基因的表達(dá)教學(xué)設(shè)計優(yōu)質(zhì)資料(可以直接使用，可編輯優(yōu)質(zhì)資料，歡迎下載）

課題名稱基因的表達(dá)教學(xué)設(shè)計優(yōu)質(zhì)資料(可以直接使用，可編輯優(yōu)質(zhì)資料，歡迎下載）基因的表達(dá)（2021--2021屆高三一輪復(fù)習(xí)）科目生物學(xué)生年級高三課時1教師一、教材內(nèi)容分析本節(jié)課的教學(xué)內(nèi)容是2021—2021屆高三一輪復(fù)習(xí)之模塊2“遺傳、變異和進(jìn)化”的第2單元第3講“基因的表達(dá)”的知識內(nèi)容。本課主要是通過“思維辨析回顧”、“知識網(wǎng)絡(luò)重構(gòu)”和“例題精練精講”三個環(huán)節(jié)，讓學(xué)生著眼整體，變換視角，融匯貫通知識，鎖定考點(diǎn)，鞏固雙基，注重提高學(xué)生審題、答題、解決問題的能力，從而提高生物復(fù)習(xí)的有效性。二、教學(xué)目標(biāo)（知識與技能、過程與方法、情感態(tài)度與價值觀）知識與技能目標(biāo)（1）遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯(B)（2）基因與性狀的關(guān)系(B)過程與方法目標(biāo)利用PPT軟件完成的本堂課的“基因的表達(dá)”一輪復(fù)習(xí)任務(wù)。利用自編學(xué)案完成本堂課的“思維辨析”、“知識網(wǎng)絡(luò)重構(gòu)”和“精練精講”。夯實(shí)雙基，提高學(xué)生綜合運(yùn)用所學(xué)知識發(fā)現(xiàn)問題、提出問題和分析、解決實(shí)際問題的能力，以及提高學(xué)生理論聯(lián)系實(shí)際的能力。提高學(xué)生精確計算的能力。情感態(tài)度與價值觀目標(biāo)通過自主學(xué)習(xí)，提高學(xué)生敢于面對綜合題的信心。通過分組學(xué)習(xí)，增強(qiáng)學(xué)生的組織能力和團(tuán)隊(duì)協(xié)作精神。節(jié)時高效，愉快學(xué)習(xí)，快樂學(xué)習(xí)。重點(diǎn)（1）比較分析DNA和RNA（2）RNA的種類和功能（3）遺傳信息、密碼子、反密碼子（4）轉(zhuǎn)錄、翻譯與DNA復(fù)制的比較（5）基因表達(dá)過程中相關(guān)數(shù)據(jù)計算（6）掌握中心法則的內(nèi)容與各種生物的遺傳信息傳遞過程（7）理解基因控制生物性狀的途徑（8）理解基因與性狀之間的關(guān)系難點(diǎn)轉(zhuǎn)錄、翻譯與DNA復(fù)制的比較基（2）因表達(dá)過程中相關(guān)數(shù)據(jù)計算四、教學(xué)策略選擇與設(shè)計教學(xué)組織形式通過“思維辨析”回顧知識，進(jìn)而重構(gòu)“知識大網(wǎng)絡(luò)”，再通過“精練精講”強(qiáng)化加深，最后歸納總結(jié)。教學(xué)方法本課采用“任務(wù)驅(qū)動”、“問題──探究”等教學(xué)方法，以學(xué)生為主體，充分調(diào)動學(xué)生的學(xué)習(xí)積極性，調(diào)節(jié)課堂教學(xué)氣氛，使學(xué)生變被動學(xué)習(xí)為主動愉快的學(xué)習(xí)，使課堂能在生動、有趣、高效中進(jìn)行。學(xué)法指導(dǎo)本堂課傳授給學(xué)生的學(xué)法是“問題驅(qū)動下的自主學(xué)習(xí)──分組協(xié)作學(xué)習(xí)──歸納總結(jié)提升”。既鼓勵自主學(xué)習(xí)，又提倡某些問題的分組協(xié)作，提高課堂學(xué)習(xí)的有效性。教學(xué)媒體自編PPT課件板書設(shè)計五、教學(xué)環(huán)境及資源準(zhǔn)備本堂課在普通學(xué)生教室中完成，教室中具備PPT的相應(yīng)投影設(shè)備。