PAGE20PAGE21實(shí)驗(yàn)一細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察與顯微測(cè)量（必做）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?．熟悉動(dòng)物細(xì)胞、植物細(xì)胞的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)2．掌握臨時(shí)裝片的制作方法3．掌握顯微測(cè)量的原理和方法4．掌握生物繪圖的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理：細(xì)胞是生物體結(jié)構(gòu)功能的基本單位，其形態(tài)與功能相適應(yīng)。不同類型的細(xì)胞具有不同的大小、形態(tài)和結(jié)構(gòu)，以適應(yīng)其功能。通過制作臨時(shí)裝片，可以觀察很多細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，并借助測(cè)微尺測(cè)量細(xì)胞直徑，進(jìn)而獲得細(xì)胞的體積。三、實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及材料：儀器：光學(xué)顯微鏡（每人1臺(tái)），載玻片、蓋玻片、剪刀、鑷子、牙簽、滴管測(cè)微尺（鏡臺(tái)測(cè)微尺；目鏡測(cè)微尺）試劑：1%碘液、瑞氏染液（如果觀察血細(xì)胞，則需瑞氏染液）材料：洋蔥、紅辣椒、紫色落葵（或紫羅蘭）、血細(xì)胞懸液、口腔上皮細(xì)胞四、實(shí)驗(yàn)步驟：1．洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞的觀察在載玻片中央滴一滴1%碘液用剪刀在洋蔥鱗莖葉內(nèi)表面畫一個(gè)1mm2的方框用鑷子撕下表皮在碘液中鋪平蓋上蓋玻片用吸水紙吸去多余碘液（也可幫助排除氣泡）顯微鏡下觀察（同法制紅辣椒表皮細(xì)胞裝片）2．人口腔黏膜上皮細(xì)胞的觀察在載玻片中央滴一滴1%碘液用牙簽刮取上皮細(xì)胞在1%碘液中攪動(dòng)分散細(xì)胞染色1分鐘蓋上蓋玻片觀察3．血細(xì)胞觀察（見《細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》第9頁）在載玻片右端滴一滴血用另一張載玻片以30~45度角（兩玻片夾角）推移血液成均勻薄膜滴一滴瑞氏染液染色1～3分鐘自來水沖洗染液，吸水紙吸干鏡檢4．顯微測(cè)量（1）原理：測(cè)微尺由目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺組成，目鏡測(cè)微尺位于目鏡內(nèi)，為玻璃圓片，上有一條帶刻度的直線，精確度較鏡臺(tái)測(cè)微尺的低；鏡臺(tái)測(cè)微尺是一塊載玻片，中央圓形區(qū)域內(nèi)有一帶刻度的直線，精確度較目鏡測(cè)微尺高。（2）測(cè)量：用目鏡測(cè)微尺的格數(shù)度量細(xì)胞的大小，目鏡測(cè)微尺每格代表的實(shí)際長(zhǎng)度用鏡臺(tái)測(cè)微尺來校定。A、將鏡臺(tái)測(cè)微尺放入載物臺(tái)上，轉(zhuǎn)動(dòng)目鏡，使二者平行。選擇一處讓二者重合，然后向右側(cè)尋找再次重合處，記下二者的數(shù)值，并按照目鏡測(cè)微尺和鏡臺(tái)測(cè)微尺的精度關(guān)系換算目鏡測(cè)微尺每小格實(shí)際代表的刻度值。目鏡測(cè)微尺目鏡測(cè)微尺鏡鏡臺(tái)測(cè)微尺目鏡測(cè)微尺每格的長(zhǎng)度=?正確答案:2.5μmB、將鏡臺(tái)測(cè)微尺取下，換上洋蔥表皮細(xì)胞、口腔黏膜上皮細(xì)胞、血細(xì)胞涂片，用目鏡測(cè)微尺測(cè)量出其長(zhǎng)度和寬度。C、應(yīng)用V=4/3Πab2(a為長(zhǎng)半徑，b為短半徑)計(jì)算出觀察細(xì)胞的體積。為什么要測(cè)量5-10個(gè)細(xì)胞的數(shù)據(jù)，再計(jì)算平均值？五、思考題：1．結(jié)合實(shí)驗(yàn)分析細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)及其與功能的適應(yīng)性。2．測(cè)量細(xì)胞時(shí)應(yīng)注意哪些問題？3．繪圖：洋蔥表皮細(xì)胞、口腔黏膜上皮細(xì)胞、各種血細(xì)胞附：生物繪圖必須注意的問題繪圖是生物實(shí)驗(yàn)報(bào)告的一種重要形式，基本要求如下：1．準(zhǔn)備好HB鉛筆、橡皮、刀、尺子及繪圖紙，將繪圖紙放在右邊。2．繪圖時(shí)，特別注意觀察物的形狀、各部分的位置、比例和毗鄰關(guān)系。3．每幅圖的大小、位置在紙面上必須安排得，通常圖占報(bào)告紙左上方2/3的面積，并考慮注字的位置。