ICS65.020.30B44中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T14926.51-2001實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫酶試驗(yàn)Laboratoryanimal-lmmunoenzymeassay(IEA)2001-08-29發(fā)布2002-05-01實(shí)施華中：民：共和發(fā)布國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局

GB/T14926.51-2001前本標(biāo)準(zhǔn)修訂了GB/T14926.18—1994實(shí)驗(yàn)動(dòng)物淋巴細(xì)胞脈絡(luò)叢腦膜炎病毒檢測(cè)方法》中的免疫酶試驗(yàn)方法，將其作為一個(gè)獨(dú)立標(biāo)準(zhǔn)列出。本標(biāo)準(zhǔn)由中華人民共和國(guó)科學(xué)技術(shù)部提出并歸口本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：賀爭(zhēng)鳴。

中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)免疫酶試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物GB/T14926.51-2001Laboratoryanimal-mmunoenzymeassay（IEA)1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了免疫酶試驗(yàn)(IEA)所用試劑、器材和操作步驃等。本標(biāo)準(zhǔn)適用于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒抗體的檢測(cè)2原理含有病毒抗原的細(xì)胞固定于玻片上.遇相應(yīng)抗體形成抗原抗體復(fù)合物。此抗原抗體復(fù)合物仍保持其抗原活性，可與相應(yīng)的第二抗體酶結(jié)合物結(jié)合，遇酶底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)。在普通顯微鏡下,根據(jù)顏色的反應(yīng)判定結(jié)果。主要試劑與器材3.1試劑3.1.1抗原片3.1.1.1抗原片的制備將病毒接種敏感細(xì)胞(表1).待細(xì)胞出現(xiàn)病變或確知細(xì)胞內(nèi)含有豐富的病毒抗原后,用酶消化分散細(xì)胞.PBS洗滌三次.最后用適量PBS懸浮細(xì)胞。將細(xì)胞懸液滴于玻片孔內(nèi)。同時(shí)消化不感染病毒的同批同種細(xì)胞.滴加同一玻片另一孔內(nèi).作為正常細(xì)胞對(duì)照?？變?nèi)滴加的細(xì)胞以細(xì)胞鋪開、不重疊為宜。室溫干燥后,冷丙酮(4C)固定10min。用蒸幅水漂洗后充分干燥,置于-20℃?zhèn)溆?3.1.1.2抗原片的鑒定每批抗原片在使用前,用相應(yīng)的陽(yáng)性血清和陰性血清進(jìn)行鑒定。鑒定方法可用IEA或免疫熒光試驗(yàn)。在陰性血清與正常細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞反應(yīng)無(wú)色；陽(yáng)性血清與正常細(xì)胞反應(yīng)無(wú)色，而與病毒感染細(xì)胞呈棕褐色，且陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)達(dá)30%～50%時(shí)，此批抗原片可以使用。3.1.2酶結(jié)合物抗小鼠、大鼠、地鼠、豚鼠、免、犬或猴1gG抗體辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物用于檢查相應(yīng)動(dòng)物的血清抗體。葡萄球菌蛋白ACSPA)辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物可代替抗小鼠、豚鼠、兔、犬和猴1eG抗體辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物使用。3.1.3陽(yáng)性血清用病毒抗原免疫清潔或SPF級(jí)小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠或普通級(jí)免、犬、猴所獲得的抗血清;或自然感染恢復(fù)后的大、猴血清。3.1.4陰性血清潔或SPF級(jí)小鼠、大鼠、豚鼠、地鼠血清;或確認(rèn)無(wú)相應(yīng)病毒感染的兔、犬、猴血清3.1.5PBS(O.01mol/L.pH7.