桿菌的形態(tài)描述吻合（存在短桿狀和球狀兩種形態(tài)），但筆者至今未能對該細菌在本案例的出現及其影響作出合理解釋（屬于污染還是潛在致??？）。以上臨床細菌分離鑒定操作至少有４點值得改進的地方：①不要使用腸內物作為細菌分離的樣品；②細菌分離后要對優(yōu)勢菌進行純化；③細菌16S鑒定不要直接送檢菌液，容易出現套峰，應自己提取菌液核酸并進行16srDNA擴增，最后送檢未純化的PCR樣品；④細菌分離最好在實驗室超凈工作臺中操作。實驗室診斷——組織病理選取正常豬和腹瀉豬大體觀察病變典型、嚴重的十二指腸、空腸、回腸（腸壁菲薄、絨毛變短）進行組織固定（注意取材過程中動作要輕柔，固定部分黏膜不可用解剖器械刮蹭、拉扯），委外制片染色，結果如下：輪狀病毒感染十二指腸組織病理觀察我們再來回顧一下正常十二指腸絨毛形態(tài)：正常十二指腸組織形態(tài)輪狀病毒感染空腸、回腸組織病理觀察細菌啃食上皮細胞-空腸輪狀病毒感染腸系膜淋巴結組織病理觀察診斷結果腹瀉仔豬小腸黏膜損傷嚴重，黏膜上皮細胞腫脹脫落，腸絨毛斷裂、萎縮、消失，耐過仔豬腸粘膜開始修復?？偨Y以上病史信息和實驗室檢測結果，該產房仔豬腹瀉病例診斷為輪狀病毒腹瀉，繼發(fā)、偶發(fā)條件致病菌的感染。造成的損失主要表現為腸粘膜損傷，造成吸收不良，營養(yǎng)缺乏，生長阻滯，最終導致斷奶前處死、弱死仔豬增多，死淘率增高，斷奶仔豬成本升高。７.RV防控建議①做好產房保溫，尤其對于無大功率加熱設備的母豬場產房；②有效的免疫：做好后備母豬馴化，弱毒活苗效果＞基因匹配滅活苗效果＞基因不匹配滅活苗效