關(guān)于植物脫毒快繁技術(shù)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第一頁(yè)，共59頁(yè)一、病毒危害

多數(shù)栽培植物，尤其無(wú)性繁殖植物，都易受到一種或幾種，甚至幾十種病毒的侵染。例如，草莓染60多種病毒。并且隨著培養(yǎng)時(shí)間的推移，侵染病毒的種類(lèi)越來(lái)越多。植物病毒病原體可通過(guò)維管束傳導(dǎo)。因此，對(duì)無(wú)性繁殖的植物來(lái)說(shuō)，一旦感染上病毒之后，就會(huì)代代相傳越趨嚴(yán)重。受病毒侵染的植物生長(zhǎng)緩慢、畸形、產(chǎn)量大幅度下降，品質(zhì)變劣，甚至完全喪失商品價(jià)值?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二頁(yè)，共59頁(yè)

目前，對(duì)細(xì)菌和真菌侵染的病害，可通過(guò)藥物處理達(dá)到治愈的目的。但還沒(méi)有治病毒的特效藥。種子一般不帶病毒(豆類(lèi)植物除外)，種子繁殖可得無(wú)毒植株。但對(duì)于無(wú)性繁殖植物，必須采取一些特殊方法脫除病毒?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三頁(yè)，共59頁(yè)脫毒快繁的一般過(guò)程

1、診斷：首先了解供試材料感染病毒的種類(lèi)2、莖尖培養(yǎng)脫毒或結(jié)合熱處理3、鑒定4、繁殖5、馴化移植現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四頁(yè)，共59頁(yè)

1、熱處理脫毒原理：

①病毒進(jìn)入植物細(xì)胞后，隨植物細(xì)胞DNA一起復(fù)制。熱處理并不能殺死細(xì)胞，只是鈍化病毒的活性，使病毒在植物體內(nèi)增殖減緩或增殖停止，而失去病毒的侵染能力。②熱處理是一種物理效應(yīng)，可加速植物細(xì)胞分裂，在激烈分裂的細(xì)胞中正常核蛋白合成占優(yōu)勢(shì)，使植物細(xì)胞在與病毒繁殖的競(jìng)爭(zhēng)中取勝。因此加速分生組織細(xì)胞的分裂，能夠獲得無(wú)病毒植株。

二、脫毒方法

(一)

熱處理脫毒現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五頁(yè)，共59頁(yè)

依據(jù)病毒對(duì)高溫的敏感，寄主耐高溫。利用這一差異，選擇適當(dāng)?shù)臏囟群吞幚頃r(shí)間，進(jìn)行高溫處理，就能使寄主體內(nèi)病毒濃度降低，傳遞速度減慢或失去活性，而寄主細(xì)胞仍然存活，并加快分裂和生長(zhǎng)。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第六頁(yè)，共59頁(yè)(1)溫湯浸漬處理(2)熱空氣處理2、熱處理脫毒方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第七頁(yè)，共59頁(yè)（1）溫水浸漬處理

適用于休眠器官，在50℃左右的溫水中浸漬10min至數(shù)小時(shí)，方法簡(jiǎn)便易行，但易使材料受傷。

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第八頁(yè)，共59頁(yè)（2）熱空氣處理

熱空氣處理對(duì)活躍生長(zhǎng)的莖尖效果較好。將生長(zhǎng)的盆栽植株移入溫?zé)嶂委熛鋬?nèi)，一般35-40℃。處理時(shí)間因植物而異，短則幾十分鐘，長(zhǎng)可達(dá)數(shù)月。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第九頁(yè)，共59頁(yè)熱處理廣泛應(yīng)用于葡萄、草莓、馬鈴薯和菊花等植物。如：葡萄置于38℃可去除扇葉病毒。熱處理對(duì)葡萄扇葉病毒、草莓斑駁病毒、蘋(píng)果花葉病毒等球形病毒有作用，而對(duì)另一些病毒不起作用，因此，必須與莖尖培養(yǎng)相結(jié)合脫毒效果更好。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十頁(yè)，共59頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十一頁(yè)，共59頁(yè)

