碩士研究生分子生物學(xué)復(fù)習(xí)(JUJU)1.基因(gene)：是指核酸分子中貯存遺傳信息的遺傳單位，是指貯存有功能的蛋白質(zhì)2.基因組(genome)：是指細(xì)胞或生物體中，一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總和?；?.基因家族(genefamily)：是指核苷酸序列或編碼產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)具有一定程度同源性的4.假基因(pseudogene)：在多基因家族中，某些成員并不能表達(dá)出有功能的產(chǎn)物，這5.質(zhì)粒(plasmid)：是存在于細(xì)菌細(xì)胞質(zhì)中的一類獨(dú)立于染色體的遺傳成分，它是由環(huán)6.基因超家族(genesuperfamily)：是指一組由多基因家族及單基因組成的更大的基因9.操縱子(operator)：是阻遏蛋白識別與結(jié)合的一小段DNA序列，轉(zhuǎn)錄過程存在阻遏10.順式作用元件(cis-actingelements)：是指那些與結(jié)構(gòu)基因表達(dá)調(diào)控相關(guān)、能夠被基子等。真核生物中包括啟動(dòng)子、上游啟動(dòng)子元件、增11.反式作用因子(trans-actingelements)：在真核生物中，基因特異性轉(zhuǎn)錄因子稱為反12.增強(qiáng)子(enhancer)：是一種較短的DNA序列，能夠被反式作用因子識別與結(jié)合。13.啟動(dòng)子(promoter)：是RNA聚合酶特異性識別和結(jié)合的DNA序列。啟動(dòng)子具有14.載體(vector)：攜帶外源DNA進(jìn)入宿主細(xì)胞，并在宿主細(xì)胞中進(jìn)行無性繁殖或表分為克隆載體和表達(dá)載體，按來源可分為質(zhì)粒、噬菌體、噬菌粒、粘粒、病毒和人工染色體載NAdsRNA 外源性dsRNA(酶切產(chǎn)生siRNA)引起同源mRNA的特異性降解，因而抑制相應(yīng)基因表達(dá)的18.分子雜交(nucleicacidhybridization)：是指具有互補(bǔ)序列的兩條核酸單鏈在一定條19.基因診斷(genediagnosis)：是以DNA和RNA作為診斷材料，通過檢查基因的存表達(dá)，對人體狀態(tài)和疾病作出診斷的方法和過程。其基本原理是檢測20.基因治療(genetherapy)：是應(yīng)用基因或基因產(chǎn)物，治療疾病的一種方法。狹義的21.miRNA(microRNA)：是真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非編碼式識別靶mRNA，并根據(jù)互補(bǔ)程度的不同指導(dǎo)沉默復(fù)合體降解靶mRNA或阻遏靶mRNA其轉(zhuǎn)錄或直接導(dǎo)致其降解，從而抑制基因表達(dá)。有高節(jié)中起多種作用23.轉(zhuǎn)染(transfection)：指真核細(xì)胞主動(dòng)攝取或被動(dòng)導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表24.轉(zhuǎn)化(transformation)：是指將質(zhì)?；蚱渌庠碊NA導(dǎo)入處于感受態(tài)的宿主細(xì)胞，達(dá)：是指生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系列26.限制性核酸內(nèi)切酶(restrictionendonuclease)：是一類能識別雙鏈DNA分子中特定27.基因組學(xué)(genomics)：指對所有基因進(jìn)行基因組作圖(包括遺傳圖譜、物理圖譜、28.蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)：是對不同時(shí)間和空間發(fā)揮功能的特定蛋白群體的研究，蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)庫等。