六、教學(xué)過程教學(xué)過程教師活動學(xué)生活動設(shè)計意圖及資源準(zhǔn)備知識回顧，激情導(dǎo)入提出“什么是基因的表達(dá)”？回顧、思考，激發(fā)學(xué)習(xí)興趣通過提出問題，引導(dǎo)學(xué)生回顧相關(guān)內(nèi)容，引出本堂課的相關(guān)考綱要求高考考綱回顧PPT投影考綱能級要求，及考綱定位解讀觀看，思考強(qiáng)調(diào)本課題復(fù)習(xí)的具體考點(diǎn)考點(diǎn)1、2、3“DNA與RNA比較”、“RNA種類和功能”、“遺傳信息密碼子和反密碼子”（1）PPT投影相關(guān)“思維辨析”題思考，獨(dú)立完成引起學(xué)生的舊知回顧（2）重構(gòu)知識要點(diǎn)互助，團(tuán)隊(duì)完成構(gòu)建知識網(wǎng)絡(luò)，側(cè)重相關(guān)知識點(diǎn)之間的比較。（3）例題精選獨(dú)立完成，歸納解題模板學(xué)生精做精練，強(qiáng)化知識網(wǎng)絡(luò)，提高各項(xiàng)解題能力考點(diǎn)4、5“轉(zhuǎn)錄和翻譯”（1）PPT投影“轉(zhuǎn)錄和翻譯”的動畫觀看、思考，獨(dú)立完成引起學(xué)生的舊知回顧（2）總結(jié)“轉(zhuǎn)錄和翻譯”過程及相關(guān)的數(shù)據(jù)計算獨(dú)立完成構(gòu)建知識網(wǎng)絡(luò)，側(cè)重堿基互補(bǔ)配對及相關(guān)的數(shù)據(jù)計算。（3）例題精選+變式訓(xùn)練互助，團(tuán)隊(duì)完成學(xué)生精做精練，強(qiáng)化知識網(wǎng)絡(luò)，提高各項(xiàng)解題能力考點(diǎn)6“中心法則”（1）PPT投影問題思考，獨(dú)立完成讓2位學(xué)生黑板板書相關(guān)題目的遺傳信息流引起學(xué)生的舊知回顧（2）重構(gòu)知識大網(wǎng)絡(luò)獨(dú)立完成構(gòu)建知識大網(wǎng)絡(luò)，側(cè)重相關(guān)知識點(diǎn)之間的聯(lián)系，著眼整體，提綱摯領(lǐng)，培養(yǎng)學(xué)生語言規(guī)范表達(dá)能力考點(diǎn)7“基因控制性狀的途徑”（1）PPT投影精選例題互助，團(tuán)隊(duì)完成通過精選的例題，歸納總結(jié)出基因控制性狀的2條途徑（2）重構(gòu)知識大網(wǎng)絡(luò)無構(gòu)建知識大網(wǎng)絡(luò)，側(cè)重相關(guān)知識點(diǎn)之間的聯(lián)系，著眼整體，提綱摯領(lǐng)，考點(diǎn)“基因與性狀的關(guān)系”PPT投影精選例題互助，團(tuán)隊(duì)完成學(xué)生精做精練，強(qiáng)化知識網(wǎng)絡(luò)，構(gòu)建知識大網(wǎng)絡(luò)8、歸納總結(jié)查漏補(bǔ)缺，再次知識網(wǎng)絡(luò)總結(jié)本堂課的知識考點(diǎn)，強(qiáng)化考點(diǎn)要求和備考策略9、提能強(qiáng)化練PPT展示相關(guān)題目獨(dú)立完成檢測本堂課的學(xué)習(xí)效果教學(xué)流程圖開始開始導(dǎo)入新課導(dǎo)入新課課件參與觀看思考參與觀看思考高考考綱回顧課件高考考綱回顧課件思考記錄獨(dú)立完成獨(dú)立完成考點(diǎn)1、2、3思維辨析課件考點(diǎn)1、2、3考點(diǎn)1、2、3重構(gòu)知識大網(wǎng)絡(luò)課件考點(diǎn)4、5考點(diǎn)4、5動畫、圖示課件考點(diǎn)4、5考點(diǎn)4、5重構(gòu)知識大網(wǎng)絡(luò)課件考點(diǎn)4、5考點(diǎn)4、5例題精選課件教師補(bǔ)充教師補(bǔ)充學(xué)生歸納學(xué)生歸納總結(jié)考點(diǎn)6、7、8例題精選考點(diǎn)6、7、8例題精選課件獨(dú)立完成考點(diǎn)6、7、8考點(diǎn)6、7、8重構(gòu)知識大網(wǎng)絡(luò)課件教師查漏補(bǔ)缺教師查漏補(bǔ)缺師生納總結(jié)本節(jié)課題師生納總結(jié)本節(jié)課題提能強(qiáng)化練提能強(qiáng)化練課件結(jié)束結(jié)束七、教學(xué)評價設(shè)計學(xué)生課堂學(xué)習(xí)自我評價量表（略）八、幫助和總結(jié)本節(jié)課為高三生物一復(fù)習(xí)課。