第十二章螺旋體、支原體、衣原體、立克次體第一節(jié)螺旋體螺旋體是一種細長、柔軟、螺旋狀、運動活潑的原核細胞型微生物。生物學(xué)上的地位介于細菌與原蟲之間。由于螺旋體的基本結(jié)構(gòu)及生物學(xué)形狀與細菌相似，如有細胞壁、原始核、以二分裂方式繁殖和對抗生素敏感等，故分類學(xué)上劃歸廣義的細菌學(xué)范疇。致病性螺旋體主要有下述3個屬：1．鉤端螺旋體屬2．疏螺旋體屬3．密螺旋體屬一、鉤端螺旋體鉤端螺旋體屬，螺旋細密而規(guī)則，一端或兩端彎曲呈鉤狀，故名鉤端螺旋體。分為問號狀鉤端螺旋體與雙曲鉤端螺旋體兩個種，其中問號狀鉤端螺旋體對人和動物致病。（一）生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色鉤端螺旋體大小為0.1?0.2μm*6?12μm。其螺旋在螺旋體目中最為細密和規(guī)則，一端或兩端彎曲使菌體呈問號狀或C、S形，故名鉤端螺旋體。革蘭染色陰性，但不易著色。常用Fontana鍍銀染色法，鉤端螺旋體被染成棕褐色。暗視野顯微鏡下可見運動活潑、因折光性強而成白色的鉤端螺旋體。暗視野顯微鏡×1500

鍍銀染色法×1000

鉤端螺旋體的基本結(jié)構(gòu)由外至內(nèi)分別為：外膜內(nèi)鞭毛原生質(zhì)圓柱體兩根內(nèi)鞭毛緊緊纏繞在原生質(zhì)圓柱體（相當(dāng)于細菌體）表面呈螺旋狀，具有與細菌鞭毛相似的功能，使鉤端螺旋體活潑地沿長軸旋轉(zhuǎn)運動。內(nèi)鞭毛由6種不同的蛋白質(zhì)組成，細菌鞭毛則為單一的蛋白質(zhì)。2.培養(yǎng)特性營養(yǎng)要求較高，常用含10%兔血清的柯氏培養(yǎng)基，兔血清除促進鉤端螺旋體生長外，還有中和代謝產(chǎn)物毒性的作用。最適生長溫度為28?30℃，最適PH為7.2?7.6，PH<6.5死亡，最髙能耐受PH8.4。在人工培養(yǎng)基中生長緩慢。在液體培養(yǎng)基中，分裂一次需8?10小時，28℃培養(yǎng)1周左右，呈現(xiàn)為半透明云霧狀生長，但菌數(shù)僅相當(dāng)于普通細菌的1/10?1/100。在固體培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)2周左右，可形成透明、不規(guī)則、直徑約2mm的扁平菌落。如將瓊脂濃度減至0.8%~1%則孵育3?10天后，形成針尖大小的半圓形苗落。非致病菌13℃可生長。不分解糖類和蛋白質(zhì)，能產(chǎn)生過氧化氫酶，有些鉤端螺旋體株可產(chǎn)生溶血素。4.抵抗力鉤端螺旋體對熱抵抗力弱，60℃1分鐘即死亡，0.2%來蘇、1：2000升汞、1%苯酚（石炭酸）經(jīng)10?30分鐘即可殺滅。對青霉素敏感。在夏秋季酸堿度中性的濕土或水中可存活20天以上，甚至數(shù)月之久，這在本菌的傳播上有重要意義。（二）微生物學(xué)檢驗1.標本采集10天內(nèi)取血液；2周后取尿液。有腦膜刺激癥者取CSF。2.鑒定直接鏡檢：暗視野觀察；鍍銀染色：棕褐色核酸檢測：特異DNA探針法、PCR血清學(xué)檢查動物試驗分離培養(yǎng)：血液尿液培養(yǎng)接種于Korthof培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后作暗視野檢查。（三）臨床意義鉤端螺旋體病是一種典型的人畜共患病，全世界至少已發(fā)現(xiàn)200多種動物問號鉤端螺旋體攜帶者。黑線姬鼠等鼠類和豬是最常見的儲存宿主。