體外診斷試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則—-生物芯片類(lèi)試劑生產(chǎn)及質(zhì)量控制技術(shù)指導(dǎo)原則（報(bào)批稿）本指導(dǎo)原則所定義的生物芯片診斷試劑是指將多個(gè)生物探針（包括DNA片段，寡核苷酸、抗原、抗體，組織，細(xì)胞等）按預(yù)先設(shè)計(jì)的排列方式固定在特制的基質(zhì)（包括玻璃片，尼龍膜，硝酸纖維素膜等)上，用特定的方法提取生物靶分子并進(jìn)行標(biāo)記，然后與固定在基質(zhì)上的生物探針特異性的結(jié)合，再用相應(yīng)的檢測(cè)設(shè)備(如激光掃描儀、CCD檢測(cè)儀等）和分析方法（包括軟件)進(jìn)行檢測(cè)、記錄、分析,實(shí)現(xiàn)對(duì)生物靶分子的定性或定量檢測(cè)的試劑。根據(jù)芯片制作的主要原料和方法，生物芯片可分為核酸芯片、蛋白芯片、細(xì)胞芯片、組原則,其它類(lèi)型靶分子檢測(cè)的芯片診斷試劑可參考本指導(dǎo)原則。國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理部門(mén)將依據(jù)科學(xué)技術(shù)發(fā)展的需要，適時(shí)組織修訂。一、基本原則（一)試劑研制、生產(chǎn)用各種原料、輔料等應(yīng)制定相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),并符合有關(guān)法規(guī)的要求。（二,（試行》的要求建立相應(yīng)(試行》的考核。（三）生物芯片類(lèi)試劑在研制時(shí)，應(yīng)當(dāng)按照科學(xué)、規(guī)范的原則組織研發(fā)，各反應(yīng)條件的選擇和確定應(yīng)符合基本的科學(xué)原理。（)應(yīng)充分考慮可能涉及的安全性方面的事宜。(五）二、原材料質(zhì)量控制（一）核酸檢測(cè)芯片核酸芯片檢測(cè)時(shí)，從生物樣本中提取的核酸可用熒光標(biāo)記、金標(biāo)記和酶標(biāo)記；檢測(cè)方法.1、主要生物原料核酸檢測(cè)芯片的主要生物原料包括模板DNA、dNTPs、引物、探針、標(biāo)記物等。主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn)，其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定,企業(yè)應(yīng)按照工藝要求對(duì)這類(lèi)生物原料進(jìn)行.如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求進(jìn)行變更申請(qǐng)。(1）模板DNA重組DNA：經(jīng)測(cè)序驗(yàn)證,關(guān)鍵堿基或序列沒(méi)有錯(cuò)誤.1×TE溶解，濃度為100ng/μl以上，—20℃保存.作為陽(yáng)性參考品時(shí)，其稀釋度由企業(yè)根據(jù)產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)確定。（2）dNTPs(dATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP)HPLC純，PCR級(jí)，無(wú)DNase、RNase污染,-20℃以下保存.(3）引物純或HPLCDNA,,(4）探針（用于陣列制備）重組DNA,凍干粉（或1×TE溶解液,酶切鑒定分析圖譜。PCR產(chǎn)物，凍干粉（1×TE)純或HPLC純,至少滿足一個(gè)批次的用量，提供該產(chǎn)品的PAGE電泳分析圖譜或HPLC分析圖譜。探針序列的正確性：應(yīng)用克隆鑒定的標(biāo)準(zhǔn)DNA雜交鑒定或測(cè)序鑒定。,目的條帶的強(qiáng)度與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)DNA條帶進(jìn)行參比計(jì)算其強(qiáng)度。純度較高的DNA-20℃以下保存。標(biāo)記物含有激發(fā)光波長(zhǎng)和發(fā)射光波長(zhǎng)介于280？