通過“思維辨析回顧”、“知識大網(wǎng)絡(luò)重構(gòu)”和“例題精練精講”等節(jié)，讓學(xué)生著眼整體，夯實(shí)雙基，融匯貫通知識，鎖定題點(diǎn)，注重提高學(xué)生審題、答題、解決問題的能力，節(jié)時高效，從而提高生物復(fù)習(xí)的有效性。在教學(xué)實(shí)施的過程中，發(fā)現(xiàn)學(xué)生掌握基礎(chǔ)知識的程度參差不齊，不擅長找出不同知識點(diǎn)之間的聯(lián)系，思維不夠發(fā)散，審題和解題的能力也有待提高。教學(xué)實(shí)施的過程中，還要注意對學(xué)生課堂的調(diào)控，控制教學(xué)速度的順利進(jìn)行。

教師要提倡、維護(hù)生生、師生平等交流互動的人際關(guān)系，促進(jìn)師生和生生的思維碰撞和情感的交流，從而達(dá)到三維目標(biāo)的要求。定義:按照預(yù)先設(shè)計好的藍(lán)圖，利用現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，特別是酶學(xué)技術(shù)，對遺傳物質(zhì)DNA直接進(jìn)行體外重組操作與改造,將一種生物（供體)的基因轉(zhuǎn)移到另外一種生物（受體)中去，從而實(shí)現(xiàn)受體生物的定向改造與改良?；静襟E：(分、切、接、轉(zhuǎn)、增、檢)施工材料的準(zhǔn)備：目的基因、載體、工具酶和受體細(xì)胞（宿主）的準(zhǔn)備。用限制性內(nèi)切酶分別將外源DNA和載體分子切開。目的基因與載體DNA的體外重組,形成重組DNA分子。學(xué)號：班級：姓名：《生物化學(xué)與生物分子學(xué)實(shí)驗(yàn)》——分子生物學(xué)設(shè)計性實(shí)驗(yàn)開題報告實(shí)驗(yàn)課題：綠色熒光蛋白的基因克隆及表達(dá)指導(dǎo)老師：作者姓名：所在院系：小組編號：小組成員：完成時間：成都醫(yī)學(xué)院ChengDuMedicalCollege題目：綠色熒光蛋白（GFP）基因的基因克隆及在大腸桿菌中的表達(dá)立題依據(jù)：隨著分子生物學(xué)和基因工程技術(shù)的迅速發(fā)展和廣泛應(yīng)用,人們根據(jù)自己的意愿有目的、有計劃、有根據(jù)、有預(yù)見地將外源基因?qū)雱游锛?xì)胞內(nèi),使外源基因進(jìn)行表達(dá)、闡明基因表達(dá)的調(diào)控機(jī)理或者通過與染色體基因組進(jìn)行穩(wěn)定整合，將生物性狀傳遞給子代動物的研究方興未艾[1]。1.選材：大腸桿菌大腸桿菌是第一個用于重組蛋白生產(chǎn)的宿主菌，它不僅具有遺傳背景清楚、培養(yǎng)操作簡單、轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)導(dǎo)效率高、生長繁殖快、成本低廉、可以快速大規(guī)模地生產(chǎn)目的蛋白等優(yōu)點(diǎn)。而且其表達(dá)外源基因產(chǎn)物的水平遠(yuǎn)高于其它基因表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)的目的蛋白量甚至能超過細(xì)菌中蛋白量的30%，因此大腸桿菌是目前應(yīng)用最廣泛的蛋白質(zhì)表達(dá)系統(tǒng)。2.基因標(biāo)記技術(shù)基因標(biāo)記技術(shù)是近年來發(fā)展起來的分子生物學(xué)技術(shù)。