藥典中常見定量分析方法概述第四章藥物的定量分析藥物定量分析藥物的定量分析是指準確測定藥品有效成分或指標性成分的含量，它是評價藥品質(zhì)量、判斷藥物優(yōu)劣的重要手段。化學分析法儀器分析法重量分析法滴定分析法電化學分析法色譜法分光光度法√√√滴定：將標準溶液逐滴加入被分析溶液中，用顏色變化、沉淀或電導率變化等來確定反應(yīng)的終點。（更多的時候是用顏色來確定反應(yīng)終點。）所用試劑及儀器：滴定管、三角瓶、移液管、鐵架臺、指示劑第一節(jié)滴定分析法滴定管的分類：酸式滴定管（活塞）堿式滴定管（膠皮管）終點的判斷：用顏色判斷的終點和按化學反應(yīng)式計算的終點有什么不同？NaOH+HCl——H2O+NaCl計算判斷終點——化學計量點：按化學反應(yīng)關(guān)系求得的理論值（等當點）。顏色判斷終點——滴定終點：滴定時，指示劑改變顏色的那一點。

在實驗中，我們只能得到存在誤差的滴定終點，而不能得到確切的化學計量點。

一、基本原理滴定分析法是將一種已知準確濃度的溶液（滴定液）滴加到化學反應(yīng)按計量關(guān)系完全作用為止，然后根據(jù)所用滴定液的濃度和體積計算出待測物質(zhì)含量的一種分析方法，又稱“容量分析法”。二、特點儀器設(shè)備簡單、易于控制、成本低、速度較快準確度和精密度都較高尤其適用原料藥的含量測定，原料藥純度達到98.5%以上時首選滴定分析法。三、滴定分析法類型根據(jù)標準溶液和被測物質(zhì)發(fā)生的反應(yīng)類型和介質(zhì)的不同，可將滴定分析法分為：酸堿滴定法(直接滴定法和間接滴定法)非水溶液滴定法氧化還原滴定法（高錳酸鉀法、重鉻酸鉀法、碘量法、鈰量法、亞硝酸鈉法等）1.酸堿滴定法酸：在水溶液里能產(chǎn)生H的物質(zhì)，HCl、HAc。pH＜7堿：在水溶液里能產(chǎn)生OH的物質(zhì)，NaOH、KOH。pH＞7利用酸和堿在水溶液中的中和反應(yīng)進行滴定的分析方法。直接滴定法：C·Ka≥10-8的酸性藥物都可用堿滴定液直接滴定；凡C·Kb≥10-8

的堿性藥物都可用酸滴定液直接滴定。剩余滴定法：用于難溶于水或有其他原因不宜采用直接滴定法的藥物。2.非水溶液滴定法在非水溶劑（有機溶劑與不含水的無機溶劑）中進行的滴定的滴定分析方法。非水堿量法某些藥物由于在水溶液中顯示的堿性較弱，不能進行酸堿滴定。而在非水介質(zhì)中，就能顯示較強的堿性，可以順利地進行。非水堿量法是用高氯酸來滴定堿性藥物，主要用來測定含氮有機堿及其氫鹵酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽或有機酸鹽，以及有機酸堿金屬鹽類藥物的含量。多半在冰醋酸或醋酸中進行滴定，滴定劑多為高氯酸的冰醋酸溶液。一般應(yīng)用電位法指示終點。3.氧化還原滴定法

氧化還原滴定法是以氧化還原反應(yīng)為基礎(chǔ)的一類滴定方法。碘量法以碘作為氧化劑，或以碘化物（如碘化鉀）作為還原劑進行滴定的方法。根據(jù)滴定方式可分為直接碘量法和間接碘量法。間接碘量法又分為置換碘量法和剩余碘量法兩種。置換碘量法：測定氧化性物質(zhì)，用硫代硫酸鈉作滴定液亞硝酸鈉滴定法用亞硝酸鈉滴定液在鹽酸溶液中與芳香第一胺的化合物發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽以測定藥物含量的方法。重氮化反應(yīng):Ar-NH2+NaNO2+2HCl→Ar-N2+C1-+NaCl+2H2O含芳伯胺基或潛在芳伯胺基的藥物，都可選用亞硝酸鈉滴定法主要的滴定條件：加入過量鹽酸可以加快反應(yīng)的速度，防止偶氮氨基化合物的形成，但酸度也不宜過高，否則會影響反應(yīng)速度。反應(yīng)溫度：溫度太高，亞硝酸揮發(fā)和分解；溫度過低，反應(yīng)的速度太慢。滴定方式：滴定管尖端插入液面下2/3處滴定可避免亞硝酸的逸失。近終點時，待測藥物濃度極稀，使滴定反應(yīng)速度變慢，故應(yīng)緩緩滴定。溴化鉀的作用：加快重氮化反應(yīng)。光譜范圍：第二節(jié)紫外-可見分光光度法價電子的躍遷：光是具有能量的，價電子吸收能量由低能量的基態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楦吣芰康募ぐl(fā)態(tài)。吸收激發(fā)態(tài)基態(tài)發(fā)光