／是指對在一定時(shí)間內(nèi)或某一特定環(huán)境條件下，細(xì)胞、組織或有機(jī)體內(nèi)所表達(dá)的所有蛋白質(zhì)(即蛋白質(zhì)組)進(jìn)行系統(tǒng)的、總的研究的在方式、結(jié)構(gòu)、功能的互相作用方式等，它不同于傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)學(xué)科，是在生物體或其細(xì)胞的整體蛋白質(zhì)水平上進(jìn)行的，從一個(gè)機(jī)體或一個(gè)細(xì)胞的蛋白質(zhì)整體活動(dòng)來揭示生命規(guī)律。包括表達(dá)蛋白質(zhì)組學(xué)和細(xì)胞圖形(功能)蛋白質(zhì)組學(xué)。)29.順反子(cistron)：編碼單條多肽鏈的一個(gè)遺傳功能單位，即轉(zhuǎn)錄單位。有單順反子1)結(jié)構(gòu)基因：。2)順式調(diào)控元件：因調(diào)控蛋白特異性識別和結(jié)合的3)基因家族：高度同源；③基因序列不同，編碼產(chǎn)物具有同源功能4)假基因：5)重復(fù)序列：列、6)真核生物基因組中的轉(zhuǎn)座子：是一些可以移動(dòng)的遺傳因素。7)端粒：A。一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目，除了配子(精子和卵子)為單倍體外，體細(xì)胞一 能，似乎為自己的目的而組織，故有自私DNA之稱，其移動(dòng)多被RNA介導(dǎo)(如哺乳動(dòng)物件。性，因此可用它們作為染色體上疾病基因座位的遺傳標(biāo)在轉(zhuǎn)錄水平，其次是翻譯水平。有兩種方式：起始調(diào)控(啟動(dòng)子調(diào)控)和終止調(diào)控(衰減子調(diào)的。1)轉(zhuǎn)錄起始調(diào)控的主要模式：半乳糖甘乙?；福Y(jié)構(gòu)基因上游有一個(gè)啟動(dòng)子(P)和一個(gè)操縱子(O)。啟動(dòng)子上游透酶作用進(jìn)入細(xì)胞，經(jīng)β-半乳糖甘酶催化，轉(zhuǎn)變成半乳糖和轉(zhuǎn)錄。PC乳糖的存在對基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生誘導(dǎo)作用。但由于葡萄糖的存1)阻遏蛋白的負(fù)性調(diào)節(jié)：在沒有乳糖的條件下，阻遏蛋白能與操縱序列O結(jié)合，抑制了RNA調(diào)控控2)翻譯的可調(diào)控性及調(diào)控方式：閱讀框上游的SD序列與起始密碼子之間的距離是不同，這使起始密碼子在翻譯起始部位定位的蛋白質(zhì)中都有一種蛋白(或兩種蛋白形成的一個(gè)復(fù)合物)可以結(jié)合到多順反子上游的一個(gè)特RFAGUAA1)轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成2)轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控式作用因子的激活及反式作用因子的用元件的結(jié)合③反式作用因子的作用方式：D.Oozing：一種反式作用因子與順式作用元件結(jié)合，促進(jìn)另一種反式作用因子與鄰近④反式作用因子的組合式調(diào)控作用：3)轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控AB接對基因表達(dá)的調(diào)控作用RNA作用來完成的。當(dāng)反式作用因子和順式作用元件結(jié)合后，將影響轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物的形成，從而影響轉(zhuǎn)錄的起始和效率。因此真核生物的轉(zhuǎn)錄調(diào)控特點(diǎn)在于：反式作用因子的結(jié)構(gòu)作用特點(diǎn)，以及反式作用因子如構(gòu)作用特點(diǎn)：DNA結(jié)合域有以下結(jié)構(gòu)模式：鋅指結(jié)構(gòu)、同源結(jié)構(gòu)域、亮氨酸拉鏈結(jié)構(gòu)、螺旋環(huán)螺旋結(jié)構(gòu)，堿因子與反式元件的相互作用。