4．觀察清楚后，選擇典型的細(xì)胞或組織，左眼看顯微鏡，右眼配合右手，先用鉛筆在紙上輕輕描出輪廓，使形狀正確，然后再用清晰的線條繪出，線條粗細(xì)要均勻不要重復(fù)。注意紙面的整潔，鉛筆要保持尖銳，盡量少用橡皮。5．用鉛筆繪圖，線條要明確清晰，圖的深淺明暗和立體感一律以點(diǎn)的疏密來表示（深色用密集的黑點(diǎn)，淺色用稀疏的黑點(diǎn)），點(diǎn)要圓而一致，不得涂暗影或進(jìn)行其它美術(shù)加工。6．圖繪好后，要在圖的右側(cè)注明各部分結(jié)構(gòu)名稱，引線用直尺畫出，間隔要均勻，長(zhǎng)短適度，各引線不能交叉，圖注要盡量排列整齊，注字要用正楷。7．每一個(gè)圖下面要注明圖的名稱、放大倍數(shù)。8．繪圖紙上所有注字（包括姓名、實(shí)驗(yàn)日期、題目等）均用鉛筆書寫，不能用其他筆寫。實(shí)驗(yàn)二觀察黑藻的葉綠體和細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)（選做）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?．初步掌握高倍顯微鏡的使用方法。2．觀察葉綠體形態(tài)和分布。3．通過顯微鏡的實(shí)際觀察，理解細(xì)胞質(zhì)流動(dòng)是一種生命現(xiàn)象。二、實(shí)驗(yàn)原理：1．高等植物的葉綠體存在于細(xì)胞質(zhì)中，葉綠體呈綠色、扁平的橢球形或球形，高倍顯微鏡下清晰可見。2．活細(xì)胞中的細(xì)胞質(zhì)處于不斷流動(dòng)的狀態(tài)，用葉綠體的運(yùn)動(dòng)作為標(biāo)記可觀察細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)。三、實(shí)驗(yàn)程序：光照、室溫條件下水中培養(yǎng)黑藻——取一片幼嫩的小葉——做臨時(shí)裝片：清水+小葉+蓋玻片——低倍觀察葉片細(xì)胞——高倍觀察葉綠體的流動(dòng)及流動(dòng)方向。四、注意事項(xiàng)：1、細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)受細(xì)胞的代謝狀況和外界環(huán)境因素的影響，增進(jìn)細(xì)胞代謝作用的因素，如適宜的光照、溫度、pH值、生長(zhǎng)素等，都可以促進(jìn)細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)。反之，不利的環(huán)境變化和某些化學(xué)藥品，如麻醉劑等，則可抑制細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)。2、在做此實(shí)驗(yàn)時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)不流動(dòng)，或者流動(dòng)很慢，應(yīng)立即采取措施，加速其細(xì)胞質(zhì)的流動(dòng)。其方法有三種：一是進(jìn)行光照，即在陽光或燈光下放置15~20分鐘；二是提高盛放黑藻的水溫，可加入熱水將水溫調(diào)至25℃左右；三是切傷一小部分葉片。實(shí)驗(yàn)三血型的鑒定（選做）一、目的：掌握ABO血型鑒定的方法。二、原理：根據(jù)lgM類特異性血型抗體與紅細(xì)胞上特異性抗原結(jié)合能夠出現(xiàn)凝集反應(yīng)的原理，用已知lgM類特異性標(biāo)準(zhǔn)抗血清與被檢者紅細(xì)胞在室溫條件下反應(yīng)，若被檢者紅細(xì)胞出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，表明被檢紅細(xì)胞上有與血型抗體對(duì)應(yīng)的抗原。三、器材：載玻片、75%酒精、棉簽、采血針試劑：標(biāo)準(zhǔn)抗A、抗B血型定型試劑（二）血型:1、定義：根據(jù)紅細(xì)胞膜表面上特異抗原（凝集原）的類型進(jìn)行分類。2、血型分類：ABO血型系統(tǒng)、Rh血型系統(tǒng)等（三）ABO血型系統(tǒng)：臨床常見：A型、B型、AB型和O型。紅細(xì)胞凝集原血漿的凝集素A型A抗BB型B抗AAB型A、B／O型／抗A、抗B（四）血型鑒定的步驟1、準(zhǔn)備：載玻片的左上角編號(hào)。2.按標(biāo)記所示分別滴加抗A、抗B血型定型試劑各一滴。3.采血：無名指指尖內(nèi)側(cè)。每邊各加入受檢者的全血1滴。用牙簽攪拌使紅細(xì)胞與抗體充分混勻。3、原理：利用凝集反應(yīng)原理鑒定血型A+抗A凝集反應(yīng)B+抗B凝集反應(yīng)4.觀察和血型判讀：如有凝集，則愈搖動(dòng)，凝塊愈大；無凝集紅細(xì)胞可均勻分散。根據(jù)有無凝集現(xiàn)象報(bào)告結(jié)果。