一、基本原理定量分析的依據(jù)：朗伯-比爾定律單色光輻射穿過被測物質(zhì)溶液時，在一定濃度范圍內(nèi)被該物質(zhì)吸收的量A與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度成正比。A=EcLE為吸收系數(shù)，常用的表示方法為E1%

，其物理意義為當溶液為1%（1g/100ml），液層厚度L為1cm時的吸光度。E是個常數(shù)，當L固定不變時，A與c成正比。1cm光源：氘燈（紫外光）、鎢燈（可見光）單色器：分離出測定波長的光。吸收池：玻璃（只能用于可見光區(qū)），石英（可用于紫外區(qū)，也可用于可見區(qū)）檢測器：光電池、光電管或光電倍增管光源單色吸收檢測顯示二、儀器的校正和檢定波長——定期校正、測定前校正吸光度的準確性——用重鉻酸鉀的硫酸溶液來檢定，不同波長下，吸收系數(shù)符合要求雜散光——

一定濃度的碘化鈉和亞硝酸鈉溶液，在雜散光影響比較顯著的波長處測定透光率三、對溶劑的要求能充分溶解樣品與樣品無相互作用揮發(fā)性小使用范圍不能小于截止使用波長在測定波長下吸光度符合要求空白試驗?zāi)康模嚎鄢郎y定的影響因素。如：容器、溶液中的其他雜質(zhì)、光的散射。方法：用參比溶液調(diào)吸光度為0，再測定樣品吸光度。參比溶液：不含要測定樣品的溶液。測定波長的檢查吸光度的測定一般在最大吸收波長（λmax）處，以提高測定靈敏度，減小測定誤差供試品溶液的濃度吸光度讀數(shù)在0.3～0.7之間為宜儀器狹縫寬度的選擇狹縫寬度增加，吸光度下降。以減少狹縫寬度時，供試品溶液的吸光度不再增加為準。四、定量分析方法對照品比較法

條件苛刻。方法：分別配制供試品和對照品溶液，在規(guī)定波長處分別測定它們的吸光度，按公式計算供試品溶液中被測組分的濃度。Cx=

×CRAxAR吸收系數(shù)法

應(yīng)用最多。方法：配制供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸光度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)，按下式計算供試品溶液的濃度。1cmC=AE1%

×l比色法

對于沒有紫外吸收的樣品。加入適當?shù)娘@色劑顯色后測定，影響因素較多。標準曲線法吸光度和濃度關(guān)系不呈良好線性第三節(jié)色譜分析法

一、HPLC采用高壓輸液泵將規(guī)定的流動相泵入裝有填充劑的色譜柱進行分離測定的色譜方法。1.對儀器的一般要求色譜柱

非極性鍵合相：十八烷基硅烷鍵合硅膠（C18，ODS）、辛基硅烷鍵合硅膠（C8）——反相色譜極性鍵合相：氨基硅烷鍵合硅膠、氰基硅烷鍵合硅膠——正相色譜、反相色譜流動相甲醇-水系統(tǒng)、乙腈-水系統(tǒng)檢測器濃度型：紫外、二極管陣列、熒光、電化學、質(zhì)譜質(zhì)量型：示差折光、電導、蒸發(fā)光散射可以適當改變的：色譜柱內(nèi)徑、長度、固定相牌號、載體粒度、流動相流速和比例、柱溫、進樣量、靈敏度不可以隨意更改的：固定相種類、流動相組分、檢測器類型《中國藥典》要求正文各品種項下的HPLC條件:2.色譜系統(tǒng)的適用性試驗通常包括：理論板數(shù)、分離度、重復(fù)性和拖尾因子等四個指標理論板數(shù)n=5.54×（tR/Wh/2

）2分離度R

=2（tR2-

tR1）/（W1+W2）重復(fù)性標準偏差小于2.0%拖尾因子T：用于評價色譜峰的對稱性?？瓷V峰是否對稱，T應(yīng)在0.95～1.05之間3.測定方法內(nèi)標法