熒光蛋白基因在標(biāo)記基因方面由于具有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)而引起了科學(xué)家的廣泛關(guān)注，現(xiàn)已被普遍應(yīng)用到分子生物學(xué)研究的各個方面。熒光蛋白是海洋生物體內(nèi)的一類發(fā)光蛋白，分為綠色熒光蛋白、藍(lán)色熒光蛋白、黃色熒光蛋白和紅色熒光蛋白[2]。3.綠色熒光蛋白從水母(Aequoreavictoria)體內(nèi)發(fā)現(xiàn)的發(fā)光蛋白。分子質(zhì)量為26kDa，由238個氨基酸構(gòu)成，第65～67位氨基酸(Ser-Tyr-Gly)形成發(fā)光團(tuán)，是主要發(fā)光的位置。其發(fā)光團(tuán)的形成不具物種專一性，發(fā)出熒光穩(wěn)定，且不需依賴任何輔因子或其他基質(zhì)而發(fā)光。綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)化入宿主細(xì)胞后很穩(wěn)定，對多數(shù)宿主的生理無影響，是常用的報道基因?！緦?shí)驗(yàn)?zāi)康摹垦芯烤G色熒光蛋白（GreedFluorescentProtein，GFP）基因的基因克隆及在大腸桿菌中的表達(dá)?！狙芯恳饬x】研究綠色熒光蛋白在大腸桿菌體內(nèi)的基因克隆和表達(dá)。通過質(zhì)粒重組形成所需要的重組質(zhì)粒pET-28a-GFP，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌體內(nèi)，通過酶切、PCR及用IPTG誘導(dǎo)檢測是否在大腸桿菌體內(nèi)誘導(dǎo)表達(dá)成功。根據(jù)電泳結(jié)果及熒光現(xiàn)象得出結(jié)論，重組質(zhì)粒在大腸桿菌體內(nèi)成功誘導(dǎo)表達(dá)。GFP的應(yīng)用特點(diǎn)檢測方便：不需要外加底物和輔助因子，用內(nèi)眼就可以觀察到，在長紫外光照射下特別漂亮，以此作為標(biāo)記，觀察表達(dá)產(chǎn)物。實(shí)驗(yàn)題目包含的內(nèi)容本實(shí)驗(yàn)的目的是通過BamHI和NotI兩種限制性內(nèi)切酶的消化把EGFP基因從pEGFP-N3質(zhì)粒中克隆出來，或者用PCR方法把EGFP基因從pEGFP—N3質(zhì)粒中擴(kuò)增出來。并定向插入到表達(dá)載體pET-28a質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)(MCS)中，用此重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，在IPTG的誘導(dǎo)下表達(dá)出帶有N端His-Tag的融合蛋白。表達(dá)了GFP的菌體在離心管中則會呈黃綠色，在紫外光激發(fā)下發(fā)射出特異的綠色熒光，從而證明了目的蛋白的表達(dá)是否成功。另外在菌體總蛋白的SDS電泳圖譜中如果出現(xiàn)了明顯的誘導(dǎo)條帶，則條帶中蛋白濃度與誘導(dǎo)時間呈正相關(guān)?！靖鶕?jù)現(xiàn)有的知識和技能來設(shè)計進(jìn)行實(shí)驗(yàn)】1.查詢兩個質(zhì)粒特點(diǎn)的資料：pEGFP-N3質(zhì)粒編碼野生型GFP的紅移(熒光波長較大)變異體蛋白，具有更強(qiáng)的熒光(在485nm激發(fā)下比野生型強(qiáng)35倍)和在哺乳動物細(xì)胞中有較好的表達(dá)。激發(fā)峰在488nm，發(fā)射峰在507nm。pET-28a質(zhì)粒載體上面攜帶一個N-terminalHisTag／Thrombin／T7tag結(jié)構(gòu)以及一個可以選擇的C-terminalHisTag?？寺”磉_(dá)區(qū)域的編碼框由T7RNA聚合酶轉(zhuǎn)錄。