注意事項(xiàng)：=1\*GB3①每人每次使用一支采血針=2\*GB3②兩根攪拌牙簽不能相混=3\*GB3③觀察有無凝集反應(yīng)[小知識(shí)]：利用從綠咖啡豆中提取的酶，來清除掉B型血紅細(xì)胞膜表面的多糖體，從而獲得和O型血基本相同的紅血球，這樣就可以把B型血改變成了O型血，可用于緊急輸血。思考1．某同學(xué)的血液跟A型標(biāo)準(zhǔn)血清發(fā)生凝集反應(yīng)，但其血清遇A型血卻不發(fā)生凝集反應(yīng)。問：該同學(xué)的血型是哪一種？2．已知甲、乙、丙、丁四人中，只有甲、乙的血與B型標(biāo)準(zhǔn)血清發(fā)生凝集反應(yīng)，又知在緊急情況下，甲只能接受丁的血。問：甲、乙、丙、丁各是什么血型3．有一對(duì)夫婦，父親的血型為A型，母親的血型為B型，其兒子卻是O型，請(qǐng)問這個(gè)兒子是不是這對(duì)夫婦所生的？說明理由。1．答：A答：A型AO型3．有一對(duì)夫婦，父親的血型為A型，母親的血型為B型，其兒子卻是O型，請(qǐng)問這個(gè)兒子是不是這對(duì)夫婦所生的？說明理由。答：A型的基因型：AA和AiB型的基因型：BB和Bi型的基因型：ABO型的基因型：ii=1\*GB3①♀×♂=2\*GB3②♀×♂父母基因型：BB×AABi×AA↓↓↓↓產(chǎn)生配子：BAB、iA子女基因型：Ai子女血型：A型=3\*GB3③♀×♂=4\*GB3④♀×♂父母基因型：BB×AiAi×Bi↓↓↓↓產(chǎn)生配子：BA、iA、iB、i子女基因型：BiBiAiii子女血型：這對(duì)夫婦有可能生出O型血的兒子。但O型血的這個(gè)兒子也還不一定就是這對(duì)夫婦所生。通常ABO血型的法醫(yī)鑒定，只能作排除的檢查，不能肯定就是。要想知道這個(gè)兒子是否親生，最好還是做DNA鑒定，準(zhǔn)確率達(dá)99%。實(shí)驗(yàn)四血涂片的制備和細(xì)胞計(jì)數(shù)（必做）課前預(yù)習(xí)1．細(xì)胞計(jì)數(shù)的基本原理？2．細(xì)胞計(jì)數(shù)與細(xì)菌計(jì)數(shù)的異同點(diǎn)？一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?．制備血涂片，觀察了解血細(xì)胞的基本形態(tài)；2．掌握細(xì)胞計(jì)數(shù)方法。二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞計(jì)數(shù)一般用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，按白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法進(jìn)行計(jì)數(shù)。細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，先將培養(yǎng)細(xì)胞或血細(xì)胞稀釋成細(xì)胞懸液，然后將細(xì)胞懸液滴入細(xì)胞計(jì)數(shù)板內(nèi)，計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)室四大格內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。根據(jù)計(jì)數(shù)室的容積及稀釋倍數(shù)，即可計(jì)算出細(xì)胞濃度。三、實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及材料1．材料：雞一只2．器材和儀器：顯微鏡、載片、蓋片、吸水紙、手術(shù)器材、解剖盤、血球計(jì)數(shù)板、小平皿、牙簽3．試劑：0.9％生理鹽水四、實(shí)驗(yàn)步驟1．制備10%的雞血細(xì)胞懸液2．雞血涂片的制備與觀察取雞血懸液，靠近一端滴在載片上，將另一載片的一端呈30-45°角緊貼在血滴的前緣，均勻用力向前推，使血液在載片上形成均勻的薄層(圖2－1)。晾干，顯微鏡下觀察。圖2—1血涂片的制備3．細(xì)胞計(jì)數(shù)1）制備雞紅細(xì)胞懸液：0.9％生理鹽水按確定的稀釋倍數(shù)制成10%雞紅細(xì)胞懸液。2）熟悉血細(xì)胞計(jì)數(shù)板：血細(xì)胞計(jì)數(shù)板呈長(zhǎng)方形，有2個(gè)計(jì)數(shù)室。每個(gè)計(jì)數(shù)室分為9個(gè)大正方格，每個(gè)大格邊長(zhǎng)為1mm，計(jì)數(shù)室的底與蓋玻片間的距離為0.1mm，及每大格的容積為1mm×1mm×0.1mm=0.1mm3。四角的每個(gè)大格被分為16個(gè)中格；中央的大格被分為25個(gè)中格，中央的每個(gè)中格又被分為16個(gè)小格。3）滴片：每人取1副血細(xì)胞計(jì)數(shù)板及1張蓋玻片，用布將蓋玻片擦凈，把蓋玻片蓋在血細(xì)胞計(jì)數(shù)板槽上，然后用吸管將制備好的雞血細(xì)胞懸液混勻，吸取血細(xì)胞懸液，滴1滴于血細(xì)胞計(jì)數(shù)板的蓋玻片一側(cè)邊緣，使細(xì)胞懸液自然流入計(jì)數(shù)室內(nèi)。