植物的去病毒技術(shù)，實(shí)質(zhì)上就是采取不含病毒顆?；虿《绢w粒含量甚少的0.1～0.5mm帶1～2個(gè)葉原基的莖尖作為外植體，進(jìn)行微繁殖，使其培養(yǎng)成完整的無(wú)病毒小植株的技術(shù)。（二）莖尖培養(yǎng)脫毒現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十二頁(yè)，共59頁(yè)

1、莖尖培養(yǎng)脫毒原理

病毒在植物體內(nèi)分布不均勻，其數(shù)量隨植株部位及年齡而異，越靠近莖頂端區(qū)域，病毒感染的程度越低，生長(zhǎng)點(diǎn)即分生組織（約0.1-1mm）幾乎不含或含病毒很少。

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十三頁(yè)，共59頁(yè)

1、傳導(dǎo)抑制。植物體病毒的移動(dòng)主要靠2條途徑：一是通過(guò)維管系統(tǒng)，而分生組織中尚未形成維管系統(tǒng)；二是通過(guò)胞間連絲，但這條途徑病毒移動(dòng)速度非常慢，趕不上莖尖和根尖細(xì)胞不斷分裂和活躍的生長(zhǎng)速度。

2、酶缺乏。莖尖中缺乏病毒合成所需的酶系，存在高水平內(nèi)源激素，可抑制病毒的增殖。

莖尖分生組織不帶病毒，可能有4方面的原因：現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十四頁(yè)，共59頁(yè)3、能量競(jìng)爭(zhēng)。當(dāng)植物細(xì)胞分裂DNA復(fù)制時(shí)，病毒DNA隨著復(fù)制。因此，植物細(xì)胞分裂和病毒繁殖之間存在相互競(jìng)爭(zhēng)。在旺盛分裂的分生組織中，代謝活動(dòng)很高，正常核蛋白合成占優(yōu)勢(shì)，使病毒無(wú)法進(jìn)行復(fù)制。4、抑制因子存在。在植物體內(nèi)存在有一種“病毒鈍化系統(tǒng)”（抑制因子假說(shuō)），在分生組織中的活性最高，因而使分生組織不受侵染?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十五頁(yè)，共59頁(yè)2、培養(yǎng)基

一般以White、MS為基本培養(yǎng)基，提高鉀鹽和銨鹽含量有利于莖尖生長(zhǎng)。MS培養(yǎng)某些植物莖尖時(shí)，有些離子濃度過(guò)高應(yīng)稀釋。在雙子葉植物中，激素可能在第2對(duì)葉原基中合成，所以莖尖的圓錐組織生長(zhǎng)激素不能自給，必須加入生長(zhǎng)素與細(xì)胞分裂素，濃度要合適。在生長(zhǎng)素中應(yīng)避免用易促進(jìn)愈傷組織化的2，4-D，宜用NAA或IBA；細(xì)胞分裂素用KT或BA；GA3對(duì)某些植物莖尖培養(yǎng)有用?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十六頁(yè)，共59頁(yè)材料選擇、消毒微莖尖的剝?nèi)〗臃N3、莖尖的培養(yǎng)方法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十七頁(yè)，共59頁(yè)3、莖尖的培養(yǎng)方法

需要一臺(tái)解剖鏡（8-40倍）。剝離莖尖要迅速并盡快接種，或在一個(gè)襯有無(wú)菌濕濾紙的培養(yǎng)皿內(nèi)進(jìn)行操作，以防莖尖變干。莖尖分生組織由于有彼此重疊的葉原基的嚴(yán)密保護(hù)，只要仔細(xì)解剖，(無(wú)須表面消毒)就可得到無(wú)菌的外植體。有時(shí)消毒處理會(huì)增加培養(yǎng)物的污染率。即：葉片包被嚴(yán)緊的芽，如菊花、蘭花，只須75%酒精中浸蘸一下，而葉片包被松散的芽，如香石竹、馬鈴薯等，則要用0.1%次氯酸鈉表面消毒10min。現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十八頁(yè)，共59頁(yè)莖尖長(zhǎng)（ｍｍ）葉原基數(shù)小植株數(shù)脫毒植株數(shù)脫毒率（％）0.1215024480.272421842.90.646400離體莖尖大小對(duì)馬鈴薯脫毒效果的影響切取莖尖越小脫毒效果越好，但太小不易成活，過(guò)大又不能保證完全除去病毒，所以莖尖大小要合適?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第十九頁(yè)，共59頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十頁(yè)，共59頁(yè)

