Contents.氨基酸的鑒別試驗2氨基酸藥物檢查3氨基酸含量測定4氨基酸及在醫(yī)藥中的應用1第一頁，共二十八頁。氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位，具有高度營養(yǎng)價值的蛋白質(zhì)補充劑，有著廣泛的生化作用和臨床療效，可治療蛋白質(zhì)代謝紊亂、蛋白質(zhì)缺損所引起的一系列疾病的重要生化藥物。第二頁，共二十八頁。一：氨基酸

的結(jié)構(gòu)與物化性質(zhì)1.結(jié)構(gòu)

氨基酸（aminoacid）：是含有一個堿性氨基和一個酸性羧基的有機化合物，氨基一般連在α-碳上。是生物功能大分子蛋白質(zhì)的基本組成單位。氨基酸（aminoacid）——蛋白質(zhì)的基本結(jié)構(gòu)單元第三頁，共二十八頁。2.物理性質(zhì)晶型α氨基酸為白色晶體，不同氨基酸其晶體形狀不相同。熔點氨基酸熔點一般在200—300°C,而且多在溶解時分解。溶解度均溶于水，但水中溶解度差別大，能溶解于強酸強堿，不溶于非極性溶劑。旋光性除Gly外，所有的天然氨基酸都有旋光性。構(gòu)成蛋白質(zhì)的20種氨基酸在可見光區(qū)都沒有光吸收，在紅外區(qū)和遠紫外區(qū)（λ＜200nm）都有光吸收.第四頁，共二十八頁。3.化學性質(zhì)－氨基參加的反應－羥基參加的反應－氨基&－羧基

化學性質(zhì)第五頁，共二十八頁。（1）－氨基參加的反應與亞硝酸反應

VanSlyke（范斯來克）法測定氨基酸的基礎。與?；噭┓磻；噭┰诙嚯暮偷鞍踪|(zhì)的人工合成中被用作氨基的保護試劑。烴基化反應氨基酸氨基中的第一個H原子可被-OH取代，如與2，4－二硝基氟苯的反應。形成席夫堿反應氨基酸的-氨基能與醛類化合物反應生成弱堿，即席夫堿。脫氨基反應經(jīng)氨基酸氧化酶催化即脫去-氨基而轉(zhuǎn)化為酮酸。第六頁，共二十八頁。（2）－羧基參加的反應成鹽和成酯反應在特定的化學反應中保護羧基，活化氨基。氨基酸酯是制備氨基酸的酰胺或酰肼的中間物成酰氯反應可使氨基酸的羧基活化，使它容易與另一氨基酸的氨基結(jié)合，用于多肽人工合成。脫羧基反應

第七頁，共二十八頁。（3）－氨基&－羧基共同參加的反應茚三酮反應

茚三酮在酸性溶液中與α-氨基酸共熱，引起氨基酸氧化脫氫、脫羧反應，最后生成紫色物質(zhì)。成肽反應

一個氨基酸的氨基和另一個氨基酸的羧基縮合成肽，形成肽鍵。第八頁，共二十八頁。鑒別試驗旋光性薄層色譜法（TLC）紅外吸收光譜法（IR）紫外分光光度法（UV）茚三酮反應...氨基酸的鑒別試驗第九頁，共二十八頁。旋光度不同氨基酸比旋度不同旋光儀第十頁，共二十八頁。薄層層析色譜法第十一頁，共二十八頁。紫外分光光度法（UV）

在20種天然氨基酸中，只有酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸在紫外區(qū)有最大吸收。酪氨酸的max＝275nm275=1.4x103苯丙氨酸的max＝257nm257=2.0x102色氨酸的max＝280nm280=5.6x103第十二頁，共二十八頁。1：酪氨酸2：色氨酸3：苯丙氨酸。紫外分光光度法（UV）這三種氨基酸可以通過紫外吸收光譜加以鑒別。精密稱取酪氨酸、色氨酸、苯丙氫酸各適量。用水制成每1mL含20μg（色氨酸）、40μg（酪氨酸）、200μg（苯丙氨酸）。在波長230～300nm測定各氨基酸的吸收光譜，如右圖。第十三頁，共二十八頁。紅外吸收光譜法（IR）

