食品安全地方標準 乳粉中酪蛋白磷酸肽的測定_第1頁
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PAGE3乳粉中酪蛋白磷酸肽的測定高效液相色譜法1范圍本標準規(guī)定了乳粉中酪蛋白磷酸肽測定的高效液相色譜方法。本標準適用于乳粉中酪蛋白磷酸肽的含量測定。本標準方法檢出限為10g/kg。2規(guī)范性引用文件本標準內容引用了下列文件中的條款。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本標準。凡是不注明日期的引用文件，其有效版本適用于本標準。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法3原理乳粉用常溫去離子水溶解，以乙腈和0.1％醋酸溶液為流動相，在030min內，乙腈由0％100％梯度洗脫，經ZORBAXSBC18柱色譜柱分離，高效液相色譜紫外檢測器280nm檢測，保留時間定性，外標法測定試樣中乳粉中酪蛋白磷酸肽的含量。4試劑和材料除非另有規(guī)定，僅使用分析純試劑、蒸餾水或去離子水，滿足GB/T6682要求。4.1乙腈：色譜純。4.2冰醋酸。4.3濾膜：0.45m。4.4酪蛋白磷酸肽標品：分析純，含量≥95.00%。4.5酪蛋白磷酸肽標準溶液：精密稱取酪蛋白磷酸肽標準品100.00mg，用去離子水溶解并定容于25mL容量瓶中，用0.45m濾膜過濾后，備用。5儀器5.1天平（精度0.01g和0.0001g）。5.2高效液相色譜儀（帶紫外檢測器，二元泵）。6分析方法6.1樣品處理稱取乳粉試樣3g5g（精確至0.01g）于50mL容量瓶中，常溫去離子水溶解，定容至刻度，搖勻。0.45m過濾，供高效液相色譜分析。6.2標準樣品溶液的配制準確吸取酪蛋白磷酸肽標準溶液0.25mL、0.50mL、1.00mL、2.50mL、5.00mL于100mL容量瓶中，加水稀釋至刻度。制成濃度依次為l0g/mL、20g/mL、40g/mL、100g/mL、200g/mL的標準樣品溶液，供高效液相色譜分析使用。6.3色譜參考條件色譜柱：ZORBAXSBC18柱（4.6mm×250mm×5m）或等效柱。紫外檢測波長：280nm。流動相：乙腈和0.1％醋酸溶液，在030min內，乙腈由0％100％梯度洗脫。流速：1.0mL/min。柱溫：25℃。進樣量：20L。6.4測定精密吸取試樣和標準樣品溶液，按規(guī)定色譜條件分別進樣20μL，按照6.3項條件進行檢測，以保留時間定性，外標法定量。譜圖見附錄。6.5結果計算按外標法計算試樣中酪蛋白磷酸肽的含量。見下式：式中：X—試樣中酪蛋白磷酸肽的含量，mg/kg；A—從標準曲線上求出的試樣液中酪蛋白磷酸肽的質量，g；f—試樣的稀釋倍數；m—試樣的取樣量，g；計算結果保留兩位有效數字。6.6精密度在重復性條件

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