動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體詳解演示文稿第一頁(yè)，共三十四頁(yè)。優(yōu)選動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體第二頁(yè)，共三十四頁(yè)。挑戰(zhàn)自我“太空婚禮”科研項(xiàng)目一：植物體細(xì)胞雜交技術(shù)“太空婚禮”科研項(xiàng)目二：

動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)第三頁(yè)，共三十四頁(yè)。溫故而知新：哪種植物細(xì)胞工程技術(shù)可以突破不同生物之間的生殖隔離，克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，培育出新的作物類型？

植物體細(xì)胞雜交技術(shù)你能回憶出植物體細(xì)胞雜交的過(guò)程嗎？第四頁(yè)，共三十四頁(yè)。植物細(xì)胞A植物細(xì)胞B去掉細(xì)胞壁去掉細(xì)胞壁原生質(zhì)體A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體融合雜合的原生質(zhì)體再生出細(xì)胞壁雜種細(xì)胞脫分化再分化愈傷組織胚狀體/雜種植株溫故知新:植物體細(xì)胞雜交過(guò)程第五頁(yè)，共三十四頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合第六頁(yè)，共三十四頁(yè)。

課前思考1、什么叫動(dòng)物細(xì)胞融合？植物體細(xì)胞雜交技術(shù)與動(dòng)物細(xì)胞融合有什么不同呢？2、動(dòng)、植物細(xì)胞在結(jié)構(gòu)上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過(guò)程有什么影響？3、動(dòng)物細(xì)胞融合與植物原生質(zhì)體融合的基本原理是否相同？?jī)烧叩娜诤线^(guò)程是否也一樣？4、植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？那動(dòng)物細(xì)胞融合呢？第七頁(yè)，共三十四頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞融合和單克隆抗體細(xì)胞融合是正常的生命活動(dòng)正在融合的兩個(gè)細(xì)胞受精作用第八頁(yè)，共三十四頁(yè)。一、動(dòng)物細(xì)胞融合1.概念：兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程2.原理：細(xì)胞膜的流動(dòng)性第九頁(yè)，共三十四頁(yè)。誘導(dǎo)方式物理法化學(xué)法生物法：滅活的病毒仙臺(tái)病毒紫外線喪失感染性（不感染細(xì)胞）保留融合活性（誘導(dǎo)細(xì)胞融合）3、誘導(dǎo)方法滅活：指用物理或化學(xué)手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)第十頁(yè)，共三十四頁(yè)。4.過(guò)程：融合有絲分裂雜交細(xì)胞含不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞第十一頁(yè)，共三十四頁(yè)。過(guò)程詳解滅活的病毒誘導(dǎo)細(xì)胞融合的原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細(xì)胞膜上的糖蛋白發(fā)生作用，使細(xì)胞互相凝聚，細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細(xì)胞膜打開(kāi)，細(xì)胞發(fā)生融合。第十二頁(yè)，共三十四頁(yè)。5、動(dòng)物細(xì)胞融合技術(shù)的意義和應(yīng)用第十三頁(yè)，共三十四頁(yè)。思考題①.植物體細(xì)胞雜交時(shí)首先應(yīng)用什么方法去掉細(xì)胞壁？酶解法，如纖維素酶,果膠酶②.動(dòng)物細(xì)胞融合時(shí)需要進(jìn)行去壁處理嗎？為什么？無(wú)需，因?yàn)閯?dòng)物細(xì)胞無(wú)細(xì)胞壁

③.植物體細(xì)胞雜交誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合常用的方法有哪些？離心、電激等物理方法；PEG等化學(xué)方法

④.動(dòng)物細(xì)胞融合能利用上述兩類方法嗎？還有其他方法嗎？能還可以利用滅活的病毒進(jìn)行誘導(dǎo)

⑤.植物體細(xì)胞雜交應(yīng)先進(jìn)行原生質(zhì)體的融合再進(jìn)行組織培養(yǎng)形成完整的雜種個(gè)體，動(dòng)物細(xì)胞融合后能形成雜種動(dòng)物個(gè)體嗎？不能第十四頁(yè)，共三十四頁(yè)。細(xì)胞融合與誘導(dǎo)細(xì)胞融合物質(zhì)：誘導(dǎo)劑：仙臺(tái)病毒、聚乙二醇