※注意：血細(xì)胞懸液不可滴的過多，如溢出或蓋玻片內(nèi)有氣泡必須重做，否則將影響計(jì)數(shù)結(jié)果。該吸管加完樣后不能再用。4）計(jì)數(shù)：在低倍鏡下按圖計(jì)算計(jì)數(shù)板的四角大方格（每個(gè)大方格又分16個(gè)小方格）內(nèi)的細(xì)胞數(shù)。計(jì)數(shù)時(shí)，只計(jì)數(shù)完整的細(xì)胞，若聚成一團(tuán)的細(xì)胞則按一個(gè)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。數(shù)出計(jì)數(shù)板上計(jì)數(shù)室四角四大格中的細(xì)胞數(shù)，如細(xì)胞壓在格線上時(shí)，數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。二次重復(fù)計(jì)數(shù)不應(yīng)超過±5％。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1．雞血涂片的制備與觀察顯微鏡觀察可見雞紅細(xì)胞為橢球形，有核。白細(xì)胞數(shù)目少，為圓形。2．細(xì)胞濃度計(jì)算：將四大格的細(xì)胞總數(shù)除以4，得出平均每大格的細(xì)胞數(shù)，每大格的容積為0.1mm3，乘以10000即為1000mm3（1mL）。因此，不同稀釋倍數(shù)細(xì)胞懸液的細(xì)胞濃度可用下式計(jì)算：細(xì)胞濃度（細(xì)胞數(shù)／mL）＝（四大格的細(xì)胞數(shù)／4）×10000×稀釋倍數(shù)六、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．繪圖：顯微鏡下觀察的各種細(xì)胞形態(tài)2．計(jì)數(shù)每毫升細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)（注意單位：個(gè)/ml）3．為什么細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，細(xì)胞懸液逸出凹槽外或有氣泡時(shí)要重做？顯微直接計(jì)數(shù)法的計(jì)數(shù)原理1ml菌液中的總菌數(shù)=？=N×104×B=A/5×25×104×BN:大方格的總菌數(shù)；A:五個(gè)中方格的總菌數(shù)；B:菌液的稀釋倍數(shù)；答案：(3+4+4+3+2)／5×25×104=8×105個(gè)/ml實(shí)驗(yàn)五DNA的細(xì)胞化學(xué)－Feulgen反應(yīng)（必做）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?．Feulgen反應(yīng)是專一性染DNA的反應(yīng)，是經(jīng)典的細(xì)胞化學(xué)方法，通過實(shí)驗(yàn)使學(xué)生掌握Feulgen染色的技術(shù)。2．觀察了解DNA在細(xì)胞內(nèi)的分布。二、實(shí)驗(yàn)原理：稀HCl水解DNA，破壞嘌呤和脫氧核糖間的化學(xué)鍵，并在脫氧核糖C1端形成游離的醛基，醛基和Schiff試劑結(jié)合，形成紫紅色的化合物。因此在有DNA的部位，就會(huì)呈現(xiàn)除紫紅色陽性反應(yīng)。三、實(shí)驗(yàn)儀器、試劑及材料1．實(shí)驗(yàn)材料：紫色洋蔥2．實(shí)驗(yàn)器材：顯微鏡、染色缸、剪刀、刀片、鑷子、燒杯、培養(yǎng)皿、水浴鍋、100℃溫度計(jì)、3．試劑：見教材31～32頁。四、實(shí)驗(yàn)步驟：1．撕取洋蔥鱗莖內(nèi)表皮3塊（1cm2，待鋪片時(shí)剪成1mm2），分別進(jìn)行下列操作?！?塊放在3mL1MHCL中，加熱到60℃水解8～10min。（實(shí)驗(yàn)組）——1塊放在3mL1MHCL中，常溫下水解8～10min。（對(duì)照組1）——1塊不用水解，直接從第3步進(jìn)行操作（對(duì)照組2）2．蒸餾水水洗。3．用Schiff試劑遮光染色30～60min。(1塊洋蔥內(nèi)表皮約1.5mL)4．用新鮮配制的漂洗液洗3次，每次2mL，2min。5．自來水水洗5min。6．0.5%亮綠復(fù)染30s。7．將內(nèi)表皮放到載波片上，蓋上蓋波片，顯微鏡觀察。細(xì)胞中凡是有DNA的部位應(yīng)呈現(xiàn)紫紅色的陽性反應(yīng)。（實(shí)驗(yàn)組與2個(gè)對(duì)照組在顯微鏡下對(duì)照進(jìn)行觀察）注意事項(xiàng)：不要把染液占到自己手上或滴加到桌面上五、作業(yè)：繪圖示洋蔥鱗莖表皮細(xì)胞DNA的分布部位。