雞類(lèi)patatin脂肪酶家族主要參考文獻(xiàn)JaniSaarela,etal.

Thepatatin-likelipasefamilyinGallusgallus

BMCGenomics.2008,9:281?GregoryR.Steinberg,etal.Adipocytetriglyceridelipaseexpressioninhumanobesity

AmJPhysiolEndocrinolMetab.2007,293:E958–E964MartinaSchweiger,etal.AdiposeTriglycerideLipaseandHormone-sensitiveLipaseAretheMajorEnzymesinAdiposeTissueTriacylglycerolCatabolism

JBIOCHEM.2006,281(52):40236–40241研究背景脂肪組織是機(jī)體最大的能量?jī)?chǔ)存庫(kù)，當(dāng)機(jī)體需要能量的時(shí)候，儲(chǔ)存在脂肪組織的甘油三酯在脂酶的作用下被分解為游離脂肪酸,釋放入血液參與能量代謝。如果脂解作用出現(xiàn)障礙或病變，就會(huì)影響機(jī)體能量的平衡，進(jìn)而引發(fā)肥胖和胰島素抵抗等疾病。卵生動(dòng)物的卵黃是胚胎發(fā)育所需營(yíng)養(yǎng)和調(diào)控因子的主要來(lái)源，而卵黃是脂質(zhì)和蛋白質(zhì)從母體肝臟轉(zhuǎn)運(yùn)到卵泡中的卵子累積而成。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1.Derco產(chǎn)蛋母雞：30-40周齡公雞：購(gòu)自海德?tīng)柟?.受精蛋在38度和70%的濕度條件下孵化11天后取出，取卵黃囊膜用于RNA抽提3.白色(<5mm)和黃色(5-12mm)有卵黃的小卵泡4.來(lái)自F5-F1級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞5.白色脂肪組織：取自雞的腹腔6.其它雞組織樣品，液氮保存。實(shí)驗(yàn)方法RT-PCR實(shí)時(shí)熒光定量PCRInsilicocharacterization實(shí)驗(yàn)結(jié)果一.雞PNPLAs基因家族新基因鑒定及序列的獲得PNPLA4

又叫g(shù)enesequence2(GS2)和iPLA2η。它和TGs水解有關(guān)，在人的所有組織中有PNPLA4的表達(dá)。PNPLA6

又名neuropathytargetesterase(NTE)。在人的血液淋巴細(xì)胞和老鼠大腦中有表達(dá)，與膜脂的代謝及與神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞相互作用的信號(hào)傳導(dǎo)有關(guān)。PNPLA7也叫NTE-relatedesterase(NRE)，與PNNPL6有很高的相似性。它高表達(dá)于前列腺、胰腺和脂肪組織。胰島素能抑制它的表達(dá)。有研究表明它是一種溶血磷脂酶。PNPLA8也叫iPLA2γ，中等水平表達(dá)于人的各種組織，在人脂肪細(xì)胞早期分化時(shí)表達(dá)上調(diào)。PNPLA9主要在脂肪組織和大腦中表達(dá)，脂肪細(xì)胞分化后期表達(dá)增加。從中國(guó)田鼠卵細(xì)胞分離的PNPLA9蛋白能夠分解二棕櫚酰磷脂酰膽堿，而錨蛋白重復(fù)序列是該酶活性所必需的。PNPLA1和PNPLA5雞PNPLAs蛋白Patatin結(jié)構(gòu)域氨基酸序列比對(duì)圖二.PNPLAs各基因表達(dá)情況三.Insilicocharacterization預(yù)測(cè)ATGL在382-389位氨基酸殘基處有一個(gè)核定位信號(hào)(VKKAKKKL)，而人的相應(yīng)氨基酸殘基VMRAKRKL并不被預(yù)測(cè)為枋定位信號(hào)。PNPLA1，6，7，8和9蛋白都含有一個(gè)或多個(gè)酪氨酸激酶磷酸化位點(diǎn)；而且PNPLA6和7還含有兩個(gè)環(huán)核苷酸結(jié)合位點(diǎn)。和人的PNPLA9相比，雞的PNPLA9含有幾個(gè)錨蛋白重復(fù)序列，表明可能與蛋白互相有關(guān)。除了PNPLA8外，其它PNPLAs和CGI58蛋白都是球狀蛋白。所有完全克隆的PNPLAs，只有PNPLA4含有信號(hào)肽。PNPLA4和7含有跨膜域，人的PNPLA預(yù)測(cè)不含跨膜域，但生化證據(jù)表明它與神經(jīng)元細(xì)胞膜有關(guān)，預(yù)示雞的PNPLA6可能含有相似功能。所有蛋白都有糖基化位點(diǎn)討論1.絲氨酸-組氨酸-天冬氨酸三聯(lián)體大部分的脂肪酶的催化作用都是通過(guò)絲氨酸-組氨酸-天冬氨酸三聯(lián)體的親核攻擊產(chǎn)生的，而patation家族的酶是通過(guò)絲氨酸-天冬氨酸二聯(lián)體引起的，該絲氨酸位于一個(gè)叫“親核肘”結(jié)構(gòu)當(dāng)中。2.ATGL是人們發(fā)現(xiàn)的與TG水解活性密切相關(guān)的第二種酶。2004年前，人們認(rèn)為HSL是TG分解的限速酶，但Zimmermann等人在研究HSL-ko小鼠時(shí)發(fā)現(xiàn)，HSL-ko小鼠并沒(méi)有發(fā)生肥胖，進(jìn)而發(fā)現(xiàn)了ATGL。人ATGL缺陷會(huì)引起中性脂肪貯積癥，和CGI58異常引起的是同一種病。Schweiger等人利用肥胖和消瘦人群對(duì)ATGL等PNPLAs家族和HSL進(jìn)行比較研究發(fā)現(xiàn)在肥胖患者中ATGL和HSL表達(dá)增高，但與體重指數(shù)無(wú)關(guān)；皮下脂肪中ATGL蛋白表達(dá)減少而ATGLmRNA表達(dá)量增高；皮下脂肪中TG水解活性減少盡管各各種水解酶mRNA表達(dá)水平提高。他們的結(jié)果還表明ATGL是TG水解酶活性必需的，但它的表達(dá)量與皮下和內(nèi)臟脂肪組織中TG水解酶活性沒(méi)有相關(guān)。3.類(lèi)patatin脂肪酶家族在不同物種中的表達(dá)情況存在顯著的差異。如PNPLA3在胎兒和成人肝臟中高表達(dá)，而在鼠肝臟中表達(dá)很少，在雞中骨骼肌中表達(dá)最高；PNPLA4在人心臟和骨骼肌中表達(dá)量高，但在雞中的表達(dá)量只是中等水平，而在睪丸中表達(dá)最高。4.進(jìn)一步研究類(lèi)patatin脂肪酶家族將能進(jìn)一步了解脂肪沉積和分