680nm的所有熒光分子，HPLC純。TaqDNA聚合酶SDS—PAGE檢測(cè)，純度＞95％，具有DNA聚合酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性；具熱穩(wěn)定性，94℃保溫1小時(shí)后仍保持50%活性.產(chǎn)品—20℃保存。(UNG）具尿嘧啶糖基化酶活性,無(wú)核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。1UUNG37℃處理3分鐘后，103拷貝以下含U模板被降解后不能產(chǎn)生擴(kuò)增產(chǎn)物。產(chǎn)品-20℃保存。RT酶具有逆轉(zhuǎn)錄活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性，-20℃保存。酶具逆轉(zhuǎn)錄酶活性和DNA聚合酶活性，無(wú)核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性，94℃1小時(shí)后仍保持50％活性.產(chǎn)品—20℃保存。(10)緩沖液各類(lèi)酶制品所需的反應(yīng)緩沖液由廠家隨酶制品提供，—20℃保存。2、主要生物輔料(蛋白酶、核酸酶等、核酸提取試劑、魚(yú)精DNA.（配制,;若購(gòu)買(mǎi)，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商，同時(shí),供應(yīng)商應(yīng)提供相應(yīng)的質(zhì)量保證達(dá)到生產(chǎn)規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。3、主要化學(xué)原輔料（2000年版溶液外觀、一般鹽類(lèi)檢測(cè)、溶液pH燥失重、熾灼殘?jiān)?。主要化學(xué)原材料的供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不得隨意發(fā)生變更.化學(xué)原材料在購(gòu)入時(shí)，原材料的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)檢報(bào)告需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。4、其他物料(1)載玻片激光掃描儀掃描（):包被層基本均勻。(2）試管、吸頭、試劑瓶等一次性使用,由生產(chǎn)廠家提供質(zhì)量保證，達(dá)到設(shè)計(jì)要求。(3）其他：包括試劑瓶標(biāo)簽、鋁箔袋、襯墊、可密封塑料袋、說(shuō)明書(shū)、干燥劑和包裝外盒等，應(yīng)參書(shū)、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（二)蛋白檢測(cè)芯片主要生物原料與生產(chǎn)的產(chǎn)品質(zhì)量最密切相關(guān)的生物原料包括各種天然抗原、重組抗原、單克隆杭體、多克隆抗體以及多肽類(lèi)生物原科.這類(lèi)原料可用于點(diǎn)膜、標(biāo)記相關(guān)酶、納米金、光學(xué)基團(tuán)及中和反應(yīng)用抗原或抗體等。使用前應(yīng)按照工藝要求對(duì)這類(lèi)生物原料進(jìn)行質(zhì)量檢驗(yàn),以保證其達(dá)到規(guī)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).主要生物原料若為企業(yè)自己生產(chǎn),其工藝必須相對(duì)穩(wěn)定;若購(gòu)買(mǎi)，其供應(yīng)商要求相對(duì)固定，不能隨意變更供應(yīng)商,如果主要原料（包括工藝）或其供應(yīng)商有變更，應(yīng)依據(jù)國(guó)家相關(guān)法規(guī)的要求變更申請(qǐng)。主要生物原料的常規(guī)檢驗(yàn)項(xiàng)目一般包括:⑴外觀肉眼觀察,大部分生物原料為澄清均一液體,不含異物、渾濁或搖不散的沉淀或顆粒；或者為白色粉末,不含其他顏色雜質(zhì)；特殊生物原料應(yīng)具備相應(yīng)外觀標(biāo)準(zhǔn)。⑵純度和分子量生物原料經(jīng)SDS—PAGE,如泳。一般每個(gè)電泳道加樣量為5μg.