實(shí)驗(yàn)六葉綠體的分離與熒光觀察（必做）課前預(yù)習(xí)：1．分離細(xì)胞器的一般原理和方法？2．葉綠體的熒光為什么不能用普通光學(xué)顯微鏡觀察到？一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?．通過對(duì)植物細(xì)胞葉綠體的分離，了解細(xì)胞器分離的一般原理和方法；2．通過光鏡鑒定葉綠體的純度及了解葉綠體形狀；3．觀察葉綠體的自發(fā)熒光和次生熒光，了解熒光顯微鏡的原理和使用方法。二、實(shí)驗(yàn)原理1．細(xì)胞經(jīng)過破碎后制成勻漿，在等滲介質(zhì)中進(jìn)行差速離心，是分離細(xì)胞器的常用方法。2．利用細(xì)胞各組分質(zhì)量大小、形狀和密度的不同，選擇不同的離心力和離心時(shí)間，即可分離得到所需要的細(xì)胞器或大分子組分。3．菠菜是分離完整葉綠體的極好材料，其細(xì)胞中所含的質(zhì)體較大，而且它們都能在不積累淀粉和酚類物質(zhì)的條件下生長(zhǎng)。菠菜的葉綠體/濕重比率較高。葉綠體具有熒光現(xiàn)象，可利用熒光顯微鏡觀察。菠菜葉富含葉綠體，可采用徒手切片觀察其形態(tài)和分布。4．葉綠體的分離應(yīng)在等滲溶液(0.35mol/L氯化鈉或0.4mol/L蔗糖溶液)中進(jìn)行,以免滲透壓的改變使葉綠體受到損傷。5．將勻漿液1000r/min的條件下離心2min,用6層紗布除去組織殘?jiān)鸵恍┪幢黄扑榈耐暾?xì)胞，以去除其中的組織殘?jiān)臀幢黄扑榈耐暾?xì)胞。然后，在3000r/min的條件下離心5min，即可獲得沉淀的葉綠體（混有部分細(xì)胞核）。6．分離過程最好在0~5℃條件下進(jìn)行；如果在室溫下，要迅速分離和觀察。離心技術(shù)可用于細(xì)胞器的分離。1）差速離心法：采用逐漸增加離心速度或低速和高速交替進(jìn)行離心，使沉降速度不同的顆粒在不同的分離速度和離心時(shí)間下分批分離的方法，稱為差速離心法。常用于從組織勻漿中分離各種細(xì)胞器，見表2-1。表4-1差速離心形成的沉淀（植物）沉淀轉(zhuǎn)速x時(shí)間內(nèi)容物A150gx20min完整細(xì)胞B1000gx20min細(xì)胞核，細(xì)胞碎片C3000gx6min葉綠體D10000gx20min線粒體、溶酶體、微體E105000gx120min微粒體F105000gx20min+0.26%脫氧膽酸納核糖體三、實(shí)驗(yàn)用品1．材料：新鮮的嫩菠菜，臨用前先暗置過夜，目的是消除淀粉的積累。最好4～5℃冷藏。2．試劑：蒸餾水，0.35mol/L氯化鈉溶液，0.4mol/L蔗糖溶液，0.01%吖啶橙，最好4～5℃冷藏。3．器材：立式冰凍高速離心機(jī)、組織勻漿機(jī)、光學(xué)顯微鏡、熒光顯微鏡、天平、研缽、漏斗、50mL離心管、紗布、載玻片、蓋玻片等。四、實(shí)驗(yàn)步驟一、葉綠體的提取1．新鮮嫩菠菜葉洗凈擦干去除葉梗、葉脈，稱2克于放入勻漿器中，加入8mL0.35mol/L氯化鈉溶液；同樣稱2克于放入勻漿器中，加入8mL0.4mol/L蔗糖溶液，作對(duì)比實(shí)驗(yàn)，貼好標(biāo)簽。2．利用搗碎機(jī)低速（5000r/min）勻漿，3~5min，或快速研磨成勻漿。3．將勻漿液用6層紗布過濾于50mL小燒杯中，4．取6ml慮液1000r/min離心2min（去除組織殘?jiān)臀幢黄扑榈募?xì)胞），棄去沉淀；5．取上清液在3000r/min離心5min，棄去上清液，保留沉淀（沉淀即為葉綠體，混有部分細(xì)胞核）；6．沉淀用大約1mL0.35mol氯化鈉溶液懸浮；7．取葉綠體懸液一滴置于載玻片上，蓋上蓋波片，光學(xué)顯微鏡下觀察。8．若使用熒光顯微鏡觀察(熒光顯微鏡使用方法)時(shí)，將葉綠體懸液滴在無熒光的載玻片上，再滴加1滴0.01%吖啶橙熒光染料，蓋上無熒光的蓋玻片后即可觀察?！緦?shí)驗(yàn)結(jié)果】①普通光鏡下，可看到葉綠體為綠色橄欖形，在高倍鏡下可看到葉綠體內(nèi)部含有較深的綠色小顆粒，即基粒。②在選用B（blue蘭色）激發(fā)濾片的條件下，葉綠體發(fā)出火紅色熒光。③加入吖啶橙后，葉綠體發(fā)出橘紅色熒光，其中混有的細(xì)胞核則發(fā)綠色熒光。二、菠菜葉徒手切片觀察1．新鮮菠菜葉用刀片切出一斜面置于載玻片上，滴加1~2滴0.35mol/L氯化鈉溶液，蓋上蓋片顯微鏡下觀察，可以看到三種細(xì)胞：（1）表皮細(xì)胞：為邊緣呈鋸齒形的鱗片狀細(xì)胞。（2）保衛(wèi)細(xì)胞：為構(gòu)成氣孔的成對(duì)存在的腎形細(xì)胞。（3）葉肉細(xì)胞：為排成柵狀的長(zhǎng)形和橢圓形細(xì)胞，葉綠體呈綠色橄欖形。保衛(wèi)細(xì)胞長(zhǎng)形的柵欄細(xì)胞橢圓形的海綿細(xì)胞葉綠體橄欖形【實(shí)驗(yàn)報(bào)告】1.繪出各種情況下觀察到的葉綠體、氣孔、表皮細(xì)胞的生物圖，并對(duì)形態(tài)、顏色加以說明。2．