骨髓細(xì)胞學(xué)檢查第1頁/共38頁實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)一步學(xué)習(xí)骨髓細(xì)胞學(xué)檢查的方法。熟悉常用的細(xì)胞化學(xué)染色方法及意義。掌握常見血液疾病的骨髓象特點(diǎn)。第2頁/共38頁實(shí)驗(yàn)內(nèi)容常用的細(xì)胞化學(xué)染色貧血骨髓象急性白血病骨髓象慢性白血病骨髓象第3頁/共38頁1.常用的細(xì)胞化學(xué)染色

Generalcyto-chemicalstain過氧化物酶染色(POX)特異性酯酶染色(SE)非特異性酯酶染色(NSE)中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色(NAP)酸性磷酸酶染色(ACP)過碘酸-雪夫反應(yīng)(PAS)，糖原染色鐵染色(Ironstain)將形態(tài)學(xué)與化學(xué)或生物化學(xué)相結(jié)合的技術(shù)。利用具有較高特異性的化學(xué)反應(yīng)對血細(xì)胞內(nèi)的各種化學(xué)成分、代謝產(chǎn)物等在細(xì)胞原位作定性及半定量檢測。對血細(xì)胞類型鑒別，血液病的診斷和鑒別診斷有意義。第4頁/共38頁過氧化物酶染色(POX)

Peroxidasestain原理血細(xì)胞中的POX能分解試劑中的底物H2O2，釋出新生態(tài)氧，使聯(lián)苯胺氧化為聯(lián)苯胺藍(lán)，后者與亞硝基鐵氰化鈉結(jié)合形成暗藍(lán)色的顆粒，定位于細(xì)胞漿中。POX存在于粒系細(xì)胞中，在晚期原粒細(xì)胞至成熟中性粒細(xì)胞以及各階段嗜酸性粒細(xì)胞均呈陽性反應(yīng)，細(xì)胞越成熟，反應(yīng)越強(qiáng)。嗜堿性粒細(xì)胞呈陰性反應(yīng)。單核系細(xì)胞自幼單核細(xì)胞起，呈弱陽性反應(yīng)。淋巴細(xì)胞系任何階段均呈陰性反應(yīng)。臨床意義用于急性白血病的鑒別診斷。急粒時(shí)，強(qiáng)陽性反應(yīng)。急單時(shí)，弱陽性或陰性反應(yīng)。急淋時(shí)，陰性反應(yīng)。對急粒與急淋的鑒別最有價(jià)值。第5頁/共38頁第6頁/共38頁特異性酯酶染色(SE)

Specificesterasestain原理又稱粒細(xì)胞酯酶(粒細(xì)胞特異酶)，它能將基質(zhì)液中的氯醋酸萘酚AS-D水解，產(chǎn)生萘酚AS-D，后者與重氮鹽偶聯(lián)生成有色沉淀，定位于細(xì)胞漿中。晚期的原粒細(xì)胞呈弱陽性反應(yīng)，早幼粒細(xì)胞呈強(qiáng)陽性反應(yīng)，此后隨細(xì)胞發(fā)育成熟而酶活性逐漸減弱。嗜酸性粒細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞一般呈陰性反應(yīng)。臨床意義用于急性白血病的鑒別診斷。急粒時(shí)，多呈強(qiáng)陽性反應(yīng)。急單時(shí)，一般陰性反應(yīng)。急淋時(shí)，均呈陰性反應(yīng)。對急粒和急單/急淋的鑒別有價(jià)值。第7頁/共38頁SE染色第8頁/共38頁非特異性酯酶染色(NSE)

Nonspecificesterasestain原理NSE能將基質(zhì)液中的α-醋酸萘酚水解，產(chǎn)生萘酚，萘酚再與重氮染料偶聯(lián)生成不溶性的有色沉淀。NSE是單核細(xì)胞的標(biāo)記酶。單核系細(xì)胞一般呈強(qiáng)陽性反應(yīng)。粒系細(xì)胞一般為陰性或弱陽性反應(yīng)。淋巴系細(xì)胞一般呈陰性反應(yīng)。臨床意義急單時(shí)，染色呈強(qiáng)陽性，但酶活性能被氟化鈉抑制。急粒時(shí)，呈陰性或弱陽性反應(yīng)，但酶活性不被氟化鈉抑制。主要用于鑒別急單與急粒。第9頁/共38頁第10頁/共38頁其他中性粒細(xì)胞堿性磷酸酶染色(NAP)類白血病和慢粒反應(yīng)的鑒別再障和PNH的鑒別?；撔愿腥竞筒《拘愿腥镜蔫b別。酸性磷酸酶染色(ACP)毛細(xì)胞白血病的診斷。Gaucher細(xì)胞與Niemann-Pick的鑒別。過碘酸-雪夫反應(yīng)(PAS)，糖原染色良性和惡性淋巴細(xì)胞增生性疾病的鑒別。紅白血病的診斷和鑒別幼稚紅細(xì)胞增生的性質(zhì)。鐵染色(Ironstain)確證或排除缺鐵性貧血診斷鐵粒幼細(xì)胞性貧血第11頁/共38頁第12頁/共38頁2.貧血