2)反式作用因子對轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控涉及反式作用因子的活性調(diào)節(jié)以及反式作用因子與順式作①活性調(diào)節(jié)：反式作用因子合成后，可以無活性的狀態(tài)存在，也可以在需要時(shí)才合成，合成后A達(dá)式調(diào)節(jié)：這類因子合成出來后就有活性，只在需要時(shí)才合成并迅速降解，不能積累。B基化修飾。C素的受體型的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，與激素結(jié)合后即被激活。D源或異源二聚體后，才有調(diào)節(jié)活性。②與順式元件的結(jié)合方式及特點(diǎn)：反式作用因子被激活后，即可結(jié)合上游啟動(dòng)子元件和增強(qiáng)子A.作用方式：反式作用因子的結(jié)合位點(diǎn)一般離其所調(diào)控的基因域或RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)的距離B.組合式調(diào)控作用：反式作用因子的作用可以是激活轉(zhuǎn)錄，也可以是抑制轉(zhuǎn)錄，但反式作用因子對基因表達(dá)的調(diào)控不是由單一因子完成的，而是幾種因子組合發(fā)揮特定的作用。不同因子的正或負(fù)調(diào)控的綜合結(jié)果，影響著基因的最后轉(zhuǎn)錄與否，而且產(chǎn)生的凈效應(yīng)也不是簡單加和的結(jié)一種反式作用因子可參與調(diào)控不同基因的表達(dá)，幾種不同的反式作用因子可以控制一個(gè)基達(dá)。1)目的基因：插入大腸桿菌表達(dá)的目的基因可以是真核基因也可以是原核基因，目的2)選擇合適的載體：所用載體必須是大腸桿菌表達(dá)載體pRSET質(zhì)粒。3)選擇合適的限制性酶分別切割載體和靶基因片段5)轉(zhuǎn)化：將重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞(用氯化鈣制備感受態(tài)細(xì)胞)可采用CaCl2制6)篩選：包括抗生素耐藥菌株的篩選及重組轉(zhuǎn)化子的篩選定9)表達(dá)產(chǎn)物的分離純化。A1)目的基因的提?。杭膊』虻奶崛。?)基因載體(克隆載體)的選擇與構(gòu)建；3)限制性酶切：將疾病基因切成不同大小的片段；4)連接到另一個(gè)DNA分子上(克隆載體)；達(dá)：對含有重組DNA的細(xì)胞進(jìn)行大量培養(yǎng)，檢測外源基因是否表達(dá)。A別與模板5’末端和3’末端互補(bǔ)配對的寡核苷酸片段為引物，在4種dNTP和耐熱的TaqDNA聚合酶及合適的緩沖體系中，通過人為控制溫度(高溫變性、低溫退火、中溫延伸)發(fā)生依賴DNA聚合酶的酶促合成反應(yīng)，循環(huán)多次后可使模板上介于兩個(gè)引物之間的目的DNA片段得到1)引物長度一般為15~30個(gè)核苷酸。2)引物中的堿基盡可能隨機(jī)分布，避免出現(xiàn)嘌呤、嘧啶的堆積現(xiàn)象。引物序列中3端3)引物自身內(nèi)部不應(yīng)存在互補(bǔ)序列以避免折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。4)兩個(gè)引物之間不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，尤其應(yīng)避免3端的互補(bǔ)重疊。5)引物的堿基序列不應(yīng)與非擴(kuò)增區(qū)域有同源性。要求在引物設(shè)計(jì)時(shí)采用計(jì)算機(jī)進(jìn)行輔6)引物3端是引發(fā)延伸的起點(diǎn)，因此一定要與模板DNA配對。每條引物的3末端序度及離子強(qiáng)度等)堿基互補(bǔ)配對結(jié)合，重新形成雙鏈；在這一過程中，核酸分子經(jīng)歷了離；③凝膠中的核酸變性(堿變性)；④Southern轉(zhuǎn)膜；⑤探針的制備；⑥Southern雜交(預(yù)雜交、雜交、洗脫)；⑦雜交結(jié)果的檢測。1)原位矯正病變基因：2)正常基因取代或干預(yù)：的表達(dá)，或通過破壞某個(gè)基因，使之不4、免疫調(diào)節(jié)、調(diào)節(jié)性基因治療、化療保護(hù)性基因治療、特異性細(xì)胞殺傷性基因治療、生殖細(xì)胞snRNA(核內(nèi)小分子RNA)在mRNA加工方面snoRNARNArRNA切割和修飾的成熟過程中4)RNAp