染色后⑶蛋白濃度蛋白濃度可通過(guò)Lowry法、280nm光吸收法、雙縮脲法或其它適宜方法進(jìn)行檢測(cè)。⑷效價(jià)效價(jià)的測(cè)定一般根據(jù)蛋白含量測(cè)定結(jié)果，通過(guò)倍比稀釋法進(jìn)行。效價(jià)應(yīng)達(dá)到規(guī)定的要求。⑸功能性實(shí)驗(yàn)功能性實(shí)驗(yàn)是指生物原料用于試劑盒實(shí)際生產(chǎn)中的情況，一般考查使用該原料的試劑的靈敏度、特異性和穩(wěn)定性等，并比較其與上批次原料的相關(guān)性.主要生物輔料ft年版.建議作以下檢驗(yàn):⑴牛血清或羊血清外觀:為淺黃色澄清稍粘稠的液體，無(wú)溶血或異物無(wú)菌試驗(yàn):將血清直接37℃放置7天，放在明亮處觀察，不得出現(xiàn)混濁或沉淀.總蛋白含量：用雙縮脲法測(cè)定，標(biāo)準(zhǔn)為不小于32mg/ml.球蛋白含量:取待測(cè)血清1ml,采用飽和硫酸銨法進(jìn)行沉淀.沉淀溶于0.85%NaCl溶液至1ml，用Lowry法測(cè)定蛋白含量不能大于2mg/ml。⑵牛血清白蛋白：外觀：應(yīng)為淺黃色、黃色或乳白色的凍干粉末，無(wú)吸潮,無(wú)結(jié)塊，無(wú)肉眼可見(jiàn)的其它雜質(zhì)顆粒。溶解性：將牛血清白蛋白配成10％溶液，溶解時(shí)間在18-26℃時(shí)應(yīng)不大于15分鐘.pＨ值應(yīng)為6.5?7。1?？偟鞍缀浚河秒p縮脲法測(cè)定,其標(biāo)準(zhǔn)為不小于干重的95％.總蛋白中的BSA含量：采用硝酸纖維素膜電泳法，其標(biāo)準(zhǔn)為不小于總蛋白含量的95％.BSA的凈含量:總蛋白含量乘總蛋白中的BSA含量，其標(biāo)準(zhǔn)為不小于90%。⑶酪蛋白：應(yīng)符合生產(chǎn)所需的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。⑷標(biāo)記用酶應(yīng)在產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中明示所使用的標(biāo)記用酶的名稱(如辣根過(guò)氧化物酶、堿性磷酸酶等)，同時(shí)應(yīng)根據(jù)不同生產(chǎn)廠家的檢驗(yàn)方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢驗(yàn)，酶的純度 RZ（OD403nm/OD280nm)應(yīng)大于3。0。對(duì)于小牛血清或ft羊血清、牛血清白蛋白以及酪蛋白等，還應(yīng)進(jìn)行功能性實(shí)驗(yàn),即以其為原料配制一定濃度的稀釋液作為樣品,進(jìn)行測(cè)定,均不得出現(xiàn)非特異性反應(yīng)。生物輔料的供應(yīng)商同樣要求相對(duì)固定,不得隨意變更供應(yīng)商?；瘜W(xué)原輔料(2000年版.測(cè)指標(biāo)包括：溶液外觀、一般鹽類(lèi)、溶液pH..,的生產(chǎn)商必須提供該批次化學(xué)原材料的質(zhì)量保證材料和質(zhì)檢報(bào)告,其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)達(dá)到生產(chǎn)所.其他物料⑴基質(zhì)以硝酸纖維素膜為例:孔徑符合設(shè)計(jì)要求（0.45μm、0。22μm等、均一性（2％、尺寸（與標(biāo)識(shí)吻合）⑵試劑瓶和干燥劑由生產(chǎn)廠家提供質(zhì)量保證，達(dá)到規(guī)定要求。⑶其他:說(shuō)明書(shū)、包裝外盒等應(yīng)參照國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局頒布的《體外診斷試劑說(shuō)明書(shū)編寫(xiě)指導(dǎo)原則》和《醫(yī)療器械說(shuō)明書(shū)、標(biāo)簽和包裝標(biāo)識(shí)管理規(guī)定》建立相應(yīng)質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，如數(shù)量、規(guī)格等。