1顯色反應(yīng)

8.3顯色反應(yīng)及其影響因素2顯色劑3顯色條件的確定5測(cè)定中的干擾以及消除方法4測(cè)量條件的選擇1為什么顯色？官能團(tuán)強(qiáng)吸收直接測(cè)定UV-VIS官能團(tuán)弱吸收衍生化反應(yīng)UV-VIS顯色反應(yīng)通常通過顯色反應(yīng)生成吸光系數(shù)大的有色物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，以提高靈敏度332+桔紅色510鄰二氮菲有機(jī)物質(zhì)無(wú)機(jī)物質(zhì)1顯色反應(yīng)：

被測(cè)組分轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩衔锏姆磻?yīng)2對(duì)顯色反應(yīng)的要求

選擇性好，顯色條件易于控制，重現(xiàn)性好；靈敏度高，一般ε>104;生成的顯色化合物穩(wěn)定；顯色化合物與顯色劑的顏色差異大，顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處無(wú)明顯吸收,對(duì)照性好,Δmax>60nm3顯色反應(yīng)的類型（1）氧化還原反應(yīng)：如測(cè)水中的Mn2+，用過硫酸銨將Mn2+氧化為紫紅色MnO4-，在波長(zhǎng)525nm處有強(qiáng)吸收（2）絡(luò)合反應(yīng)：對(duì)無(wú)機(jī)陽(yáng)離子的顯色反應(yīng)，如Fe2+與鄰二氮菲的絡(luò)合物在510nm處有強(qiáng)吸收42顯色劑無(wú)機(jī)顯色劑：有機(jī)顯色劑：多為螯合劑，形成的絡(luò)合物穩(wěn)定、選擇性好，靈敏度高等，常用5有機(jī)顯色劑CH3－C－C－CH3HO－NN－OH＝＝NNOHCOOHSO3HOO型：NNNOH

OHON型：PARNHNHNSNS型：雙硫腙，能與20多重金屬離子形成有色鰲合物NN型：丁二酮肟鄰二氮菲磺基水楊酸63顯色條件的確定——單因素試驗(yàn)法CRCR1）顯色劑用量（λMAX

CM、pH一定）作A~CR

曲線，尋找適宜CR范圍ACR

一般選擇線性范圍內(nèi)有最大吸光度、且顯色劑用量最少的點(diǎn)。在測(cè)定波長(zhǎng)λMAX

、被測(cè)組分濃度CM一定條件下，影響顯色反應(yīng)的因素有：顯色劑用量、pH、溫度、反應(yīng)時(shí)間、干擾組分等

7酸度的影響副反應(yīng)M+nR=MRnOH-H+存在型體的變化RH=R-+H+

12生成不同配比的絡(luò)合物例，磺基水楊酸–Fe3+pH=2~3FeR紫紅色pH=4~7FeR2橙色pH=8~10FeR3黃色2)顯色反應(yīng)酸度反應(yīng)的完成程度8pH3～8為適宜的酸度范圍鄰二氮菲－亞鐵反應(yīng)完全程度與pH的關(guān)系

9固定CM、CR，作A~pH曲線，尋找適宜pH范圍。pH1<pH<pH2ApHpH1pH2103)顯色溫度及顯色時(shí)間(CM、CR

、pH一定)作A~T

曲線，確定適宜反應(yīng)溫度。ATATATAtAt反應(yīng)時(shí)間的選擇:作A~t

曲線，尋找適宜反應(yīng)時(shí)間。114）溶劑的選擇：測(cè)量波長(zhǎng)應(yīng)大于透明區(qū)波長(zhǎng)CHCl3245乙醚210苯280環(huán)己烷210己烷210CCl4265正丁醇210庚烷210DMF270二氯甲烷235甲醇215丙酮330二氧六環(huán)235異辛烷210吡啶303乙醇210水191硝基甲烷380對(duì)溶劑的要求1.低極性2.易溶解被測(cè)物3.穩(wěn)定4.在樣品的吸收光譜區(qū)無(wú)明顯吸收常用溶劑的光學(xué)透明區(qū)124測(cè)量條件的選擇無(wú)干擾，選擇max有干擾時(shí)1)測(cè)量波長(zhǎng)的選擇2)待測(cè)溶液吸光度的選擇控制A=0.15~1T=70%~10%方法1、非單色光影響小2、靈敏度高A選擇C選擇LAmax133)參比液的選擇原則：扣除比色皿、樣品基體（非待測(cè)組分）和顯色劑的吸收以顯色反應(yīng)為例進(jìn)行討論M+R=M-Rmax試樣 顯色劑溶劑吸光物質(zhì)參比液組成無(wú)吸收無(wú)吸收光學(xué)透明溶劑基體吸收無(wú)吸收吸收不加顯色劑的試液無(wú)吸收吸收吸收顯色劑+溶劑基體吸收吸收吸收吸收顯色劑+試液+待測(cè)組分掩蔽劑若欲測(cè)M-R

