1顯色反應(yīng)

6.3顯色反應(yīng)與分析條件的選擇2顯色劑3顯色條件的確定5測(cè)定中的干擾以及消除方法4測(cè)量條件的選擇1為什么顯色？官能團(tuán)強(qiáng)吸收直接測(cè)定UV-VIS官能團(tuán)弱吸收衍生化反應(yīng)UV-VIS顯色反應(yīng)通常通過(guò)顯色反應(yīng)生成吸光系數(shù)大的有色物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定，以提高靈敏度332+桔紅色510鄰二氮菲有機(jī)物質(zhì)無(wú)機(jī)物質(zhì)1顯色反應(yīng)

被測(cè)組分轉(zhuǎn)變?yōu)橛猩衔锏姆磻?yīng)2對(duì)顯色反應(yīng)的要求

選擇性好，顯色條件易于控制，重現(xiàn)性好；靈敏度高，一般ε>104;生成的顯色化合物穩(wěn)定；顯色化合物與顯色劑的顏色差異大，顯色劑在測(cè)定波長(zhǎng)處無(wú)明顯吸收,對(duì)照性好,Δmax>60nm32顯色劑無(wú)機(jī)顯色劑：有機(jī)顯色劑：形成的絡(luò)合物穩(wěn)定、選擇性好，靈敏度高等，常用5有機(jī)顯色劑CH3－C－C－CH3HO－NN－OH＝＝NNOHCOOHSO3HOO型：NNNOH

OHON型：PARNHNHNSNS型：雙硫腙，能與20多重金屬離子形成有色鰲合物NN型：丁二酮肟鄰二氮菲磺基水楊酸63顯色條件的確定——單因素試驗(yàn)法CRCR1）顯色劑用量（λMAX

CM、pH一定）作A~CR曲線，尋找適宜CR范圍ACR

一般選擇線性范圍內(nèi)有最大吸光度、且顯色劑用量最少的點(diǎn)。在測(cè)定波長(zhǎng)一定的條件下，影響顯色反應(yīng)的因素有：顯色劑用量、pH、溫度、反應(yīng)時(shí)間、干擾組分等

7pH3～8為適宜的酸度范圍鄰二氮菲－亞鐵反應(yīng)完全程度與pH的關(guān)系

9固定CM、CR，作A~pH曲線，尋找適宜pH范圍。pH1<pH<pH2ApHpH1pH2103)顯色溫度及顯色時(shí)間(CM、CR、pH一定)作A~T曲線，尋找適宜反應(yīng)溫度。ATATATAtAt反應(yīng)時(shí)間的選擇:作A~t曲線，尋找適宜反應(yīng)時(shí)間。114測(cè)量條件的選擇無(wú)干擾，選擇max有干擾時(shí)1)測(cè)量波長(zhǎng)的選擇2)待測(cè)溶液吸光度的選擇控制A=0.15~1T=70%~10%方法1、非單色光影響小2、靈敏度高A選擇C選擇LAmax133)參比液的選擇原則：扣除比色皿、樣品基體（非待測(cè)組分）和顯色劑的吸收以顯色反應(yīng)為例進(jìn)行討論M+R=M-Rmax試樣 顯色劑溶劑吸光物質(zhì)參比液組成無(wú)吸收無(wú)吸收光學(xué)透明溶劑基體吸收無(wú)吸收吸收不加顯色劑的試液無(wú)吸收吸收吸收顯色劑+溶劑基體吸收吸收吸收吸收顯色劑+試液+待測(cè)組分的掩蔽劑若欲測(cè)M-R的吸收maxA（樣）=A（待測(cè)吸光物質(zhì)）+