觀察經(jīng)過加熱和未加熱這兩種葉綠體在形態(tài)上的區(qū)別，并繪出草圖。3.測(cè)量葉綠體的長(zhǎng)軸和短軸，分別測(cè)量5~10個(gè)葉綠體，求其平均值。思考題：l．葉綠體分離的實(shí)驗(yàn)原理是什么？2．在分離葉綠體時(shí)應(yīng)注意些什么問題？實(shí)驗(yàn)七細(xì)胞膜的通透性（必做）課前預(yù)習(xí)1．在等滲溶液中細(xì)胞一定能維持正常形態(tài)嗎？2．預(yù)測(cè)紅細(xì)胞在各種溶液中的溶血速度？一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模毫私庀鄬?duì)分子質(zhì)量、脂溶性大小、電解質(zhì)和非電解質(zhì)對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響。二、實(shí)驗(yàn)原理：將紅細(xì)胞放入數(shù)種等滲溶液中，由于紅細(xì)胞膜具有選擇通透性，有的溶質(zhì)可以進(jìn)入細(xì)胞，有的不能進(jìn)入，滲入的物質(zhì)可以提高紅細(xì)胞的滲透壓，促使水分進(jìn)入細(xì)胞，使細(xì)胞膨脹，進(jìn)而破裂，血紅蛋白釋放到介質(zhì)中，細(xì)胞溶液變?yōu)榧t色透明的血紅蛋白溶液，這就是溶血現(xiàn)象。由于物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度不同，溶血時(shí)間就不同。因此，發(fā)生溶血現(xiàn)象所需時(shí)間長(zhǎng)短可作為測(cè)量物質(zhì)進(jìn)入紅細(xì)胞速度的一種指標(biāo)。測(cè)量指標(biāo)：溶血時(shí)間1.相對(duì)分子質(zhì)量大小對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響1）紅細(xì)胞置于乙二醇、丙三醇（甘油）、葡萄糖等摩爾濃度的高滲液中，乙二醇等分子進(jìn)入紅細(xì)胞，使細(xì)胞內(nèi)滲透壓提高，導(dǎo)致水分進(jìn)入，細(xì)胞膨脹，細(xì)胞膜破裂，細(xì)胞溶血。2）溶血的快慢與進(jìn)入物質(zhì)的分子量大小有關(guān)，相對(duì)分子質(zhì)量大的進(jìn)入細(xì)胞慢，發(fā)生溶血所需時(shí)間長(zhǎng)。2.脂溶性大小對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響a非極性化合物易溶于脂溶劑中，但在水中的溶解度小。碳鏈越長(zhǎng)，脂溶性越高。b細(xì)胞膜是脂類雙分子層，脂溶性大的物質(zhì)容易通過細(xì)胞膜，對(duì)細(xì)胞的通透性高。c分配系數(shù)：一種化合物在脂溶劑中的溶解度與其在水中的溶解度之比，稱為分配系數(shù)。3.電解質(zhì)和非電解質(zhì)溶液對(duì)細(xì)胞膜通透性的影響1)等滲系數(shù)：具有相同滲透壓的某非電解質(zhì)與某電解質(zhì)溶液濃度之比。2)i＝葡萄糖的等滲物質(zhì)的量濃度/NaCL的等滲物質(zhì)的量濃度。3)等滲濃度：發(fā)生溶血者為低滲液，把發(fā)生溶血的前一管溶液的濃度近似視為紅細(xì)胞等滲濃度。三、實(shí)驗(yàn)用品材料：雞血器材：50ml燒杯、滴管、試管、試管架,阿氏液（Alsever’s液）試劑：0.17mol/L氯化鈉0.17mol/L氯化銨0.17mol/L硝酸鈉0.17mol/L醋酸銨0.12mol/L硫酸鈉0.12mol/L草酸銨0.32mol/L葡萄糖0.32mol/L甘油0.32mol/L乙醇0.9%生理鹽水阿氏液：葡萄糖2.02g，氯化鈉0.42g，檸檬酸鈉0.80g，檸檬酸0.055g，蒸餾水加到100ml，滅菌，0-4℃保存兩周四、實(shí)驗(yàn)步驟：1、雞紅細(xì)胞的制備：①從集市買一只活雞現(xiàn)殺取血雞血（一份雞血加兩份阿氏液）混勻，離心（2000rpm）10’棄上清液，取沉淀加0.9%生理鹽水，至10ml離心（2000rpm）10’，重復(fù)4-5次棄上清液，取沉淀制成2%雞紅細(xì)胞備用（用生理鹽水稀釋）。2）溶血現(xiàn)象的觀察：取試管一支，加入5ml蒸餾水，再加入0.5ml制備好的雞血，注意觀察溶液顏色的變化，由不透明的紅色逐漸澄清。紅細(xì)胞發(fā)生破裂，造成100%紅細(xì)胞溶血，使光線比較容易透過溶液。（將試管貼靠在書上，隔著試管看書中的字，如發(fā)現(xiàn)溶血?jiǎng)t文字可看清楚）。3）紅細(xì)胞的滲透性：（1）取試管一支，加入0·17mol/L氯化鈉溶液5ml，再加入0.5ml制備的雞血，輕輕搖動(dòng)，注意是否有顏色變化？是否有溶血現(xiàn)象？為什么？4）溶血情況判斷（1）不溶血（－）液體分2層，上層淺黃色透明，下層紅色不透明，鏡檢紅細(xì)胞完好。