鉤端螺旋體在感染動物的腎臟中長期存在，持續(xù)隨尿不斷排出，污染水源和土壤，感染途徑是接觸污染的疫水。鉤端螺旋體以其一端或兩端黏附穿透完整的皮膚、黏膜或從破損處侵人人體，在局部迅速繁殖，并經(jīng)淋巴系統(tǒng)或直接進人血循環(huán)引起鉤端螺旋體血癥，產(chǎn)生致病物質(zhì)，如內(nèi)毒素樣物質(zhì)、溶血素、細胞毒性因子和細胞致病作用物質(zhì)，引起鉤端螺旋體病，出現(xiàn)中毒癥狀如發(fā)熱、乏力、頭痛、肌痛、眼結(jié)膜充血、淺表淋巴結(jié)腫大等，患者有全身毛細血管損傷和微循環(huán)障礙，并引起肝、腎功能損害。由于侵入的鉤端螺旋體血清型、毒力和數(shù)量不同以及宿主免疫水平差異，臨床表現(xiàn)差別很大。輕者似感冒，僅出現(xiàn)輕微的自限性發(fā)熱；重者可出現(xiàn)黃疸、肺出血、休克、DIC，甚至死亡。臨床上常見有流感傷寒型、黃疸出血型、肺出血型、腎功能衰竭型等。二、梅毒螺旋體（TP）密螺旋體屬蒼白螺旋體蒼白亞種梅毒地方亞種地方性梅毒極細亞種雅司病品他螺旋體品他?。ㄒ唬┥飳W(xué)特性1.形態(tài)與染色直徑0.10?0.2μm，長6~15μm，有8~14個致密而規(guī)則的小螺旋，兩端尖直。運動活潑。革蘭染色呈陰性，但不易著染。鍍銀染色法可將螺旋體染成棕褐色，在光鏡下可見。新鮮標本可在暗視野顯微鏡下，觀察其形態(tài)和運動方式。細胞壁外有包膜，細胞膜內(nèi)為含細胞質(zhì)和核質(zhì)的螺旋形原生質(zhì)圓柱體。圓柱體上緊繞著3?4根周漿鞭毛，也稱軸絲或內(nèi)鞭毛，與運動有關(guān)。運動方式多樣，有移行、屈伸、滾動等。2.培養(yǎng)特性梅毒螺旋體不能在無活細胞的人工培養(yǎng)基中生長繁殖。在棉尾兔上皮細胞培養(yǎng)中能有限生長，但繁殖慢。約30小時才分裂一次，并且只能維持數(shù)代。3.抵抗力抵抗力極弱。對溫度和于燥特別敏感。離體在外環(huán)境中干燥1?2小時即死亡在50℃時5分鐘死亡4℃置3天后可死亡，因此4℃血庫存放3天以上的血液無傳染梅毒的危險。對化學(xué)消毒劑亦敏感，1?2%的苯酚數(shù)分鐘就死亡。對青霉素、四環(huán)素、紅霉素、慶大霉素或砷劑均敏感。1.標本Ⅰ、Ⅱ期梅毒取下疳滲出液、梅毒疹滲出液或淋巴結(jié)穿刺液，先天性梅毒：臍血。2.鏡檢：暗視野；Fantana鍍銀染色或免疫熒光3.血清學(xué)診斷（二）微生物學(xué)檢驗（三）臨床意義梅毒螺旋體引起梅毒。人是梅毒的唯一傳染源。梅毒有先天性和獲得性兩種，前者通過胎盤由母體傳染胎兒；后者主要經(jīng)性接觸傳播，也可經(jīng)輸血引起。1.獲得性梅毒臨床上分為三期。Ⅰ期（初期）梅毒：感染后3周局部出現(xiàn)無痛性硬下疳。多見于外生殖器，其潰瘍滲出液中有大量蒼白亞種螺旋體，感染性極強。一般4?8周后，硬下疳常自愈。II期（中期）梅毒：發(fā)生于硬下疳出現(xiàn)后2?8周。全身皮膚、黏膜常有梅毒疹，全身淋巴結(jié)腫大，有時亦累及骨、關(guān)節(jié)、眼及其他臟器。I、II期傳染性強，但破壞性較小。III期〔晚期〉梅毒：發(fā)生于感染2年后。病變可波及全身組織和器官?；緭p害為慢性肉芽腫，局部因動脈內(nèi)膜炎所引起的缺血而使組織壞死。病損部位螺旋體少但破壞性大。巨大下疳(一期梅毒）Ⅱ期梅毒2.先天性梅毒又稱胎傳梅毒。系母體蒼白亞種螺旋體通過胎盤進入胎兒所致，多發(fā)生于妊娠4個月之后。早期先天梅毒第二節(jié)支原體支原體是一類缺乏細胞壁、形態(tài)上呈高度多形性，可以通過一般的除菌濾器，是目前所知能獨立生活，自行繁殖的最小原核細胞型微生物。