誘導(dǎo)細(xì)胞融合的病毒必須滅活。

思考討論：為什么細(xì)胞融合過(guò)程中使用的病毒需要滅活？不滅活行嗎？因?yàn)椴粶缁畹牟《緯?huì)感染細(xì)胞，而不能誘導(dǎo)細(xì)胞融合。第十五頁(yè)，共三十四頁(yè)。植物體細(xì)胞雜交和動(dòng)物細(xì)胞融合的比較比較項(xiàng)目植物體細(xì)胞雜交動(dòng)物細(xì)胞融合過(guò)程原理細(xì)胞融合的過(guò)程誘導(dǎo)方法用途細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞的全能性細(xì)胞膜的流動(dòng)性去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)、生物方法獲得雜種植株制備單克隆抗體細(xì)胞融合，植物組織培養(yǎng)細(xì)胞融合第十六頁(yè)，共三十四頁(yè)。單克隆抗體溫故知新第十七頁(yè)，共三十四頁(yè)。提問(wèn)？#抗體是由何種細(xì)胞產(chǎn)生的？效應(yīng)B細(xì)胞（漿細(xì)胞）。#一個(gè)Ｂ淋巴細(xì)胞(漿細(xì)胞)能分泌多種抗體嗎？

每一個(gè)Ｂ淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體?？贵w的化學(xué)本質(zhì)是免疫球蛋白。B淋巴細(xì)胞與抗體的關(guān)系：

１．B淋巴細(xì)胞受抗原刺激后，可以產(chǎn)生抗體。２．每一個(gè)淋巴細(xì)胞只能產(chǎn)生一種抗體。３．動(dòng)物體內(nèi)的B淋巴細(xì)胞可以產(chǎn)生百萬(wàn)種以上的抗體，每種抗體對(duì)特定的抗原具有特異性免疫作用。4.抗體主要分布于動(dòng)物血清中，在外分泌液中有少量抗體。第十八頁(yè)，共三十四頁(yè)。一、生產(chǎn)抗體的傳統(tǒng)方法效應(yīng)B細(xì)胞多種抗原動(dòng)物體內(nèi)刺激抗體抗原不純抗體不純篩選單一效應(yīng)B細(xì)胞效應(yīng)B細(xì)胞不能大量增殖產(chǎn)生大量抗體第十九頁(yè)，共三十四頁(yè)。

所以傳統(tǒng)的抗體的生產(chǎn)方法及缺陷是什么？怎樣解決這個(gè)問(wèn)題？特異性差、純度低；產(chǎn)量低、反應(yīng)不夠靈敏第二十頁(yè)，共三十四頁(yè)。二、單克隆抗體1.概念：

由單個(gè)B淋巴細(xì)胞經(jīng)過(guò)克隆形成的基因型相同的細(xì)胞群，這一細(xì)胞群所產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、特異性強(qiáng)的抗體稱為單克隆抗體特異性強(qiáng)、靈敏度高化學(xué)性質(zhì)單一2.特點(diǎn)：第二十一頁(yè)，共三十四頁(yè)。3、生產(chǎn)單克隆抗體所用細(xì)胞及其特點(diǎn)第二十二頁(yè)，共三十四頁(yè)。接受抗原刺激后，能分泌針對(duì)該抗原的特異性抗體，在體液免疫中具有重要功能。B淋巴細(xì)胞本身是一種終末分化細(xì)胞，通常不再進(jìn)行細(xì)胞分裂，存活一段時(shí)間后便會(huì)死亡——短命細(xì)胞B淋巴細(xì)胞所以B淋巴細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)不能無(wú)限增殖，而癌細(xì)胞是可以無(wú)限增殖的。第二十三頁(yè)，共三十四頁(yè)。骨髓瘤細(xì)胞:惡性增殖的轉(zhuǎn)化細(xì)胞，只要營(yíng)養(yǎng)條件適合可永遠(yuǎn)分裂和存活——長(zhǎng)命細(xì)胞。經(jīng)篩選與馴化，現(xiàn)已建立多種骨髓瘤細(xì)胞株——沒(méi)有抗體分泌物。因此可以利用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與之融合，就可獲得既能無(wú)限增殖又能產(chǎn)生單一抗體的細(xì)胞。第二十四頁(yè)，共三十四頁(yè)。如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗體的功能利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞如何篩選？融合方式？第二十五頁(yè)，共三十四頁(yè)。設(shè)計(jì)方案：一個(gè)效應(yīng)B淋巴細(xì)胞－－只分泌一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞－－能無(wú)限增殖雜種細(xì)胞第二十六頁(yè)，共三十四頁(yè)。