（2）不完全溶血（＋或＋＋）溶液渾濁，上層變紅色，鏡檢部分紅細(xì)胞破裂（3）完全溶血（＋＋＋）液體變紅而透明，鏡檢發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞全部呈碎片。（將試管貼靠在書上，隔著試管看書中的字，文字看得清清楚楚——完全溶血）?！淖挚吹貌皇呛芮宄煌耆苎匆姾诤鹾醯摹?，很糊涂——不溶血六、細(xì)胞膜滲透性實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較和分析所加試劑和濃度時(shí)間結(jié)果分析10·17mol/L氯化鈉20·17mol/L硝酸鈉30·12mol/L硫酸鈉40·17mol/L氯化銨50·17mol/L醋酸銨60·12mol/L草酸銨70·32mol/L葡萄糖80·32mol/L甘油90·32mol/L乙醇100·32mol/L丙酮七、注意事項(xiàng)：1.雞紅細(xì)胞的稀釋要用0.9%生理鹽水，加入的生理鹽水體積與第一步取的雞血的體積相等。2.離心機(jī)使用時(shí)，要將配平后的離心管對(duì)稱放置在離心機(jī)內(nèi)，禁止未配平就放入離心機(jī)和非對(duì)稱放置離心管。八、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．怎樣根據(jù)細(xì)胞膜滲透性實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析確定物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的速度？2．物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞的快慢有什么規(guī)律？實(shí)驗(yàn)八植物凝集素對(duì)紅細(xì)胞的凝集作用（必做）課前預(yù)習(xí)：土豆凝集素的本質(zhì)及其使紅細(xì)胞凝集的原理？一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康牧私饧?xì)胞糖被的特點(diǎn)和功能，了解植物凝集素的作用二、實(shí)驗(yàn)原理細(xì)胞膜表面的有分支狀糖外被，細(xì)胞間的聯(lián)系、細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化、免疫反應(yīng)、腫瘤的發(fā)生等都和細(xì)胞表面的分支狀糖分子有關(guān)。凝集素（lectin）是一類含糖并能與糖分子專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集細(xì)胞和刺激細(xì)胞分裂的作用。凝集素使細(xì)胞凝集是由于它與細(xì)胞表面的糖分子連接，在細(xì)胞表面間形成“橋”的結(jié)果，加入與凝集素互補(bǔ)的糖可以抑制細(xì)胞的凝集。三、實(shí)驗(yàn)用品1．材料：土豆塊莖，一只雞（采血）2．器材和儀器：顯微鏡、載片、雙凹片、蓋玻片、天平、滴管、小燒杯、移液管、離心管、試管和試管架3．試劑：0.9％生理鹽水、2％雞紅細(xì)胞、PBS緩沖液、阿氏液（Alsever液）硫酸胺（約0.4g/ml）四、方法步驟1．制備2%紅細(xì)胞懸浮液：雞血（一份雞血加兩份阿氏液）→混勻，離心（2000rpm）10’→棄上清液，取沉淀→加0.9%生理鹽水，至10ml→離心（2000rpm）10’，重復(fù)4-5次→棄上清液，取沉淀→制成2%雞紅細(xì)胞備用（用生理鹽水稀釋）。2．制備土豆凝集素液：稱取土豆去皮塊莖20g,加100mLPBS緩沖液，浸泡2h，浸出的粗提液過濾，即為土豆凝集素液。3.制備韭菜凝聚素液：稱取韭菜葉片4g→洗凈，剪碎→按1：1（W/V）加入生理鹽水（即4ml）研磨成勻漿→過濾→濾液5000r/min離心20min→棄沉淀（轉(zhuǎn)移上清）→上清液加硫酸胺（約0.4g/ml）至60%飽和度沉淀→5000r/min離心20min→沉淀用0.25ml磷酸緩沖液溶解。4．凝集反應(yīng)：a載玻片上滴一滴土豆凝集素液，再滴一滴2％紅細(xì)胞液，充分混勻，靜置2min,低倍顯微鏡下觀察血球凝集現(xiàn)象。b載玻片上滴一滴韭菜凝集素液,再滴一滴2％紅細(xì)胞液,充分混勻，靜置2min,低倍顯微鏡下觀察血球凝集現(xiàn)象。c．以PBS緩沖液加2％血細(xì)胞作對(duì)照實(shí)驗(yàn)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1．凝集素液能使雞紅細(xì)胞凝集，PBS對(duì)照液中紅細(xì)胞分散均勻?qū)φ战M：未凝血實(shí)驗(yàn)組：凝血五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.繪圖表示血細(xì)胞凝集現(xiàn)象，并說明原因。2.比較馬鈴薯和韭菜凝集素的凝集效果并分析原因。六、注意事項(xiàng)1.韭菜的研磨一定要到位?！?.