AnemiaIrondeficiencyanemia：因體內(nèi)貯存鐵缺乏使血紅蛋白合成不足，主要特征是紅細(xì)胞呈小細(xì)胞低色素性改變。Megaloblasticanemia：由于維生素B12和或葉酸缺乏致使DNA合成障礙，特征是出現(xiàn)巨幼紅細(xì)胞，其他系統(tǒng)的血細(xì)胞也有改變。Hemolyticanemia：由于各種原因使紅細(xì)胞壽命縮短，破壞增加，超過骨髓造血能力所引起的一組貧血，特征是紅細(xì)胞系明顯的代償性增生。Aplasticanemia：由多種病因引起的骨髓造血功能衰竭，出現(xiàn)全血細(xì)胞減少的一組綜合病癥。第13頁/共38頁Irondeficiencyanemia(IDA)增生明顯活躍。粒紅比值減低。紅細(xì)胞系明顯增生，幼稚紅細(xì)胞百分比常>30%，以中、晚幼紅細(xì)胞為主。幼紅細(xì)胞體積小，邊緣不規(guī)整，胞核小而致密，胞漿量少，因血紅蛋白合成不足而著色偏堿。成熟紅細(xì)胞體積小，中心淡染區(qū)擴(kuò)大，嚴(yán)重時(shí)可呈環(huán)狀紅細(xì)胞。易見嗜多色性紅細(xì)胞。粒細(xì)胞系相對減少，但各階段比例及細(xì)胞形態(tài)大致正常。巨核細(xì)胞系正常。第14頁/共38頁Megaloblasticanemia增生明顯活躍。粒紅比值明顯減低。紅系明顯增生，幼紅細(xì)胞百分比常>40%，以早及中幼紅細(xì)胞為主。出現(xiàn)各階段巨幼紅細(xì)胞，巨幼紅細(xì)胞與相應(yīng)階段的正常紅細(xì)胞相比，胞體及胞核均增大，核染色質(zhì)纖細(xì)、疏松，著色淺淡。胞漿量豐富，呈核漿發(fā)育不平衡，細(xì)胞核的發(fā)育落后于胞漿。成熟紅細(xì)胞明顯大小不均，呈高色素性。易見巨紅細(xì)胞、異形紅細(xì)胞、Howell-Jolly小體及點(diǎn)彩紅細(xì)胞等。粒細(xì)胞系相對減少，可見各階段巨粒細(xì)胞，以晚幼粒、桿狀核細(xì)胞最多見，其特點(diǎn)是胞體增大，胞核腫脹，核染色質(zhì)疏松。成熟粒細(xì)胞有核分葉過多現(xiàn)象。巨核細(xì)胞數(shù)目大致正常，但亦可見巨型變，部分巨核細(xì)胞呈分葉狀。第15頁/共38頁Hemolyticanemia增生明顯活躍。粒紅比值明顯減低或倒置。紅細(xì)胞系顯著增生，幼紅細(xì)胞百分比常>50%，以中幼紅細(xì)胞為主，其他階段的幼紅細(xì)胞亦相應(yīng)增多，易見核分裂象。成熟紅細(xì)胞中易見大紅細(xì)胞、嗜多色性紅細(xì)胞及Howell-Jolly小體。粒細(xì)胞系相對減少，各階段比例及細(xì)胞形態(tài)大致正常。巨核細(xì)胞系一般正常。第16頁/共38頁Aplasticanemia(AA)急性型增生減低或重度減低粒紅兩系細(xì)胞均明顯減少，淋巴細(xì)胞相對增多，可達(dá)80%以上。粒細(xì)胞中以成熟粒細(xì)胞最多見，細(xì)胞形態(tài)大致正常。紅細(xì)胞系中以晚幼紅細(xì)胞最多見，成熟紅細(xì)胞形態(tài)無明顯異常。巨核細(xì)胞系明顯減少，除個(gè)別病例外多不見巨核細(xì)胞。漿細(xì)胞、組織嗜堿細(xì)胞、網(wǎng)狀細(xì)胞等非造血細(xì)胞增多。慢性型骨髓增生程度不一，多為增生減低。粒紅兩系細(xì)胞均減少，淋巴細(xì)胞相對增多。細(xì)胞形態(tài)無明顯異常。巨核細(xì)胞明顯減少或缺如。漿細(xì)胞、組織嗜堿細(xì)胞及網(wǎng)狀細(xì)胞等非造血細(xì)胞增多，但比急性型為少。如果穿刺部位為代償性造血灶，則可為增生活躍甚至明顯活躍。此時(shí)粒細(xì)胞百分率可能正常或減低，幼紅細(xì)胞百分率常增高，但有細(xì)胞成熟受阻現(xiàn)象，表現(xiàn)為晚幼紅細(xì)胞比例增多，且胞核固縮呈碳核樣，漿細(xì)胞及網(wǎng)狀細(xì)胞亦增多，但巨核細(xì)胞明顯減少或缺如。第17頁/共38頁AA第18頁/共38頁3.急性白血病

