噬菌體抗體庫技術(shù)的基本方法第1頁/共28頁一、噬菌體抗體庫技術(shù)的

基本方法⒈獲取目的基因⒉抗體庫技術(shù)的載體⒊淘篩⒋表達與鑒定第2頁/共28頁二、噬菌體抗體庫技術(shù)的

特點⒈模擬天然全套抗體庫⒉避開了人工免疫和雜交瘤技術(shù)⒊可獲得高親和力的人源化抗體第3頁/共28頁三、基因工程抗體表達⒈原核細胞表達⒉真核細胞表達⒊轉(zhuǎn)基因植物表達⒋轉(zhuǎn)基因動物表達第4頁/共28頁第五節(jié)抗體診斷試劑一、血清學鑒定用的抗體類試劑⒈鑒定病原菌的抗體試劑⑴常用診斷血清的品種和用途①沙門氏菌屬診斷血清②志賀氏菌屬診斷血清③病原性大腸埃希氏菌診斷血清第5頁/共28頁⑵診斷血清的制備步驟①制備細菌抗原②免疫動物和制備抗體血清⑶診斷血清診斷方法第6頁/共28頁第7頁/共28頁⒉乙型肝炎病毒表面抗原的反向被動血凝診斷試劑⒊妊娠診斷試劑⒋抗ABO血型系統(tǒng)血清第8頁/共28頁第9頁/共28頁二、免疫標記技術(shù)用的抗體

類試劑⒈熒光抗體診斷試劑⑴熒光抗體的制備⑵免疫熒光測定方法⒉免疫酶抗體診斷試劑⑴免疫酶染色法用抗體診斷試劑⑵酶免疫測定用抗體診斷試劑①HBsAg酶標診斷試劑②HBeAg酶標診斷試劑第10頁/共28頁③HAVAg（甲型肝炎病毒抗原）酶標診斷試劑④測定HIV（人免疫缺陷病毒）抗原的酶標抗體診斷試劑⑤甲胎蛋白（AFP）酶標抗體診斷試劑⑥癌胚抗原（CEA）的酶標抗體診斷試劑第11頁/共28頁第12頁/共28頁⒊放射免疫用抗體診斷試劑放射免疫技術(shù)是將放射性核素分析的高度靈敏性與抗原抗體反應的特異性結(jié)合起來建立的檢測技術(shù)。放射性核素標記抗體的方法：①氯胺-T法②Iodogen氏法第13頁/共28頁抗原的測定有：①夾心法②間接法③竟爭法常用標記抗體試劑有①HBsAg放射性核素標記抗體診斷試劑第14頁/共28頁②HBeAg放射性核素標記抗體診斷試劑③HAV抗原放射性核素標記抗體診斷試劑④AFP放射性核素標記抗體診斷試劑⑤CEA放射性核素標記抗體診斷試劑第15頁/共28頁三、導向診斷藥物

放射性核素標記抗體腫瘤放射免疫顯像放射免疫顯像優(yōu)點：①在體內(nèi)確切腫瘤定位作用，準確性達90%，靈敏度達100%。②在體內(nèi)可檢出0.5cm大小的病灶，并可檢出肺腦的轉(zhuǎn)移灶。第16頁/共28頁③小分子抗體易到達腫瘤部位，可顯著提高N/NT值。④抗體在腫瘤部位可保留6～9日⑤能觀擦抗體在血中的半衰期和可能出現(xiàn)的不良反應。第17頁/共28頁

放射免疫顯像定位技術(shù)將抗腫瘤單克隆抗體（Ab）與二乙基三胺五乙酸（DTPA）在體外偶聯(lián)成Ab-DTPA，再注入體內(nèi)后，就能與體內(nèi)組織相結(jié)合。由于抗體分子量大，需3天完成。3天后注入放射性核素In-113M（半衰期100m），因DTPA是重金屬離子絡(luò)合劑，所以In-113M可以結(jié)合到DTPA分子上，使腫瘤組織顯像。這一過程在2小時內(nèi)可完成。第18頁/共28頁

建立預定位技術(shù)需解決3個問題：①抗體在腫瘤組織滯留要7天以上。②Ab-DTPA偶聯(lián)物比較穩(wěn)定；③內(nèi)源性金屬離子對DTPA的封閉作用要小。第19頁/共28頁第六節(jié)抗體治療藥物以抗體為載體的導向治療藥物，還不成熟。一、放射性核素標記的抗體治療藥物抗體作為放射性核素的導向載體，標記操作簡便用量小。放射性核素標記的抗體對腫瘤細胞殺傷較大。第20頁/共28頁二、抗癌藥物偶聯(lián)的抗體藥物⒈常用的抗癌藥物氨甲喋呤（MTX）、阿霉素（ADM）、絲裂霉素（MMC）等。以人血漿白蛋白作為中間載體，可明顯提高每分子抗體所攜帶的MTX量，使體外細胞毒性體高二倍。第21頁/共28頁⒉抗體類藥物逆轉(zhuǎn)耐藥性腫瘤細胞對抗原藥物可產(chǎn)生多藥耐藥性（MDR）。

MDR是由基因調(diào)控的，其編碼蛋白稱為P糖蛋白，其中P170是與腫瘤耐藥相關(guān)的主要蛋白，由Mdr1基因編碼，1280氨基酸殘基，分子量170K。第22頁/共28頁

認為P蛋白是ATP酶依賴性藥泵，藥物進入細胞后與P蛋白結(jié)合，利用ATP水解釋放的能量將藥物泵出胞外，使胞內(nèi)藥物蓄積減少，因而產(chǎn)生耐藥性。第23頁/共28頁

三、毒素偶聯(lián)的抗體藥物⒈免疫毒素及其換代制品在導向藥物中，毒素和抗體的交聯(lián)物稱為免疫毒素。第一代免疫毒素是包含有A、B鏈完整毒素和抗體的交聯(lián)物，其中B鏈非特異性結(jié)合，使其僅在體外應用。第24頁/共28頁

第二代免疫毒素是利用抗體或抗體片段與毒素的A鏈或與A鏈相似的單鏈核糖體失活蛋白的結(jié)合物。因避免了第一代免疫毒素的非特異性，故能在體內(nèi)有一定的抗腫瘤作用。第三代免疫毒素重組免疫毒素用基因克隆方法改造毒素基因和小分子抗體基因重組表達。特異性好、穩(wěn)定性強、滲透性佳、免疫源性低、可大量制備。第25頁/共28頁⒉免疫毒素的制備方法⑴毒素的來源細菌毒素植物毒素⑵載體的種類①小分子抗體FV或SCFV②細胞生長因子③激素④CD4第26頁/共28頁