的吸收maxA（樣）=A（待測(cè)吸光物質(zhì)）+

A（干擾）+A（池）A（參比）=A（干擾）+A（池）14例:鄰二氮菲光度法測(cè)水中的Fe，1）若顯色劑及其他試劑有顏色，參比溶液：溶劑+所有試劑。2）若待測(cè)樣品中有干擾組分與顯色劑反應(yīng)生成有色物質(zhì)，參比溶液：待測(cè)樣品+所有試劑+被測(cè)組分掩蔽劑參比溶液選擇舉例155測(cè)定中的干擾以及消除方法1）控制溶液pH

2）加入掩蔽劑

3）改變干擾離子的價(jià)態(tài)

4）采用適當(dāng)?shù)墓舛葴y(cè)量條件和方法5）選擇適當(dāng)分離方法消除干擾

161、絕對(duì)法：測(cè)定樣品的吸光度，由A=εcL求出c，但須知吸光系數(shù)ε、光程L2、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法：在同樣條件下分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為已知c標(biāo)）和樣品溶液的吸光度，然后求出被測(cè)樣品的濃度3、標(biāo)準(zhǔn)曲線法：校正4、回歸分析法：c=aA+b,a,b為回歸系數(shù)5、解聯(lián)立方程組：利用吸光度的加和性，求多組分的濃度6、雙波長(zhǎng)分光光度法：自學(xué)7、示差分光光度法：透光率調(diào)零和100%的方法不同用cs>cx

的標(biāo)準(zhǔn)溶液調(diào)T=0%或用cs<cx

的標(biāo)準(zhǔn)溶液調(diào)T=100%8.4吸光光譜法的定量方法單組分測(cè)定多組分測(cè)定17A440cx標(biāo)準(zhǔn)曲線法的準(zhǔn)確性與兩個(gè)因素有關(guān)：（1）標(biāo)準(zhǔn)物濃度配制的準(zhǔn)確性；（2）標(biāo)準(zhǔn)試樣基體與樣品基體的一致性。0.0520AA2A3A10.00.20.40.60.81.01.230Ax濃度cAx工作曲線法：用分析物的純樣準(zhǔn)確配置一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)試樣，測(cè)得每一濃度對(duì)應(yīng)的吸光度A后，以A對(duì)濃度C作圖。18解聯(lián)立方程法多組分的測(cè)定AXY12根據(jù)吸光度加合性原則解聯(lián)立方程，可求得Cx,Cy為物質(zhì)的特征參數(shù)，可通過配制標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)得。ACs(x)19天然水中Fe2+的測(cè)定廢水中Cd2+測(cè)定：雙硫腙比色法（λmax=518nm）水中微量酚的測(cè)定：4—氨基安替比林分光光度法（λmax=510nm）水中氨氮、亞硝酸鹽氮、硝酸鹽氮及總氮的測(cè)定8.5應(yīng)用實(shí)例20配置標(biāo)準(zhǔn)溶液、繪制特征吸收曲線，確定λmax①配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液0、C標(biāo)1C標(biāo)2。。。，顯色反應(yīng)：Fe2++3phen=Fe(phen)2+3②測(cè)量同一濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液不同波長(zhǎng)下的吸光度，每隔10nm測(cè)定一次，找出最大的吸收波長(zhǎng)λmax(每變化波長(zhǎng)，用空白溶液重新調(diào)零)（λmax=510nm）做工作曲線（標(biāo)準(zhǔn)曲線）、測(cè)水樣Fe2+③用1cm比色皿在λmax=510nm下測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度A標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線A標(biāo)~

C標(biāo)④未知水樣顯色反應(yīng)，測(cè)未知水樣的A未，在該標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出相應(yīng)的C未1鐵的測(cè)定21總鐵的測(cè)定在水樣中加NH2OH·HCl（鹽酸羥胺）或抗壞血酸還原Fe3+:重復(fù)Fe2+的測(cè)定步驟測(cè)量范圍：水中0.03~5.0mg/L的鐵22干擾及消除干擾：消除方法：強(qiáng)氧化劑、氰化物、亞硝酸鹽、焦磷酸鹽、偏聚磷酸鹽及某些重金屬離子經(jīng)過加酸煮沸可將氰化物及亞硝酸鹽除去，并使焦磷酸、偏聚磷酸鹽轉(zhuǎn)化為正磷酸鹽以減輕干擾。加入鹽酸羥胺則可消除強(qiáng)氧化劑的影響。鄰菲啰啉能與某些金屬離子形成有色絡(luò)合物而干擾測(cè)定在乙酸-乙酸銨的緩沖溶液中，不大于鐵濃度10倍的銅、鋅、鈷、鉻及小于2mg/L的鎳，不干擾測(cè)定；當(dāng)濃度再高時(shí)，可加入過量鄰菲啰啉顯色劑予以消除。汞、鎘、銀等能與鄰菲啰啉形成沉淀，若濃度低時(shí)，可加過量鄰菲啰啉來消除；濃度高時(shí)，可將沉淀過濾除去。水樣含有大量有機(jī)物或底色較深，可用不加鄰菲啰啉的試液作參比，對(duì)水樣的底色進(jìn)行校正，或?qū)⑺畼诱舾?、灰化后用酸重新溶解再測(cè)定。23