氨基酸在紅外區(qū)都有特性圖譜，可以通過與標準氨基酸圖譜比較作為氨基酸的鑒別依據(jù)。第十四頁，共二十八頁。紅外吸收光譜法（IR）用紅外分光光度法進行氨基酸鑒別時，除另有規(guī)定外，通常固體供試品均采用溴化鉀片法，在400～667cm-1范圍內(nèi)測定其吸收圖譜。所得的吸收圖譜各主要吸收峰波長和各吸收峰間的相互強度關(guān)系均應與對照的圖譜一致。第十五頁，共二十八頁。茚三酮反應當茚三酮在酸性條件下和氨基酸反應時，氨基酸被氧化分解生成醛，放出氨和二氧化碳，水合茚三酮則成還原型水合茚三酮。然后還原型茚三酮與氨，另一分子茚三酮進一步縮合生成藍紫色物，最大吸收值的波長為570nm。第十六頁，共二十八頁。氨基酸檢查：根據(jù)《中國藥典》有關(guān)物質(zhì)測定利用紫外—可見光度法測定氨基酸純度。第十七頁，共二十八頁。氨基酸含量測定方法含量測定ACEDB非水溶液滴定法酸堿滴定法其他方法定氮法碘量法或溴量法第十八頁，共二十八頁。酸堿滴定法谷氨酸、天冬氨酸等氨基酸，其分子結(jié)構(gòu)中均有羧基，故對其原料藥一般采用氫氧化鈉滴定液滴定。賴氨酸分子結(jié)構(gòu)有氨基，故可以用酸堿滴定。

天冬氨酸 AspCOOHCHNH2

CH2COHOCOOHCHNH2

谷氨酸 GluCH2COHOCH2(CH2)4

賴氨酸 LysCOOHCHNH2H2N第十九頁，共二十八頁。非水溶液滴定法中國藥典、美國藥典和英國藥典對所收載氨基酸類藥物，除谷氨酸用氫氧化鈉為標準溶液的酸堿滴定法，其余均根據(jù)其結(jié)構(gòu)特性，采用了非水酸堿滴定法。用冰醋酸作溶劑，高氯酸作標準溶液滴定，電位法或指示劑法確定終點。適用于常量氨基酸的含量測定。第二十頁，共二十八頁。非水溶液滴定法【例】電位滴定法測定酪氨酸的含量P148

電位滴定法是在滴定過程中通過測量電位變化以確定滴定終點的方法。

優(yōu)點：1、不需要準確的測量電極電位值

2、其準確度優(yōu)于直接電位法電位滴定法是靠電極第二十一頁，共二十八頁。非水溶液滴定法滴定方法：

★將盛有供試品溶液的燒杯置電磁攪拌器上，侵入電極，攪拌，并自滴定管中分次滴加滴定液。

★開始時可每次加入較多量，攪拌，記錄電位；至將近終點前，則應每次加入少量，攪拌，記錄電位；至突躍點已過，仍應繼續(xù)滴加幾次滴定液，并記錄電位。

★然后用坐標紙以點位（E）為縱坐標，以滴定液體積（V）為橫坐標，繪制E-V曲線，以此曲線的陡然上升或下降部分的中心為滴定終點第二十二頁，共二十八頁。非水溶液滴定法計算式：P%=FT(V-V0)/S×100%

P%:酪氨酸的百分含量；

F:高氯酸的滴定液的濃度正因子；

T:高氯酸滴定液（0.1mol/L）對酪氨酸的 滴定度，18.12；

S:酪氨酸樣品質(zhì)量；

V:供試品消耗的高氯酸滴定液的體積；

V0：空白消耗的高氯酸滴定液體積；每1mL的高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當18.12mg的無水酪氨酸第二十三頁，共二十八頁。定氮法——基本原理1.有機物中的胺根在強熱和CuSO4，濃H2SO4

作用下，硝化生成（NH4)2SO42NH2+H2SO4+2H=(NH4)2SO4（其中CuSO4做催化劑）2.在凱氏定氮器中與堿作用，通過蒸餾釋放出NH3

，收集于H3BO3

溶液中(NH4)2SO4+2NaOH=2NH3+2H2O+Na2SO42NH3+4H3BO3=(NH4)2B4O7+5H2O第二十四頁，共二十八頁。定氮法——基本原理3.用已知濃度的H2SO4（或HCI）標準溶液滴定，根據(jù)HCI消耗的量計算出氮的含量，然后乘以相應的換算因子，既得蛋白質(zhì)的含量(NH4)2B4O7+H2SO4+5H2O=(NH4)2SO4+4H3BO3(NH4)2B4O7+2HCl+5H2O=2NH4Cl+4H3BO3第二十五頁，共二十八頁。定氮法中國藥典：每1mL硫酸滴定液（0.05mol/L）相當于6.606mg天冬氨酰第二十六頁，共二十八頁。碘量法或溴量法鹽酸半胱氨酸因其分子結(jié)構(gòu)中含有—SH，可用碘量法測定每1mL碘滴定液相當于15.7