由于它們能形成有分支的長絲，故稱之為支原體。對人致病的主要為：肺炎支原體人型支原體生殖器支原體解脲脲原體柔膜體綱支原體目肺炎支原體，人型支原體，生殖支原體，穿透支原體，發(fā)酵支原體，梨支原體脲脲原體支原體分類支原體科無膽甾原體科螺原體科支原體屬脲原體屬特點(1)無細胞壁，細胞柔軟，多形性，能通過細菌濾器（多形性、可塑性、濾過性）(2)在人工培養(yǎng)基中生長繁殖，形成“煎荷包蛋狀”菌落(3)基因組小，含有DNA和RNA(4)以二分裂或芽生方式繁殖(5)對青霉素有抵抗力常污染實驗室培養(yǎng)的細胞及生物制品（一）生物學(xué)特性一、形態(tài)與染色

無細胞壁，只有胞漿膜，呈高度多形性，無鞭毛，革蘭氏染色呈陰性，著色不良，姬姆薩或瑞氏染色良好，呈淡紫色。支原體的細胞膜中含有一般原核生物所沒有的甾醇，所以即使缺乏細胞壁，其細胞膜有較高的機械強度。球狀體：0.2~0.25mm，最小達0.1mm；絲狀體：最長可達150mm。因細胞柔軟且具扭曲性，致使細胞能通過孔徑比自身小得多的過濾器2.培養(yǎng)特性營養(yǎng)要求高，培養(yǎng)基中必須添加10~20%的人或動物血淸，以提供其不能合成的固醇和長鏈脂肪酸，并可穩(wěn)定其細胞膜。初次分離培養(yǎng)支原體，尚須添加的10%酵母浸液，并置于5%CO2的條件下生長較好。生長最適PH為7.8?8.0，溶脲脲原體的適應(yīng)PH則為6.0~6.5。最適溫度為36?37℃。主要以二分裂繁殖，由于基因組小，代謝能力有限，故繁殖較慢，1?6小時分裂一代（2-6d長出微小菌落），呈典型的“荷包蛋”狀菌落菌落能吸附豚鼠紅細胞；能產(chǎn)生溶血素，可迅速而完全地溶解哺乳動物紅細胞；半固體培養(yǎng)基中呈現(xiàn)肉眼可見的細小粒狀菌落。無細胞壁二分裂方式繁殖典型菌落呈油煎蛋樣肺炎支原體“油煎蛋”菌落

(10×)3.生化反應(yīng)支原體葡萄糖精氨酸尿素吸附細胞致病性肺炎支原體+--紅細胞肺炎、支氣管炎泌尿生殖道感染泌尿生殖道感染人型支原體-+--生殖器支原體+---穿通支原體++-紅細胞、CD4+T細胞、巨噬細胞條件感染、多見于艾滋病溶脲脲原體--+-泌尿生殖道感染4.抵抗力對熱的抵抗力與細菌相似，耐冷-70℃液氮可長期凍存。如在4℃放置不宜超過3天。支原體對干燥敏感，干燥的標本難以分離出支原體。因此標本到達實驗室后應(yīng)盡快接種。因支原體無細胞壁，對青霉素、頭孢菌素等作用于細胞壁的抗菌藥物不敏感，故常在分離培養(yǎng)基中加入青霉素。支原體對作用于其核蛋白體，抑制或影響菌體蛋白合成的抗菌藥物敏感，如紅霉素、多西環(huán)素、螺旋霉素等。（二）微生物學(xué)檢驗1.標本采集患者痰、咽拭子、鼻咽洗液、支氣管分泌物、血清標本等2.標本直接檢查：1）標本涂片2）核酸檢測PCR法：快速、敏感和特異3.分離與鑒定分離培養(yǎng)以牛心消化液為基礎(chǔ)另加20%小牛血清及新鮮酵母浸液制成的液體或固體培養(yǎng)基。加入適當(dāng)濃度醋酸鉈、青霉素，抑制雜菌生長。初次分離生長緩慢，先將標本接種于加有葡萄糖以及酚紅、美藍指示劑的液體培養(yǎng)基中增菌，1周后培養(yǎng)基由紫變綠，液體清晰，此時，可轉(zhuǎn)種于固體培養(yǎng)基上。鑒定典型“油煎蛋”樣菌落，能發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，不能利用精氨酸與尿素，可還原美藍4.抗體檢測方法有酶聯(lián)免疫吸附測定、冷凝集試驗、補體結(jié)合試驗、間接血凝試驗等。與細菌L型的不同點