剝?nèi)∏o尖過(guò)程:

解剖鏡下用解剖針將葉片剝掉，解剖針要常消毒。當(dāng)一個(gè)半圓球的頂端分生組織充分暴露出來(lái)之后，用解剖刀片將帶1-2個(gè)葉原基的分生組織切下，接到培養(yǎng)基上。

將接種的莖尖置于22℃左右溫度下。2000-3000lx16h/d光照下培養(yǎng)。由于在低溫和短日照下，莖尖有可能進(jìn)入休眠；所以較高的溫度和充足的日照時(shí)間必須保證。微莖尖需數(shù)月才能成功?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十一頁(yè)，共59頁(yè)

莖尖培養(yǎng)的繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)和一般器官的培養(yǎng)相同。

莖尖培養(yǎng)脫毒，由于其脫毒效果好，后代穩(wěn)定，所以是目前培育無(wú)病毒苗最廣泛和最重要的一個(gè)途徑。

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十二頁(yè)，共59頁(yè)4、影響微莖尖成活及脫毒的因素

（1）母體材料病毒侵染程度被單一病毒感染的植株脫毒較容易，復(fù)合感染的較難。（2）外植體大小

在最適培養(yǎng)條件下，外植體的大小決定莖尖的存活率，外植體越大，產(chǎn)生再生植株的機(jī)會(huì)也就越多。除了外植體的大小之外，葉原基的存在與否也影響分生組織形成植株的能力，一般認(rèn)為，葉原基能向分生組織提供生長(zhǎng)和分化所必需的生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十三頁(yè)，共59頁(yè)（2）培養(yǎng)條件

在莖尖培養(yǎng)中，光下培養(yǎng)的效果通常比暗培養(yǎng)效果好，如馬鈴薯莖尖培養(yǎng)時(shí)，當(dāng)莖已長(zhǎng)到1cm高時(shí)，光照強(qiáng)度便增加到4000lx。

（3）外植體的生理狀態(tài)

莖尖最好要由活躍生長(zhǎng)的芽上切取。

取芽的時(shí)間也很重要，一般選萌動(dòng)期較好。否則采用適當(dāng)?shù)奶幚?，打破休眠才能進(jìn)行。

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十四頁(yè)，共59頁(yè)（三）莖尖與熱處理相結(jié)合方法

能克服單獨(dú)莖尖培養(yǎng)時(shí)，莖尖過(guò)小成活率太低，莖尖太大又脫除不掉病毒的缺點(diǎn)。1、熱處理后取較大莖尖培養(yǎng)獲得脫毒苗。2、取莖尖（或莖段）培養(yǎng)獲得無(wú)菌苗。然后將試管苗熱處理，再取莖尖培養(yǎng)獲得脫毒苗?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十五頁(yè)，共59頁(yè)（四）其它途徑脫毒

1、愈傷組織培養(yǎng)脫毒2、莖尖微體嫁接3、化學(xué)療法脫毒

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十六頁(yè)，共59頁(yè)1、愈傷組織培養(yǎng)脫毒

愈傷組織細(xì)胞帶病原菌不均一，部分細(xì)胞不帶病毒，由這些細(xì)胞再生的植株是無(wú)病毒的。多次繼代的愈傷組織中病毒含量下降，甚至檢測(cè)不出病毒?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十七頁(yè)，共59頁(yè)

