【農(nóng)業(yè)種植技術(shù)】食用菌菌種的脫毒技術(shù)

近年來(lái)，食用菌病害甚多，至今尚無(wú)有效、專用的防治藥物應(yīng)用于生產(chǎn)。將植物的脫毒技術(shù)應(yīng)用于食用菌生產(chǎn)，可有效抑制病害的發(fā)生。所謂植物脫毒，是將植物莖尖生長(zhǎng)尖端組織進(jìn)行分離，將分離組織置于特定培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，從而獲得脫離原體病毒、病菌的新生種苗。具體到食用菌的脫毒繁種，嚴(yán)格說(shuō)來(lái)，一般的組織分離并不能達(dá)到使菌種脫毒的目的，這是由于子實(shí)體已生長(zhǎng)至中后期，攜帶病毒、病菌的概率相當(dāng)高，故脫毒效果不明顯。而將食用菌尖端生長(zhǎng)點(diǎn)進(jìn)行脫毒，效果理想。具體的脫毒方法有兩種：1.菌絲尖端脫毒技術(shù)使用規(guī)格為90毫米或110毫米的培養(yǎng)皿。無(wú)此規(guī)格培養(yǎng)皿時(shí)，也可改用規(guī)格為25毫米×200毫米的大型試管，但操作不太方便。先按常規(guī)制備母種培養(yǎng)基，裝入三角瓶，棉塞封口，加皮紙包封；同時(shí)將培養(yǎng)皿洗凈后用牛皮紙包好。二者同時(shí)進(jìn)行滅菌處理。121℃下滅菌30分鐘，待滅菌鍋內(nèi)壓力為零時(shí)，取出滅菌物，放入事先消毒的接種箱。打開(kāi)牛皮紙包封，一手持培養(yǎng)皿，一手持三角瓶，利用手指調(diào)控使培養(yǎng)皿上蓋開(kāi)啟約1～2厘米，倒入培養(yǎng)基液體約10～20毫升，蓋嚴(yán)。將培養(yǎng)皿平置，冷卻后成一光滑平面，俗稱平板。平板冷卻至30℃以下時(shí)，接入待脫毒菌種。接種方法：挑取米粒大小的一塊種源，接入平板邊緣。接種后置于規(guī)定溫度下培養(yǎng)〔視品種調(diào)控溫度）。當(dāng)菌絲萌發(fā)至最長(zhǎng)為2厘米時(shí)，用尖刃接種工具切取菌絲尖端1毫米左右，接入新制平板上。此為1次脫毒。一般可連續(xù)脫毒3～4次。脫毒次數(shù)越多，脫毒效果就越有保證。2.原基組織脫毒技術(shù)該技術(shù)最大程度革除了原有組織分離時(shí)子實(shí)體處于生長(zhǎng)中后期，攜帶病毒、病菌可能性極大等弊端，真正實(shí)現(xiàn)了分離尖端組織的脫毒目的。具體操作為：常規(guī)配制基料，調(diào)破氮比為30∶1。碳氮比不可小于25∶1，以免菌絲過(guò)度旺盛生長(zhǎng)結(jié)成菌皮，不易現(xiàn)原基。大口罐頭瓶洗凈、備用。準(zhǔn)備數(shù)塊又11厘米×11厘米的純棉紗布。裝料至瓶口下1厘米時(shí)，從瓶口處鋪上一層紗布，用平口螺絲刀將紗布邊緣插至瓶下，使之緊貼瓶劈。封口滅菌、接種、培養(yǎng)等操作按常規(guī)進(jìn)行。待菌絲發(fā)滿瓶后，施行溫差、濕差、光照等刺激，一般約7天即可現(xiàn)出原基。此時(shí)原基的形態(tài)是白疙瘩。待原基高至1厘米時(shí)，即可進(jìn)行脫毒分離。將菌瓶用75％酒精擦洗后，移入已消毒的接種箱，箱內(nèi)不再進(jìn)行常規(guī)熏蒸。同時(shí)準(zhǔn)備接種針（或接種釣）、多個(gè)刀片（以備交替使用），與菌瓶一同放入接種箱中，噴灑新潔爾滅以確保無(wú)菌操作。兩手用75％酒精擦洗，伸入接種箱，將刀片進(jìn)行灼燒滅菌后手持冷卻。打開(kāi)菌瓶封口，兩手配合用無(wú)菌鑷子取出原基。由于料面覆蓋一層紗布，故不會(huì)將基料帶出，操作方便。用刀片將原基表層削去約1毫米，然后用尖刃刀片將原基劃切，使每塊大小1毫米2左右。用接種針將分離的原基塊移入平板或大型試管進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。操作要點(diǎn)：一