可避免樣品前處理及進樣體積誤差對結(jié)果的影響。方法：1）精確配制對照品加內(nèi)標的溶液，計算校正因子

R：對照品S：內(nèi)標

2）取各品種項下含有內(nèi)標的供試品溶液，測量峰面積x：供試品，待測外標法

方法：精密稱（量）取對照品和供試品，配制成溶液，分別測量峰面積R：對照品x：供試品，待測

加校正因子的主成分自身對照法雜質(zhì)含量測定

不加校正因子的主成分自身對照法雜質(zhì)含量測定

面積歸一化法第三節(jié)色譜分析法

二、GC采用氣體流動相（載氣）流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進行分離測定的色譜方法。特點：分離效能高、靈敏度高、樣品用量少、分析速度快。主要用于溶劑殘留量的檢查、乙醇測定、揮發(fā)性雜質(zhì)檢查等。不適用于難揮發(fā)和熱穩(wěn)定性差的物質(zhì)。1.對儀器的一般要求載氣源

提供載氣，根據(jù)供試品的性質(zhì)和檢測器種類選擇載氣。主要有氮氣、氦氣和氫氣。進樣部分進樣方式：溶液直接進樣和頂空進樣（適用于供試品中揮發(fā)性成分）色譜柱樣品分離，有毛細管柱、填充柱兩種柱溫箱精度控制在±1℃，且溫度波動小于每小時0.1℃。溫度系統(tǒng)分為恒溫和程序升溫。檢測器數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)檢測器類型適用范圍火焰離子化檢測器（FID）大多數(shù)的有機化合物氮磷檢測器（NPD）適用于含氮、磷元素的藥物火焰光度檢測器（FPD）適用于含磷、硫元素的藥物電子捕獲檢測器（ECD）主要用于含鹵素、硫、氧、羰基、氰基的藥物質(zhì)譜檢測器（MS）大多數(shù)藥物，更靈敏熱導檢測器（TCD）通用型，但靈敏度低，應(yīng)用較少2.色譜系統(tǒng)的適用性試驗

與HPLC相同。3.測定方法內(nèi)標法外標法面積歸一化法標準溶液加入法精密稱（量）取對照品適量，配制成適當濃度的對照品溶液，取一定量，精密加入到供試品溶液中，根據(jù)外標法或內(nèi)標法測定含量，再扣除加入的對照品溶液含量，即得供試品中某個被分析組分的含量。第四節(jié)分析方法的驗證

指導原則藥品質(zhì)量標準分析方法驗證藥物制劑人體生物利用度和生物等效性試驗指導原則藥物穩(wěn)定性試驗指導原則緩釋、控釋制劑指導原則微囊、微球與脂質(zhì)體制劑指導原則細菌內(nèi)毒素檢查法應(yīng)用指導原則藥品質(zhì)量標準分析方法驗證

目的：

證明所采用的分析方法適合于相應(yīng)的檢測要求

效能指標：評價分析方法的尺度

效能指標包括:

精密度,準確度,檢測限,定量限,選擇性,

線性與范圍,耐用性檢驗項目和驗證內(nèi)容：項目內(nèi)容鑒別雜質(zhì)測定含量測定及溶出量測定定量限度準確度＋＋精密度－＋重復(fù)性＋＋中間精密度

＋①

＋①

專屬性②＋＋＋＋檢測限

－③＋－定量限＋－線性＋＋范圍＋＋耐用性＋＋＋①已有重現(xiàn)性驗證，不需驗證中間精密度②如一種方法不夠?qū)?，可用其他分析方法予以補充③視具體情況予以驗證(1)準確度（accuracy）：測量值與真實值接近的程度表示:回收率測定方法：回收試驗加樣回收試驗(2)精密度（precision）：定義:

同一樣品多次測量值之間相互接近的程度表示：標準偏差(s),相對標準偏差(RSD)重復(fù)性:

同一實驗室,同一人多次測定的精密度中間精密度:

同一實驗室，不同人，不同儀器測定的精密度重現(xiàn)性:

不同實驗室，不同人測定的精密度(3)專屬性（specificity）:

指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準確測定出被測物的特性)。(4)檢測限（limitofdetection，LOD）：藥物能被檢出的最低濃度(μg/ml)

測定:信噪比法(S:N=3:1)(5)定量限（1imitofquantitation，LOQ）