愈傷組織的某些細(xì)胞不帶病毒原因：1、病毒的復(fù)制速度趕不上細(xì)胞的增殖速度；2、有些細(xì)胞通過(guò)突變獲得了抗病毒的抗性。愈傷組織脫毒的缺陷是植株遺傳性不穩(wěn)定，可能會(huì)產(chǎn)生變異植株?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十八頁(yè)，共59頁(yè)2、莖尖微體嫁接

木本植物莖尖培養(yǎng)難以生根成植株，將實(shí)生苗砧木在人工培養(yǎng)基上種植培育，再?gòu)某赡隉o(wú)病樹(shù)枝上切取0.4-1mm莖尖，在砧木上進(jìn)行試管微體嫁接，以獲得無(wú)病毒幼苗?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第二十九頁(yè)，共59頁(yè)3、化學(xué)療法脫毒

病毒抑制劑現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十頁(yè)，共59頁(yè)三、脫毒快繁材料的選擇

應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：1）品種要可靠2）要選擇經(jīng)當(dāng)?shù)卦耘啻_認(rèn)的高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的品種來(lái)作為脫毒材料3）名貴的植物良種4）植物生長(zhǎng)旺盛期，再生率高，脫毒效果好

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十一頁(yè)，共59頁(yè)四、植物病毒的鑒定

1、外觀判斷法2、指示植物法3、抗血清鑒定法4、電子顯微鏡檢查法5、酶聯(lián)免疫鑒定法(ELISA)

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十二頁(yè)，共59頁(yè)1、外觀判斷法：

帶病毒株往往葉片發(fā)黃，凹凸不平，畸形，可根據(jù)這些表現(xiàn)來(lái)判斷。但有些病毒表現(xiàn)不明顯，僅靠這一方法還不夠?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十三頁(yè)，共59頁(yè)2、指示植物檢測(cè)法：

指示植物又稱(chēng)鑒別寄主，指的是對(duì)某種或某些特定病毒非常敏感，而且癥狀表現(xiàn)十分明顯的植物。通常不同病毒應(yīng)選用不同的植物。馬鈴薯病毒常用指示植物有千日紅、曼陀羅、豇豆、辣椒等。

分為2種①汁液感染法（摩擦接種法）②嫁接檢測(cè)法現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十四頁(yè)，共59頁(yè)3、抗血清鑒定法（抗原－抗體反應(yīng)）

原理：由于病毒是由蛋白質(zhì)和核酸組成的，是一種較好的抗原。將病毒給動(dòng)物注射后產(chǎn)生抗體。抗原和抗體結(jié)合產(chǎn)生血清反應(yīng)。抗原：病毒?？贵w：是指生物體在外來(lái)抗原的刺激下產(chǎn)生的一種免疫球蛋白，主要存在于血清中，含抗體的血清稱(chēng)為抗血清。4、電子顯微鏡檢查法

直接觀察有無(wú)病毒存在，并根據(jù)病毒的大小、形狀和結(jié)構(gòu)等來(lái)判斷病毒種類(lèi)?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十五頁(yè)，共59頁(yè)

5、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法(ELISA)

enzymelinkedimmunosorbentassay

把抗原-抗體的免疫反應(yīng)于酶的催化反應(yīng)相結(jié)合而發(fā)展起來(lái)的一種綜合性技術(shù)，靈敏度高，特異性強(qiáng)，發(fā)展最快應(yīng)用最廣的方法。原理：采用酶標(biāo)記的特異抗體指示抗原-抗體的結(jié)合，從而檢測(cè)樣品中的抗原定量測(cè)定法?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十六頁(yè)，共59頁(yè)雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原最常用的方法，操作步驟如下：(1)將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體：洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。(2)加受檢標(biāo)本：使之與固相抗體接觸反應(yīng)一段時(shí)間，讓標(biāo)本中的抗原與固相載體上的抗體結(jié)合，形成固相抗原復(fù)合物。洗滌除去其他未結(jié)合的物質(zhì)。(3)加酶標(biāo)抗體：使固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。徹底洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此時(shí)固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量正相關(guān)。(4)加底物：夾心式復(fù)合物中的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。根據(jù)顏色反應(yīng)的程度進(jìn)行該抗原的定性或定量?，F(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十七頁(yè)，共59頁(yè)現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十八頁(yè)，共59頁(yè)五、快速繁殖