A（干擾）+A（池）A（參比）=

A（干擾）+A（池）14例:鄰二氮菲光度法測(cè)水中的Fe，若顯色劑及其他試劑有顏色，參比溶液為不含F(xiàn)e的溶劑+所有試劑。若待測(cè)樣品中有干擾組分與顯色劑有反應(yīng),掩蔽干擾組分，參比溶液為待測(cè)樣品+所有試劑+干擾組分掩蔽劑參比溶液選擇舉例151、絕對(duì)法：測(cè)定樣品的吸光度，由A=εcL求出c，但須知吸光系數(shù)ε、光程L2、標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照法：在同樣條件下分別測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液（濃度為已知c標(biāo)）和樣品溶液的吸光度，然后求出被測(cè)樣品的濃度3、標(biāo)準(zhǔn)曲線法：校正4、回歸分析法：在一定條件下，測(cè)定已知濃度的多個(gè)不同樣品的吸光度，用最小二乘法擬合出線性方程，再測(cè)定未知樣品的吸光度，利用擬合方程求出被測(cè)樣品濃度5、解聯(lián)立方程組：利用吸光度的加和性，求多組分的濃度6、雙波長(zhǎng)分光光度法：自學(xué)7、示差分光光度法：透光率調(diào)零和100%的方法不同用cs>cx的標(biāo)準(zhǔn)溶液調(diào)T=0%或用cs<cx的標(biāo)準(zhǔn)溶液調(diào)T=100%6.4吸光光譜法的定量方法單組分測(cè)定多組分測(cè)定171單組分的測(cè)定：標(biāo)準(zhǔn)曲線法微量鐵的測(cè)定氨基酸的測(cè)定鄰二氮菲法茚三酮法蛋白質(zhì)的測(cè)定考馬斯亮藍(lán)法總磷的測(cè)定磷鉬藍(lán)法營(yíng)養(yǎng)鹽的測(cè)定…….18定量校正目的：建立測(cè)定的分析信號(hào)與被分析物濃度之間的關(guān)系。一般用與被分析物質(zhì)相同的標(biāo)準(zhǔn)試樣進(jìn)行校正。①工作曲線法（外標(biāo)法）：是一種最基本的方法。用分析物的純樣準(zhǔn)確配置一系列已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)試樣，測(cè)得每一濃度對(duì)應(yīng)的吸光度A后，以A對(duì)濃度C作圖。A=Kc19②標(biāo)準(zhǔn)加入法（增量法）——能減少或消除基體效應(yīng)的影響將已知量的標(biāo)準(zhǔn)試樣加入到一定量的待測(cè)試樣中，測(cè)得試樣量和標(biāo)準(zhǔn)試樣量的總響應(yīng)值。具體做法：將一系列已知量待測(cè)物的標(biāo)準(zhǔn)樣品分別加入到幾等份的待測(cè)樣品中，配制成濃度為(cx+0)，(cx+c1),(cx+c2),(cx+c3)……..，得到和待測(cè)樣品有相同基體的標(biāo)準(zhǔn)系列(加標(biāo)，spiking)；通過(guò)儀器分別測(cè)量以上系列的響應(yīng)值S0，S1，S2，S3，S4……；以標(biāo)樣濃度c對(duì)響應(yīng)信號(hào)S作圖，再將直線外推與濃度軸相交于一點(diǎn)(下圖)，求得樣品中待測(cè)物濃度cx。21cx0.00.20.0102030-10濃度，cAA2A3A4A10.40.60.81.01.2

當(dāng)樣品量很少時(shí)，可在一份樣品中加標(biāo)，加一次作一次測(cè)量，可得到上述方法相同的結(jié)果；

當(dāng)覺(jué)得上述過(guò)程麻煩時(shí)，可只加標(biāo)一次，分別測(cè)量樣品和加標(biāo)樣品的儀器響應(yīng)，再直接通過(guò)公式Cx=CsAx/(AT-Ax)計(jì)算222多組分的測(cè)定解聯(lián)立方程法AXY12根據(jù)吸光度加合性原則解聯(lián)立方程，可求得Cx,Cy為物質(zhì)的特征參數(shù)，可通過(guò)配制標(biāo)準(zhǔn)溶液測(cè)得。ACs(x)23繪制特征吸收曲線①配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液0、C標(biāo)1C標(biāo)2。。。，顯色反應(yīng)：Fe2++3phen=Fe(phen)2+3②測(cè)量同一濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液不同波長(zhǎng)下的吸光度，每隔10nm測(cè)定一次，找出最大的吸收波長(zhǎng)λmax(每變化波長(zhǎng)，用空白溶液重新調(diào)零)（λmax=510nm）Fe2+的測(cè)定③用1cm比色皿在λmax=510nm下測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度A標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線A標(biāo)~