AcuteleukemiaALLL1L2L3ANLL/AMLM0M1M2(M2a;M2b)M3(M3a;M3b)M4(M4a;M4b;M4c;M4EO)M5(M5a;M5b)M6M7第19頁/共38頁Acutelymphocyticleukemia,ALL有核細(xì)胞增生極度活躍或明顯活躍。以原始和幼稚淋巴細(xì)胞為主，>30%(NEC)，可高達(dá)50~90%，伴有形態(tài)異常。成熟淋巴細(xì)胞較少見。(NEC，non-erythroidcount,即非紅細(xì)胞計(jì)數(shù)，指除去幼紅細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞外的有核細(xì)胞百分比)粒細(xì)胞系統(tǒng)增生受抑制，粒細(xì)胞減少，甚至少見。紅細(xì)胞系統(tǒng)增生也受抑制，幼紅細(xì)胞少見或不見。巨核細(xì)胞系多數(shù)顯著減少或不見，血小板減少。退化細(xì)胞明顯增多，藍(lán)細(xì)胞（涂抹細(xì)胞）多見，這是急淋的特征之一。第20頁/共38頁ALL(L1,L2,L3)第21頁/共38頁ALL(L1,L2,L3)第22頁/共38頁Acutenon-lymphocyticleukemia,ANLL骨髓增生明顯活躍或極度活躍?？梢娔骋幌祷蚨嘞翟己陀字杉?xì)胞增生。原始細(xì)胞>30%(NEC)。細(xì)胞成熟障礙：裂孔現(xiàn)象，大量原始細(xì)胞伴少量成熟細(xì)胞。細(xì)胞形態(tài)畸形：細(xì)胞大小、外形和核漿細(xì)胞分裂異常骨髓中其他系細(xì)胞受抑制第23頁/共38頁急性原粒細(xì)胞白血病未分化型

ANLL-M1骨髓增生極度活躍或明顯活躍，少數(shù)病例增生活躍甚至減低。原始細(xì)胞≥90%(NEC)。早幼粒細(xì)胞很少，中幼粒細(xì)胞及以下各階段細(xì)胞罕見或不見。在少數(shù)病例白血病細(xì)胞內(nèi)可見Auer小體，核分裂細(xì)胞較多見。多數(shù)病例幼紅細(xì)胞及巨核細(xì)胞明顯減少，淋巴細(xì)胞也減少。第24頁/共38頁奧爾(Auer)氏體是含于胞漿內(nèi)的一種被染成紅色的棍棒狀小體。一般認(rèn)為它是嗜天青顆粒融合而成，過氧化物酶和PAS反應(yīng)都呈陽性。正常細(xì)胞中見不到，多見于急性白血病時(shí)原始、早幼粒細(xì)胞和幼稚單核細(xì)胞胞漿中，但決不會出現(xiàn)于淋巴和紅細(xì)胞中，故對白血病的鑒別有一定價(jià)值。第25頁/共38頁急性原粒細(xì)胞白血病部分分化型