三、試劑盒各組分的生產(chǎn)生物芯片主要包括DNA品基本可分成二個(gè)部分,一部分是芯片，另一部分檢測(cè)用工作液。如果有配套的檢測(cè)儀器，還需對(duì)儀器及處理軟件的應(yīng)用加以說(shuō)明。（一）芯片的生產(chǎn)芯片生產(chǎn)的基本過(guò)程包括探針的獲取方法，純化，點(diǎn)樣，固定.1．探針獲取相應(yīng)的技術(shù)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。（1）DNA探針的獲取探針的形式包括PCR產(chǎn)物、克隆DNA、人工合成DNA片段等；要求有生產(chǎn)程序和質(zhì)量指標(biāo)及檢測(cè)方法，要進(jìn)行純化，有固定的純化程序。(2)抗原的生產(chǎn)抗原獲得方法包括細(xì)胞培養(yǎng)、從生物材料中分離提取、基因工程表達(dá)以及合成肽等。基因工程表達(dá)產(chǎn)物又分為純抗原蛋白、融合蛋白等?？贵w抗體分單克隆抗體和多克隆抗體?？贵w制備包括細(xì)胞培養(yǎng)，動(dòng)物腹水，基因工程表達(dá)等方式.細(xì)胞和組織包括細(xì)胞或組織類(lèi)型，固定方法。組織材料包括固定，包埋，切片等。陣列的排列設(shè)計(jì),.點(diǎn)陣的制作使用儀器的需要確定型號(hào)，程序;手工制作的也應(yīng)有標(biāo)準(zhǔn)操作程序。.應(yīng)對(duì)芯片生產(chǎn)的過(guò)程進(jìn)行相應(yīng)的質(zhì)量控制,如點(diǎn)樣和固定過(guò)程的監(jiān)控、點(diǎn)樣均一性檢驗(yàn)等。（二）工作液配制芯片生產(chǎn)所需試劑，包括細(xì)胞培養(yǎng)基，探針制備試劑，陣列制作和固定試劑等。提取或RNA,PCR檢測(cè)蛋白的處理試劑包括取樣試劑，蛋白稀釋液以及特殊試劑等。/.（三）數(shù)據(jù)判讀判斷標(biāo)準(zhǔn)及依據(jù)，包括Cutoff值的確定依據(jù)。數(shù)據(jù)判讀方式：人工還是軟件判讀。如果是軟件判讀,應(yīng)提供軟件判斷的科學(xué)依據(jù)(實(shí)驗(yàn)是否成立的依據(jù)）以及實(shí)驗(yàn)測(cè)試的原始報(bào)告（或數(shù)據(jù)并需要說(shuō)明：⑴軟件的來(lái)源：購(gòu)買(mǎi)或自己編制，是否獲得注冊(cè)等。⑵軟件的用途：包括對(duì)數(shù)據(jù)的分析、存儲(chǔ)、解讀、含義等.⑶軟件的使用：基本的使用程序。四、半成品質(zhì)量控制（一)抽樣檢驗(yàn)人員按批號(hào)抽取檢驗(yàn)需要數(shù)量的半成品，作好標(biāo)記，待檢。（二）半成品檢驗(yàn)利用上一批檢驗(yàn)合格的試劑盒的相應(yīng)組分，對(duì)本批生產(chǎn)出的各種試劑盒組分分別進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果達(dá)到產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn).半成品檢驗(yàn)，一般使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）或經(jīng)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品）標(biāo)化后的企業(yè)參考品進(jìn)行。若某類(lèi)試劑沒(méi)有國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品（參考品備應(yīng)有規(guī)范的質(zhì)量控制程序,以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質(zhì)量可控，其質(zhì)量應(yīng)不低于國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準(zhǔn)的同類(lèi)產(chǎn)品的質(zhì)量。,/（最低檢出量精密性等，均應(yīng)達(dá)到相應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求.精密性用比最低檢測(cè)限高一個(gè)數(shù)量