第六章色譜質(zhì)譜技術

的其他常見應用2016.05.03《臨床色譜質(zhì)譜檢驗技術》復習《臨床色譜質(zhì)譜檢驗技術》主要內(nèi)容質(zhì)譜技術在臨床實驗室中的應用（二）小結與思考《臨床色譜質(zhì)譜檢驗技術》復習ICP-MS的技術特點？ICP-MS檢測全血Pb中，加入硝酸和曲拉通的作用？

復習復習ICP-MS的技術特點分析元素覆蓋面廣（可達73元素），分析速度快檢出限低（多數(shù)元素檢出限為ppb-ppt級）線性范圍寬（可達9個數(shù)量級）譜圖干擾少（原子量相差1可以分離）能進行同位素分析多種進樣技術聯(lián)用血液樣品的特點：黏度大基體復雜含較多細小顆粒物蛋白質(zhì)容易沉降檢測過程易出現(xiàn)的問題：容易漂移樣品不均勻易堵（霧化器）穩(wěn)定性較差復習解決辦法：選擇合適的酸度和曲拉通濃度稀釋樣品：酸度（破壞紅細胞）：過小，紅細胞破壞不完全；有些元素的等離子體行為受影響；過大，造成蛋白質(zhì)沉降；曲拉通（防止樣品沉降）：濃度過小，不能有效地防止沉降；過大，溶液黏度大，容易起泡，造成精密度差。復習《臨床色譜質(zhì)譜檢驗技術》質(zhì)譜技術在臨床實驗室中的應用（二）回顧什么是質(zhì)譜分析？質(zhì)譜分類有哪些？色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀的組成？

質(zhì)譜分析：是分離和檢測帶電物質(zhì)的質(zhì)量差異的一類分析方法；質(zhì)譜儀：本質(zhì)上是測量離子質(zhì)荷比的分析儀器，是將被測物質(zhì)離子化后，按照離子的質(zhì)荷比分離，測量各種離子峰的強度而實現(xiàn)分析的儀器；38542dimepennynickelquarterhalf$Value(m/z)Quantity(Abundance)MS回顧質(zhì)譜同位素質(zhì)譜無機質(zhì)譜有機質(zhì)譜生物質(zhì)譜回顧回顧

其中質(zhì)譜技術（除聯(lián)用技術外）在臨床實驗中主要有以下的應用：電感耦合等離子體質(zhì)譜技術（ICP-MS）應用于元素分析三重四級桿技術應用于遺傳代謝性疾病檢測基質(zhì)輔助激光解析-飛行時間質(zhì)譜技術應用于微生物鑒定