ANLL-M2a骨髓增生極度活躍或明顯活躍.原始細(xì)胞占30~89%(NEC)，并可見到早幼粒細(xì)胞、中幼粒細(xì)胞和成熟粒細(xì)胞>10%，約50%病例白血病細(xì)胞內(nèi)可見Auer小體，核分裂細(xì)胞較多見。幼紅細(xì)胞及巨核細(xì)胞明顯減少，淋巴細(xì)胞也減少。特征：是形態(tài)變異及核質(zhì)發(fā)育不平衡，表現(xiàn)為細(xì)胞大小異常，形態(tài)多變，胞體畸形有瘤狀突起，核形畸變，如凹陷、折疊、扭曲、腎形、分葉等，也可表現(xiàn)為核發(fā)育遲緩，胞質(zhì)出現(xiàn)少數(shù)嗜苯胺藍(lán)顆粒。第26頁/共38頁ANLL-M2b骨髓增生明顯活躍或增生活躍。紅細(xì)胞系及巨核細(xì)胞系增生均減低。粒細(xì)胞系增生明顯活躍，原始粒細(xì)胞及早幼粒細(xì)胞明顯增多，以異常中性中幼粒細(xì)胞為主，≥30%(NEC)。異常中性中幼粒細(xì)胞：形態(tài)明顯異常，核漿發(fā)育顯著不平衡，核染色質(zhì)細(xì)致、疏松，有1～2個(gè)大而清楚的核仁，與原粒細(xì)胞的核結(jié)構(gòu)相似，但胞漿中已有較多細(xì)小而分布較密集的特異性中性粒細(xì)胞，胞體較大，核可不規(guī)則，胞漿豐富，易見空泡。第27頁/共38頁急性顆粒增多的早幼粒細(xì)胞白血病

ANLL-M3多數(shù)病例增生明顯或極度活躍，個(gè)別病例增生低下。分類以顆粒增多的異常早幼粒細(xì)胞為主，>30％，其胞核大小不一，胞漿中有大小不等的異常顆粒，部分病例早幼粒細(xì)胞胞漿中有Auer小體，有的病例一個(gè)細(xì)胞可有數(shù)至數(shù)十根，呈柴捆樣排列，稱為“柴捆細(xì)胞”。根據(jù)胞漿中顆粒的大小又將M3型分為兩種亞型。M3a（粗顆粒型）：胞漿中嗜苯胺藍(lán)顆粒顆粒粗大，密集或融合，染深紫紅色，可掩蓋核周圍甚至整個(gè)細(xì)胞。M3b（細(xì)顆粒型）：胞漿中嗜苯胺藍(lán)顆粒密集而細(xì)小，核扭曲、折疊或分葉，易與急單白血病混淆。第28頁/共38頁ANLL-M3a/M3b第29頁/共38頁ANLL-M3第30頁/共38頁急性粒-單核細(xì)胞白血病

ANLL-M4骨髓增生極度活躍或明顯活躍。粒、單核兩系同時(shí)增生。紅系、巨核系受抑制。根據(jù)其粒系和單核細(xì)胞系形態(tài)不同，將其分為四個(gè)亞型。M4a:原始和早幼粒細(xì)胞增生為主，原、幼單核細(xì)胞>20％(NEC)。M4b:原、幼及單核細(xì)胞增生為主，原始和早幼粒細(xì)胞>20％(NEc)。M4c:原始細(xì)胞既具有粒細(xì)胞系，又具有單核細(xì)胞系形態(tài)特征，>30％(NEC)。M4E0:除上述特點(diǎn)外，異常嗜酸粒細(xì)胞大于5%(NEC)，其嗜酸性顆粒粗大而圓，常伴粗大而多的嗜堿性顆粒。第31頁/共38頁ANLL-M4第32頁/共38頁急性單核細(xì)胞白血病

ANLL-M5骨髓增生極度活躍或明顯活躍。原單加幼單細(xì)胞≥30%。有兩種亞型。M5a（未分化型）以原單為主，≥80％(NEC)，幼單細(xì)胞較少。M5b（部分分化型）原單、幼單及單核細(xì)胞均可見到。骨髓中原始和幼稚單核細(xì)胞>30%(NEC)，原單核細(xì)胞<80％(NSE)。細(xì)胞形態(tài)特點(diǎn)：①原單及幼單細(xì)胞體積較大，形態(tài)變化多端。②胞核較小，常偏一側(cè)，呈馬蹄形、S形、筆架形、腎形或不規(guī)則形，核染色質(zhì)疏松，排列似蜂窩狀，著色較淡。③胞漿量相對較多，有明顯偽足突出，邊緣清晰，胞漿內(nèi)可出現(xiàn)Auer小體，較細(xì)長。第33頁/共38頁ANLL-M5第34頁/共38頁急性紅白血病

ANLL-M6骨髓有