鑒別點支原體細菌L型來源自然界、人與動物由細菌誘生而成細胞壁缺失原因在遺傳上與細菌無關(guān)與原菌相關(guān)，可以回復(fù)細胞膜含高濃度固醇細胞膜不含固醇培養(yǎng)特性一般培養(yǎng)基穩(wěn)定生長高滲培養(yǎng)菌落大小生長慢，菌落小菌落稍大(0.6~1.0mm)液體培養(yǎng)液體培養(yǎng)混濁度極低有一定混濁度，可附壁與細菌L型的相同點缺乏細胞壁，形態(tài)多樣，能通過濾菌器。固體培養(yǎng)—菌落呈荷包蛋樣或顆粒狀。臨床表現(xiàn)相似—間質(zhì)性肺炎、泌尿生殖道感染、不育等（三）臨床意義所致疾病存在廣泛，多不致病肺炎支原體引起原發(fā)性非典型性肺炎溶脲脲原體、人型支原體和生殖支原體可引起泌尿生殖系統(tǒng)感染和不育癥穿透支原體和發(fā)酵支原體為艾滋病的輔助致病因素第三節(jié)衣原體衣原體是一類專性活細胞內(nèi)寄生、具有獨特發(fā)育周期、且能通過細菌濾器的、介于立克次體與病毒之間的原核細胞型微生物。我國學(xué)者湯飛凡于1956年首先成功分離鑒定出沙眼衣原體。腐生菌寄生菌細胞內(nèi)寄生菌支原體立克次氏體衣原體大病毒小病毒進化OR退化主要特征革蘭氏陰性病原體，在自然界中傳播廣泛；專性細胞內(nèi)寄生，一般寄生在動物細胞內(nèi)；對多種抗生素敏感；能通過細胞濾器，有獨特發(fā)育周期、嚴格細胞內(nèi)寄生的原核細胞型微生物具有DNA和RNA兩種核酸，二分裂增殖，有核糖體和黏肽組成的細胞壁；具有獨立的酶系統(tǒng)，能分解葡萄糖釋放CO2，但缺乏產(chǎn)生代謝能量的作用，因而表現(xiàn)嚴格的細胞內(nèi)寄生；其生活周期分為細胞外期（即有感染性的原體）和細胞內(nèi)期（即增殖性的始體）兩個時期；Giemsa或熒光抗體染色可在細胞核附近原漿查見衣原體包涵體；衣原體基因組的Mr為660×10６,比除支原體外的任何原核生物都??；可作涂片檢查，補體結(jié)合試驗及微量免疫熒光試驗等檢測方法，還可直接作細胞培養(yǎng)分離衣原體；衣原體與其他微生物的區(qū)別衣原體與細菌的主要區(qū)別：缺乏合成生物能量來源的ATP酶，其能量完全依賴被感染的宿主細胞提供。衣原體與病毒的主要區(qū)別：具有DNA、RNA兩種核酸、核糖體和一個近似細胞壁的膜，并以二分裂方式進行增殖，能被抗生素抑制。四種衣原體是引起人類和動物疾病的病原沙眼衣原體鸚鵡熱衣原體肺炎衣原體反芻動物衣原體（一）生物學(xué)性狀1.形態(tài)結(jié)構(gòu)和生活周期呈圓形或卵圓形，光鏡下勉強可見，姬姆薩呈淡藍色或紫色。①原體（EB）是衣原體胞外存在形式，直徑0.25?0.35μm，卵圓形，中央有一致密的擬核，有胞壁，是發(fā)育成熟的衣原體，姬姆薩呈紫色，原體具有髙度的感染性；感染型。②網(wǎng)狀體（RB）或稱始體（IB）：直徑0.5?1.0μm，圓形或不規(guī)則形，中央呈纖細的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，無胞壁，無致密擬核。姬姆薩染色均呈藍色。網(wǎng)狀體為宿主細胞內(nèi)的繁殖型，代謝活潑，不能在胞外存活，無感染性。繁殖型。N:細胞核;燕尾箭頭:網(wǎng)狀體;五角星:中間體;箭頭:原體;Bar=1μm發(fā)育周期原體與易感宿主細胞表面的特異受體吸附后，通過攝粒作用進入胞內(nèi)，形成吞噬小泡，阻止吞噬溶酶體融合，原體在泡內(nèi)細胞壁變軟、增大形成網(wǎng)狀體，RNA增多。