4.單克隆抗體制備過(guò)程

注射抗原B淋巴細(xì)胞骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞融合、篩選雜交瘤細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細(xì)胞群體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔單克隆抗體第二十七頁(yè)，共三十四頁(yè)。HAT培養(yǎng)基（屬于選擇性培養(yǎng)基，含有次黃嘌呤(H)、氨基喋呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)）中進(jìn)行選擇性培養(yǎng)，由于氨基蝶呤可阻礙DNA正常合成途徑，所以培養(yǎng)基中含有它時(shí)，細(xì)胞只能通過(guò)補(bǔ)救途徑合成DNA。未融合的骨髓瘤細(xì)胞合成DNA的主要途徑被培養(yǎng)基中的氨基蝶呤阻斷，又因缺乏次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT），不能利用培養(yǎng)基中的次黃嘌呤完成DNA的合成過(guò)程而死亡。未融合的脾細(xì)胞因不能在體外長(zhǎng)期存活而死亡；只有融合的雜交瘤細(xì)胞由于從脾細(xì)胞獲得了次黃嘌呤-鳥(niǎo)嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶，因此能在HAT培養(yǎng)基中存第二十八頁(yè)，共三十四頁(yè)。單克隆抗體大量制備過(guò)程（雜交瘤技術(shù)）過(guò)程：第二十九頁(yè)，共三十四頁(yè)。

①利用淋巴細(xì)胞產(chǎn)生單一抗體特性②利用腫瘤細(xì)胞無(wú)限增殖的特性③利用細(xì)胞融合的技術(shù)將兩種細(xì)胞融合獲得具有淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞特性的雜交瘤細(xì)胞④利用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞思考5、單克隆抗體生產(chǎn)利用了哪些原理和技術(shù)？原理技術(shù)第三十頁(yè)，共三十四頁(yè)。1、為什么選用小鼠骨髓瘤細(xì)胞與B細(xì)胞融合？這樣融合成的雜交瘤細(xì)胞，繼承了雙親細(xì)胞的遺傳物質(zhì)，不僅具有B細(xì)胞分泌抗體的能力，而且還有無(wú)限增殖的本領(lǐng)，因而可以獲得大量單克隆抗體第三十一頁(yè)，共三十四頁(yè)。2、整個(gè)制備過(guò)程為何要經(jīng)過(guò)兩次篩選?（第一次篩選得到雜交瘤細(xì)胞（多種），“第二次”需先在多孔培養(yǎng)板上，在每孔只有一個(gè)雜交瘤細(xì)胞的情況下開(kāi)始培養(yǎng)，然后再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群。

由于該細(xì)胞群是單個(gè)雜交瘤細(xì)胞克隆得來(lái)的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學(xué)性質(zhì)單一的，特異性強(qiáng)的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個(gè)細(xì)胞克隆的含義，只不過(guò)克隆的不是B淋巴細(xì)胞，而是雜交瘤細(xì)胞。）

第三十二頁(yè)，共三十四頁(yè)。6.單克隆抗體的應(yīng)用①、作為診斷試劑——單克隆抗體最廣泛的用途②、用于治療疾病和運(yùn)載藥物目前世界各國(guó)已經(jīng)研制出數(shù)以百計(jì)的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