莖尖培養(yǎng)得到的脫毒苗不多，用于生產(chǎn)需擴(kuò)大繁殖。

擴(kuò)繁方法：1）組培快繁2）無(wú)毒苗栽到土壤中進(jìn)行擴(kuò)繁。如甘薯、草莓等利用蔓，馬鈴薯、姜、蒜等利用地下部分繁殖。為了預(yù)防病毒再感染，擴(kuò)繁應(yīng)在培育溫室或防蟲(chóng)罩內(nèi)，因?yàn)槔ハx(chóng)傳播病毒。3）兩種方法相結(jié)合，試管內(nèi)擴(kuò)繁，移栽后再擴(kuò)繁。

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第三十九頁(yè)，共59頁(yè)注意：1、培養(yǎng)變異的產(chǎn)生，應(yīng)及時(shí)去除2、脫毒苗并非永遠(yuǎn)是無(wú)毒苗，由于昆蟲(chóng)等的傳播，不免會(huì)再感染病毒，所以要經(jīng)常脫毒，一般脫毒苗用1－3代。脫毒試管苗為原原種－－繁殖一代為原種－－原1代－－原2代現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十頁(yè)，共59頁(yè)楓樹(shù)快繁圖示現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十一頁(yè)，共59頁(yè)楓樹(shù)快繁圖示現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十二頁(yè)，共59頁(yè)月季快繁圖示現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十三頁(yè)，共59頁(yè)月季快繁圖示現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十四頁(yè)，共59頁(yè)月季快繁圖示現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十五頁(yè)，共59頁(yè)月季快繁圖示現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十六頁(yè)，共59頁(yè)腋芽在生根培養(yǎng)基中生長(zhǎng)兩周，即可有小的幼根生成，三周后，幼根可長(zhǎng)至2cm長(zhǎng)。將上述月季苗經(jīng)過(guò)煉苗后，從培養(yǎng)基中取出，小心地洗去根上的培養(yǎng)基，然后將其接種在培養(yǎng)介質(zhì)中(營(yíng)養(yǎng)土:蛭石:珍珠巖=3:1:1)，再將培養(yǎng)介質(zhì)澆透水，用保鮮膜封上，以防止水分的散失，然后將其放在弱光、濕度大的培養(yǎng)室中培養(yǎng)，待長(zhǎng)出新根后，可移入田間土壤中。具體過(guò)程如下圖：月季快繁圖示現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十七頁(yè)，共59頁(yè)植物快繁的一般程序1.無(wú)菌母體植株的制備：（取材、植物激素、防止褐化和有害物積累）2.不定芽增殖：（增殖的途徑：誘導(dǎo)形成大量胚狀體；誘導(dǎo)形成大量不定芽；促進(jìn)腋芽的快速形成；愈傷組織增殖）3.完整植株的形成：4.再生植株的馴化：5.再生植株的鑒定：（植物形態(tài)學(xué)鑒定；細(xì)胞學(xué)鑒定）現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十八頁(yè)，共59頁(yè)（一）離體繁殖的一般技術(shù)1.外植體的選擇(1)根據(jù)培養(yǎng)目的選擇(2)考慮種質(zhì)、取材大小、時(shí)期和材料的生理狀態(tài)，具有代表性現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第四十九頁(yè)，共59頁(yè)2．培養(yǎng)物的增殖植物的種類(lèi)和自然生長(zhǎng)習(xí)性不同，其增殖方式及所采取的相應(yīng)技術(shù)措施也不一樣。一般來(lái)講，培養(yǎng)物的增殖有以下4種方式

現(xiàn)在學(xué)習(xí)的是第五十頁(yè)，共59頁(yè)①芽增殖特點(diǎn)主要表現(xiàn)在培養(yǎng)方法簡(jiǎn)單，能高度保持遺傳穩(wěn)定性，能長(zhǎng)期繼代