2.根據(jù)查詢的資料，確定兩種途徑可以到達(dá)目標(biāo)第一種方法：用限制性內(nèi)切酶方法，如果選定內(nèi)切酶的方式去做實(shí)驗(yàn)，如何選擇內(nèi)切酶，選哪種內(nèi)切酶即合用又經(jīng)濟(jì)。根據(jù)兩個質(zhì)粒結(jié)構(gòu)的特點(diǎn)，要在多種內(nèi)切酶中進(jìn)行選擇，考慮pEGFP片段完整又考慮到被克隆的目標(biāo)載體表達(dá)區(qū)域的編碼框正確性。使用Notl酶，Bamhl酶，這是一對最合適的內(nèi)切酶。第二種方法：用PCR基因擴(kuò)增方式達(dá)到目的。如果用PCR方法去做實(shí)驗(yàn)，必需根據(jù)pEGFP的序列設(shè)計引物。【實(shí)驗(yàn)原理】1.質(zhì)粒重組：先用限制性內(nèi)切酶切割質(zhì)粒DNA和目的DNA片段,然后體外使兩者相連接,再用所得到重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化細(xì)菌,即可完成。2.PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補(bǔ)的寡核苷酸引物。PCR由變性--退火--延伸三個基本反應(yīng)步驟構(gòu)成。合成一條新的與模板DNA鏈互補(bǔ)的半保留復(fù)制鏈重復(fù)循環(huán)變性--退火--延伸三過程，就可獲得更多的“半保留復(fù)制鏈”，而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2～4分鐘，2～3小時就能將待擴(kuò)目的基因擴(kuò)增放大幾百萬倍。PCR技術(shù)是KaryMullis在1985年建立起來的在細(xì)胞體外合成DNA的一種方法。依DNA半保留復(fù)制原理，利用DNA聚合酶依賴于DNA模板的特性，在附加的兩個引物與模板雜交之后，按堿基配對原則經(jīng)酶促反應(yīng)合成DNA片段，包括模板變性、引物退火及用DNA聚合酶延伸兩個引物之間DNA的一定次數(shù)的重復(fù)循環(huán)，使包括在兩個引物5'端限定的特異性片段形成指數(shù)式積累。整個過程操作簡單，可在短時間內(nèi)在小管中獲得大量的特意的DNA拷貝，這一特點(diǎn)使PCR技術(shù)很快被應(yīng)用到了分子生物研究的廣大領(lǐng)域[3]?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】[1]梁國棟.最新分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M].北京:科學(xué)技術(shù)出版社,2001,174.[2]賈艷華，李國勛，張杰熒光蛋白及其應(yīng)用[3]魏春紅，李毅主編聚合酶鏈反應(yīng)PCR現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)高等教育出版社，2006.7:45-46【研究方案】通過分別將DH-5α(pEGFP-N3)和DH-5α(pET-28a)提取質(zhì)粒、酶切并連接形成重組質(zhì)粒pET-28a-GFP，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入E.coliDH-5α感受態(tài)細(xì)胞中進(jìn)行轉(zhuǎn)化,通過限制性核酸內(nèi)切酶NotI與BamH1和PCR對所建質(zhì)粒進(jìn)行分析鑒定后,通過轉(zhuǎn)化的方法把含綠色熒光蛋白（GFP）外源基因轉(zhuǎn)入大腸桿菌體BL-21內(nèi)進(jìn)行表達(dá)，再用IPTG誘導(dǎo)GFP基因表達(dá)，根據(jù)觀察是否可以看到顯現(xiàn)綠色，判斷GFP基因是否在大腸桿菌中成功表達(dá)。