大約8小時后，始體二分裂增殖，在細胞膜覆蓋的空泡內(nèi)聚集，即稱為包涵體。于感染18?24小時后，網(wǎng)狀體濃縮形成具有堅韌細胞壁的原體，最后細胞破裂釋放原體，再感染其他細胞，開始新的發(fā)育周期，每個發(fā)育周期需48?72小時。衣原體發(fā)育周期2.培養(yǎng)特性專性細胞內(nèi)寄生動物接種（小鼠）雞胚接種（卵黃囊）細胞培養(yǎng)（McCoy、Hela-299等細胞株），是衣原體診斷的金標準，一般培養(yǎng)48?72小時后可在細胞內(nèi)查到包涵體及原體和始體顆粒。3.抵抗力弱，耐冷不耐熱，對紅霉素、強力霉素等敏感（二）微生物學(xué)檢驗1.沙眼衣原體不僅能引起眼科的感染性疾病，還可以引起泌尿生殖道、呼吸道感染等。其中以沙眼最常見。而且是致盲的首位因素。人類是其主要的自然宿主。（1）標本直接檢查顯微鏡檢查1）Giemsa染色：原體染成紫紅色，網(wǎng)狀體呈藍色。此法簡單易行，但敏感性較低。2）免疫熒光檢查：酶免疫檢測膠體金法檢測衣原體核酸檢測（2）抗體檢測2.肺炎衣原體主要引起青少年急性呼吸道感染，可引起肺炎、支氣管炎、咽炎和鼻竇炎等；臨床表現(xiàn)：咽痛、聲音嘶啞等；慢性感染與急性心肌梗死和慢性冠心病有關(guān)；慢性肺炎衣原體感染可能是冠心病的一個重要因素。（1）標本直接檢查：直接顯微鏡檢查：Giemsa染色查找包涵體——參考價值核酸檢測：采用PCR技術(shù)（2）細胞分離、培養(yǎng)與鑒定：選用HEP-2和H-292細胞系進行分離培養(yǎng)。鑒定——直接或間接法熒光染色。觀察并計算——包涵體數(shù)目3.鸚鵡熱衣原體主要引起動物肺炎、關(guān)節(jié)炎、流產(chǎn)和毒血癥等多種疾病，也可感染人類引起非典型性肺炎等。1）標本直接檢查顯微鏡檢查Giemsa或Machiavello染色法觀察衣原體的原體和網(wǎng)狀體。抗原檢測以衣原體屬、種或型的單克隆抗體與熒光素結(jié)合后，用免疫熒光的方法檢測組織或細胞中衣原體抗原的存在或用于衣原體的分型；也可用酶免疫法（EIA）檢測組織或細胞中的衣原體抗原。作業(yè)簡述衣原體的主要特征。簡述對衣原體引起的感染如何進行檢驗？名詞解釋：原體，始體，包涵體。第四節(jié)立克次體立克次體(Rickettsia)是一類專性活細胞內(nèi)寄生的G-原核細胞型微生物，是引起斑疹傷寒、恙蟲病、埃立克體病等傳染病的病原體。由美國醫(yī)師H.T.Ricketts發(fā)現(xiàn)。立克次體的共同特點1.大小介于細菌與病毒之間；2.有細胞壁，但形態(tài)多樣；3.絕大多數(shù)為專性細胞內(nèi)寄生；4.含有DNA和RNA兩種核酸，二分裂方式繁殖；5.大多是人畜共患病原體，引起人類發(fā)熱出疹性疾??；6.以節(jié)肢動物為傳播媒介或為儲存宿主；7.對四環(huán)素、氯霉素等抗菌藥物敏感。致病性立克次體及其所致疾病

普氏立克次體流行性斑疹傷寒人虱虱糞經(jīng)傷口感染莫氏立克次體地方性斑疹傷寒鼠蚤蚤糞經(jīng)傷口感染立氏立克次體落磯山斑點熱蜱蜱叮咬恙蟲病東方體恙蟲病恙螨恙螨幼蟲叮咬貝納柯克斯體Q

熱蜱接觸、呼吸道等查菲埃立克體單核細胞增多蜱蜱叮咬病原體所致疾病媒介傳播方式立克次體在胞內(nèi)大量生長，胞核被壓向一側(cè)。不同立克次體的細胞內(nèi)位置：普氏立克次體：細胞質(zhì)分散存在；恙蟲病東方體：細胞質(zhì)近核處成堆存在；斑點熱立克次體：細胞質(zhì)內(nèi)和核內(nèi)生長；Q熱柯克斯體