2水中含氮化合物的測(cè)定1）氨氮——①納氏試劑光度法黃棕色（λmax=420nm）注意事項(xiàng)：1）測(cè)定范圍0.025~2mg/L；

2）水中氨氮含量>1mg/L直接用納氏試劑測(cè)定,[NH3]<1mg/L或樣品基體顏色或濁度高時(shí)需預(yù)先蒸餾蒸出NH3

后再用納氏試劑測(cè)定；或?qū)λ畼有跄恋眍A(yù)處理后測(cè)定

3）[NH3]>5mg/L時(shí)直接用酸堿滴定測(cè)定納氏試劑（碘化汞和碘化鉀的強(qiáng)堿溶液）24②蒸餾-滴定法適合于氨氮濃度較高的水樣，方法檢出下限為0.2mg/L。先用蒸餾法將氨蒸出，吸收于硼酸溶液中，再用酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定餾出液中的銨③電極法是利用氨氣敏復(fù)合電極進(jìn)行氨氮的定量測(cè)試，該法不受水樣顏色和濁度的干擾，水樣不必進(jìn)行預(yù)處理，測(cè)定范圍為0.03-1400mg/L。25N－(1-萘基)－乙二胺比色法1）在酸性溶液中，NO2－與對(duì)氨基苯磺酰胺生成重氮鹽：

2）重氮鹽與N-（1-萘基）-乙二胺偶聯(lián)生成紅色染料：

（紅色染料）（λmax=540nm）2）亞硝酸鹽氮：N－(1-萘基)－乙二胺比色法（GB13580.7-92）、α－萘胺比色法（GB13589.5-92）和分光光度法（GB7493-87）、離子色譜法等。263）硝酸鹽氮硝酸鹽氮的測(cè)定方法主要有酚二磺酸光度法（GB74８0-87）、麝香草酚分光光度法、紫外分光光度法、鎘柱還原法、離子色譜法和電極流動(dòng)法等。

27①酚二磺酸光度法黃色化合物（λmax=410nm）28②麝香草酚分光光度法測(cè)量原理：硝酸鹽和麝香草酚在濃硫酸溶液中形成硝基酚化合物，在堿性溶液中發(fā)生分子重排，生成黃色化合物，415nm下測(cè)定。適用于低濃度水樣中硝酸鹽氮的測(cè)定，最低檢測(cè)質(zhì)量濃度為0.12mg/L硝酸鹽氮（以N計(jì)）。干擾與消除方法：亞硝酸鹽對(duì)本規(guī)范呈正干擾，可用氨基磺酸銨除去；氯化物對(duì)本規(guī)范呈負(fù)干擾，可用硫酸銀消除29③紫外分光光度法水樣經(jīng)預(yù)處理后，分別在220nm、275nm處測(cè)2次吸光度，根據(jù)兩次吸光度值，引入吸光度的經(jīng)驗(yàn)校正值A(chǔ)校，進(jìn)行定量測(cè)定。A校＝A220－2A275式中，A220—220nm波長(zhǎng)處測(cè)得的吸光度，包括硝酸鹽+溶解有機(jī)物產(chǎn)生的吸收；

A275

—275nm波長(zhǎng)處測(cè)得的吸光度，僅有機(jī)物產(chǎn)生吸收。304）凱氏氮?jiǎng)P氏氮是指以凱氏（Kjeldahl）法測(cè)得的含氮量，包括氨氮+有機(jī)氮化合物（在此條件下能被轉(zhuǎn)化為銨鹽的有機(jī)物）

有機(jī)氮=凱式氮-氨氮31凱氏定氮法原理消化：樣品與濃硫酸和催化劑（硫酸銅）一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，其中碳和氫被氧化為二氧化碳和水逸出，而樣品中的有機(jī)氮轉(zhuǎn)化為氨與硫酸結(jié)合成硫酸銨。蒸餾：加堿蒸餾，使氨蒸出。吸收：用H3BO3吸收滴定：以標(biāo)準(zhǔn)HCl溶液滴定。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)酸消耗量可以計(jì)算出蛋白質(zhì)的含量?；蚣{氏試劑光度法測(cè)氨氮測(cè)定整個(gè)過程分三步：消化、蒸餾、吸收與滴定32凱氏定氮裝置1.安全管2.導(dǎo)管3.汽水分離器4.塞子

5.進(jìn)樣口6.冷凝管7.吸收瓶8.隔熱液套

9.反應(yīng)管10.蒸汽發(fā)生器消化樣品濃H2SO4CuSO4·5H2OK2SO4樣品空白2.蒸NH333

食品和其原料中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定，國(guó)內(nèi)外普遍應(yīng)用凱氏定氮法測(cè)定總氮量，然后乘一個(gè)蛋白質(zhì)換算系數(shù)。蛋白質(zhì)換算系數(shù)：

=N×6.25=蛋白質(zhì)含量凱氏法測(cè)定牛奶中的蛋白質(zhì)含量34牛奶造假凱氏定氮只能測(cè)出含氮量而無(wú)法測(cè)出氮的來源。一些非蛋白原料,

如尿素以及尿素類成