【關(guān)鍵詞】綠色熒光蛋白；質(zhì)粒重組；原核表達(dá)；誘導(dǎo)表達(dá)【技術(shù)路線及實(shí)驗(yàn)方案】【實(shí)驗(yàn)材料及試劑】注：最初始的兩個質(zhì)粒pEGFP-N3質(zhì)粒，pET—28a質(zhì)粒。1.實(shí)驗(yàn)材料克隆菌E.coliDH-5a、表達(dá)菌BL-21，質(zhì)粒pET-28a和pEGFP-N3，引物，限制性內(nèi)切酶BamH1、NotⅠ。2.實(shí)驗(yàn)試劑SIM-f140SANYOEppendof離心機(jī)電泳儀電子天平臺式離心機(jī)控溫磁力攪拌器調(diào)溫電熱套pH計冰箱臺式冷凍恒溫振蕩器手提紫外燈生物潔凈工作臺瓊脂糖凝膠電泳電泳裝置電熱恒溫水溫箱凝膠成像分析系統(tǒng)酒精燈培養(yǎng)皿移液槍槍頭接種環(huán)酒精棉球滅菌槍頭Parafilm膜離心管IceMaker【實(shí)驗(yàn)方法】【具體實(shí)驗(yàn)步驟】1.重組質(zhì)粒的構(gòu)建重組質(zhì)粒pET-28a-GFP的構(gòu)建流程2.DH-5α和BL-21感受態(tài)細(xì)胞的制備。4.堿法提質(zhì)粒酶切鑒定1)取提取的質(zhì)粒8l于另一微量離心管中，加入2lBamHI和NotI的酶切混合液，輕彈管外混勻反應(yīng)物。2)離心，使溶液聚集在管底部3)37℃，酶切反應(yīng)。6.瓊脂糖凝膠電泳7.PCR-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)pET-28a-GFP重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到表達(dá)菌BL-21【預(yù)期結(jié)果與分析】1.提取質(zhì)粒加入溶液1渾濁；加入溶液2變澄清；加入溶液3出現(xiàn)白色絮狀沉淀；加入氯仿抽提溶液分層2.重組質(zhì)粒構(gòu)建的鑒定Lane1：Markerprotein(標(biāo)記蛋白)；Lane2：含目的基因的重組質(zhì)粒，得到有兩條帶，可知前面第一條帶為GFP基因片段，第二條帶為質(zhì)粒載體，故成功構(gòu)建了重組質(zhì)粒pET-28a-GFP。3.PCR檢測結(jié)果PCR擴(kuò)增后產(chǎn)物經(jīng)過電泳檢測，如果可以看到明顯的一條亮帶，則可知eGFP基因成功連接到pET-28a載體。如果其前面有不明顯的彌散的條帶，則為引物二聚體。4.IPTG誘導(dǎo)表達(dá)分別在日光燈和紫外光下進(jìn)行照射，如果攜帶重組質(zhì)粒pET-28a-GFP的大腸桿菌BL-21用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)后呈現(xiàn)綠色，說明含外源基因GFP的質(zhì)粒在大腸桿菌BL-21體內(nèi)成功表達(dá)；而沒有經(jīng)IPTG誘導(dǎo)的菌體則不發(fā)出綠色熒光?！居懻摗咳绻亟M質(zhì)粒轉(zhuǎn)化率不高，其原因可能有以下幾點(diǎn)：（1）生長時期：實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在對數(shù)中期的大腸桿菌易生感受態(tài)，轉(zhuǎn)化時菌濃度應(yīng)控制在不超過107個/ml。濃度過高或者過低都會影響轉(zhuǎn)化效率。（2）CaCl2法0℃放置時間的影響：細(xì)菌經(jīng)0℃CaCl2處理后轉(zhuǎn)化率隨時間的推移而增加，24h達(dá)到最高，之后轉(zhuǎn)化率逐漸下降。（3）化合物及無機(jī)離子的影響：在鈣離子的基礎(chǔ)上，聯(lián)合其他二價金屬離子或還原劑等物質(zhì)處理細(xì)菌，可使轉(zhuǎn)化率提高100-1000倍。（4）質(zhì)粒大小、構(gòu)型的影響：用于轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA應(yīng)