韭菜凝聚素提取中硫酸銨的量一定要適當(dāng)過量，否則沉淀效果不好。具體標(biāo)準(zhǔn)為加入硫酸銨后振搖溶解，至溶解后在離心管底部，能看到少量過量的硫酸銨。3.離心機(jī)使用時(shí)，要將配平后的離心管對(duì)稱放置在離心機(jī)內(nèi)，禁止未配平就放入離心機(jī)和非對(duì)稱放置離心管。七、實(shí)驗(yàn)報(bào)告實(shí)驗(yàn)九植物細(xì)胞的有絲分裂（必做）一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?.觀察植物細(xì)胞有絲分裂的過程，識(shí)別有絲分裂的不同時(shí)期；2.初步掌握制作根尖有絲分裂裝片的技術(shù)，培養(yǎng)學(xué)生的動(dòng)手能力；3.掌握繪制生物圖的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理：在植物體中，有絲分裂常見于根尖、莖尖等分生區(qū)細(xì)胞。高等植物細(xì)胞有絲分裂的過程，分為分裂間期和有絲分裂期的前期、中期、后期、末期?？梢杂酶弑讹@微鏡觀察植物細(xì)胞有絲分裂的過程，根據(jù)各個(gè)時(shí)期細(xì)胞內(nèi)染色體（或染色質(zhì)）的變化情況，識(shí)別該細(xì)胞處于有絲分裂的哪個(gè)時(shí)期。細(xì)胞核內(nèi)的染色體容易被堿性染料著色。三、實(shí)驗(yàn)用具：1.材料：洋蔥根尖或蠶豆根尖2.器材：顯微鏡，載玻片，蓋玻片，玻璃皿，剪刀，鑷子，量筒（50ml），燒杯（50ml、100ml）、青霉素瓶、滴瓶、吸管、培養(yǎng)皿、溫度計(jì)、紗布、吸水紙3.試劑：卡諾氏固定液（甲醇或95%乙醇3份，冰醋酸1份）、1NHCl龍膽紫（質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.01g/mL或0.02g/mL溶液（或醋酸洋紅液）四、方法步驟1．洋蔥根尖的培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)課前的3—4d，取洋蔥一個(gè)，注意：洋蔥要選擇底盤大，避免用新采收的洋蔥；剝?nèi)ネ鈱永掀?，用刀削去老根，不要削掉“根芽”。放在廣口瓶或燒杯上，瓶?jī)?nèi)裝滿清水，放置在光照處。注意每天換水1—2次，使洋蔥的底部總是接觸到水。待根長(zhǎng)到2—3cm時(shí)，取生長(zhǎng)健壯的根尖制片觀察。2．裝片的制作1）解離：剪取根尖2—3mm（最好在每天的10—14點(diǎn)取根，因此時(shí)間是洋蔥根尖有絲分裂高峰期），立即放入盛有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為15%的氯化氫溶液和體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精溶液的混合液（1：1）的玻璃皿中，在室溫下解離3—5min。2）漂洗：待根尖酥軟后，用鑷子取出，放入盛有清水的玻璃皿中漂洗約10min。3）染色：把洋蔥根尖放進(jìn)盛有質(zhì)量濃度為0.01g/mL或0.02g/mL的龍膽紫溶液（或醋酸洋紅液）的培養(yǎng)皿中，染色3—5min。4）制片：取一干凈載玻片，在中央滴一滴清水，將染色的根尖用鑷子取出，放入載玻片的水滴中，并且用鑷子尖把根尖弄碎，蓋上蓋玻片，在蓋玻片再加一載玻片。然后，用拇指輕輕地壓載玻片。取下后加上的載玻片，既制成裝片。3．洋蔥根尖有絲分裂的觀察1）低倍鏡觀察：把制成的洋蔥根尖裝片先放在低倍鏡下觀察，要求找到分生區(qū)的細(xì)胞，它的特點(diǎn)是：細(xì)胞呈正方形，排列緊密，有的細(xì)胞正在分裂。2）高倍鏡觀察：找到分生區(qū)的細(xì)胞后，把低倍鏡移走，直接換上高倍鏡，用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋和反光鏡把視野調(diào)整的既清晰又較亮，直到看清細(xì)胞物象為止。仔細(xì)觀察，找到處于有絲分裂的前期、中期、后期、末期和間期的細(xì)胞。注意：觀察時(shí)，應(yīng)根據(jù)有絲分裂各時(shí)期的特點(diǎn)，仔細(xì)辨認(rèn)。由于間期長(zhǎng)，視野中多數(shù)細(xì)胞均處于此時(shí)期，易于觀察。其它時(shí)期，可先找出細(xì)胞分裂期的中期，然后再找到前期、后期、末期的細(xì)胞。仔細(xì)觀察各個(gè)時(shí)期內(nèi)染色體的變化特點(diǎn)。在同一視野中，很難找全各個(gè)時(shí)期的細(xì)胞，可以慢慢地移動(dòng)裝片尋找。五、繪圖在觀察清楚有絲分裂各個(gè)時(shí)期的細(xì)胞以后，繪出洋蔥根尖細(xì)胞有絲分裂的各個(gè)時(shí)期的簡(jiǎn)圖。要求重點(diǎn)：繪植物細(xì)胞有絲分裂中期、后期圖（含4個(gè)染色體）。六、結(jié)論洋蔥根尖細(xì)胞有絲分裂過程中各個(gè)時(shí)期的