質(zhì)譜技術在臨床實驗室中的應用質(zhì)譜技術在臨床實驗室中的應用樣品處理方法建立色譜方法建立信息及文獻檢索質(zhì)譜方法建立樣品采集樣品制備數(shù)據(jù)處理分析測定信息及文獻檢索遺傳代謝病又稱先天性代謝異常(inheritedmetabolicdiseases，IMD)，是指有異常生化代謝標志物的一大類疾?。灰蚧蛲蛔兪购铣傻拿?、受體、載體等蛋白功能缺陷，導致體內(nèi)生化物質(zhì)在合成、代謝、轉(zhuǎn)運和儲存等方面出現(xiàn)各種異常，包括氨基酸、有機酸、碳水化合物、脂肪蘇、內(nèi)分泌激素、核酸、金屬元素等代謝紊亂，也包括有些代謝物在溶酶體、線粒體、過氧化物酶體等細胞器內(nèi)積聚、貯積異常，產(chǎn)生一系列臨床癥狀的一大類疾??；屬于單基因遺傳病的一部分，絕大多數(shù)屬常染色體隱性遺傳，少數(shù)為常染色體顯性遺傳、X連鎖伴性遺傳，或者線粒體遺傳；遺傳代謝病病種繁多，常見500-600種，總數(shù)可能達數(shù)千余種；單病發(fā)病率低，但總體發(fā)病率較高，有報道患病率在0.5%以上。信息及文獻檢索遺傳代謝病發(fā)病機制：信息及文獻檢索基因檢測酶活性測定質(zhì)譜檢測臨床診斷基因突變蛋白質(zhì)改變代謝異常臨床表現(xiàn)信息及文獻檢索信息及文獻檢索治療原則降低體內(nèi)前體物質(zhì)的水平，減輕前提物質(zhì)及其旁路代謝產(chǎn)物對機體的損傷增加產(chǎn)物，糾正因產(chǎn)物水平下降對機體的損傷信息及文獻檢索臨床患兒懷疑氨基酸、有機酸、脂肪酸氧化代謝病懷疑溶酶體貯積、糖原累積等大分子病質(zhì)譜檢測（血氨基酸、?；鈮A，尿有機酸檢測）酶活性檢測基因檢測（Sanger、NGS、aCGH測患兒及其父母）信息及文獻檢索新生兒喂奶三次后采血酶活性檢測串聯(lián)質(zhì)譜檢測（血氨基酸、?；鈮A檢測）氣相色譜質(zhì)譜檢測（尿液有機酸檢測基因檢測（Sanger、NGS、aCGH測患兒及其父母）懷疑新生兒分析測定方法液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）血氨基酸和?；鈮A：一滴血一次實驗檢測數(shù)十種氨基酸、?；鈮A，檢測指標100余項；結合每種疾病的發(fā)病特點，將檢測指標的濃度與疾病相關聯(lián)，綜合判斷40余種遺傳代謝?。òò被岽x病、有機酸血癥、脂肪酸氧化缺陷?。庀嗌V質(zhì)譜（GC-MS）尿液有機酸：一次性檢測130余項有機酸指標，可輔助診斷40余種遺傳代謝?。ㄖ饕獮橛袡C酸血癥，也包括氨基酸代謝病及脂肪酸氧化缺陷病）分析測定方法衍生化前處理方法：樣品處理過程中加入鹽酸正丁醇，引入丁基；氨基酸和?；鈮A經(jīng)衍生化，形成相應的丁酯，屏蔽酸性基團；酯化作用可減少潛在的溶劑或其他物質(zhì)干擾，提高離子化效率。檢測準備打孔添加內(nèi)標離心氮氣吹干衍生化氮氣吹干復溶分析測定方法非衍生化前處理方法：無需使用鹽酸正丁醇，使用甲醇萃取后可直接進樣；節(jié)省預處理時間；二羧酸酰基肉堿（如C5DC）存在兩個負電荷位置，離子化效率受影響。檢測準備打孔添加內(nèi)標轉(zhuǎn)移待測分析測定方法三重四級桿掃描模式：質(zhì)譜掃描模式氨基酸檢測（以衍生化前處理分析為例）：大多數(shù)氨基酸經(jīng)衍生化反應后均能形成丁基甲酸（m/z102），因此可采用中性丟失掃描模式進行質(zhì)譜檢測；某些氨基酸如精氨酸、鳥氨酸、瓜氨酸、甘氨酸等，經(jīng)碰撞后產(chǎn)生的中性分子較少，故采用多反應監(jiān)測模式（MRM）氨基酸丁酯質(zhì)譜掃描模式肉堿和?；鈮A檢測（以衍生化前處理分析為例）：肉堿和酰基肉堿經(jīng)碰撞誘導裂解后產(chǎn)生具有共同結構的子離子（m/z85）；因有相同的子離子，采用母離子掃描三重四級桿技術應用于遺傳代謝性疾病檢測總離子流色譜圖（TIC）優(yōu)化色譜條件：平臺期至少10個掃描點，且峰形穩(wěn)定;優(yōu)化質(zhì)譜條件：TIC響應穩(wěn)定三重四級桿技術應用于遺傳代謝性疾病檢測二級質(zhì)譜圖分析Ala:m/z146.3Leu:m/z188.2Phe:m/z222.2C2:m/z260.6Gly:m/z132.1/76.1三重四級桿技術應用于遺傳代謝性疾病檢測三重四級桿技術應用于遺傳代謝性疾病檢測三重四級桿技術應用于遺傳代謝性疾病檢測三重四級桿技術應用于遺傳代謝性疾病檢測1、針刺采血部位＜２.0mm2、熱敷采血

部位3-5分鐘3、消毒并拭

干采血部位4、針刺采血，

拭去第一滴血5、單面輕壓濾紙取血浸透點樣環(huán)6、按采樣單

要求連續(xù)取血標本類型：干血斑濾紙片說明：新生兒以外的對象可以是手指末梢血、靜脈血制成的濾紙干血片標本樣品制備三重四級桿技術應用于遺傳代謝性疾病檢測檢測信息豐富：一次實驗同時檢測100余項指標和比值，可反映40余種遺傳代謝病信息高通量：約500例標本/天高特異性：針對疾病的特征指標進行分析，減少假陽性高靈敏度：肉堿含量費用相對低廉人員要求：儀器復雜，須經(jīng)專