C標(biāo)④未知水樣顯色反應(yīng)，測(cè)未知水樣的A未，在該標(biāo)準(zhǔn)曲線上找出相應(yīng)的C未1鐵的測(cè)定25總鐵的測(cè)定在水樣中加NH2OH·HCl（鹽酸羥胺）或抗壞血酸還原Fe3+:重復(fù)Fe2+的測(cè)定步驟測(cè)量范圍：水中0.03~5.0mg/L的鐵26②蒸餾-滴定法適合于氨氮濃度較高的水樣，方法檢出下限為0.2mg/L。先用蒸餾法將氨蒸出，吸收于硼酸溶液中，再用酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定餾出液中的銨③電極法是利用氨氣敏復(fù)合電極進(jìn)行氨氮的定量測(cè)試，該法不受水樣顏色和濁度的干擾，水樣不必進(jìn)行預(yù)處理，測(cè)定范圍為0.03-1400mg/L。29N－(1-萘基)－乙二胺比色法在酸性溶液中，NO2－與對(duì)氨基苯磺酰胺生成重氮鹽：

重氮鹽與N-（1-萘基）-乙二胺偶聯(lián)生成紅色染料：

（紅色染料）（λmax=540nm）2）亞硝酸鹽氮：

N－(1-萘基)－乙二胺比色法（GB13580.7-92）、α－萘胺比色法（GB13589.5-92）和分光光度法（GB7493-87）、離子色譜法等。303）硝酸鹽氮硝酸鹽氮的測(cè)定方法主要有酚二磺酸光度法（GB74８0-87）、鎘柱還原法、紫外分光光度法、離子色譜法和電極流動(dòng)法等。

31①酚二磺酸光度法黃色化合物（λmax=410nm）32②紫外分光光度法水樣經(jīng)預(yù)處理后，先在波長(zhǎng)220nm處測(cè)一次吸光度，此時(shí)，硝酸鹽和溶解有機(jī)物均有吸收。再在波長(zhǎng)275nm處測(cè)一次吸光度，此時(shí)有機(jī)物有吸收而硝酸鹽無(wú)吸收。根據(jù)兩次吸光度值，引入吸光度的經(jīng)驗(yàn)校正值A(chǔ)校，進(jìn)行定量測(cè)定。經(jīng)驗(yàn)校正值為：A校＝A220－2A275式中，A220—220nm波長(zhǎng)處測(cè)得的吸光度；A275—275nm波長(zhǎng)處測(cè)得的吸光度。33③麝香草酚分光光度法測(cè)量原理：硝酸鹽和麝香草酚在濃硫酸溶液中形成硝基酚化合物，在堿性溶液中發(fā)生分子重排，生成黃色化合物，415nm下測(cè)定。

適用于低濃度水樣中硝酸鹽氮的測(cè)定，最低檢測(cè)質(zhì)量濃度為0.12mg/L硝酸鹽氮（以N計(jì)）。

干擾與消除方法：亞硝酸鹽對(duì)本規(guī)范呈正干擾，可用氨基磺酸銨除去；氯化物對(duì)本規(guī)范呈負(fù)干擾，可用硫酸銀消除344）凱氏氮?jiǎng)P氏氮是指以凱氏（Kjeldahl）法測(cè)得的含氮量，包括氨氮和在此條件下能被轉(zhuǎn)化為銨鹽而測(cè)定的有機(jī)氮化合物。在測(cè)定凱氏氮和氨氮之后，其差值即為有機(jī)氮。生活污水和食品、生物制品和制革等工業(yè)廢水中常含較多的有機(jī)氮化合物，并以蛋白質(zhì)及其分解產(chǎn)物（多肽和氨基酸）為主。35凱氏氮的測(cè)定

硫酸消解后的水樣在堿性條件下可蒸餾出氨，用硼酸溶液吸收。反應(yīng)式為：可根據(jù)水樣的具體情況，選用納氏試劑光度法或滴定法測(cè)定其含量。該法所測(cè)得的有機(jī)氮化合物為蛋白質(zhì)、氨基酸、核酸、尿素等，不包括疊氮、聯(lián)氮、偶氮、硝基氮等物質(zhì)。若將水樣先行蒸餾除去氨氮，再按凱氏法進(jìn)行測(cè)定，可直接測(cè)得有機(jī)氮化合物365）總氮測(cè)試方法有過(guò)硫酸鉀氧化－紫外分光光度法（GB１１８９４-８９）和加和法（凱氏氮、硝態(tài)氮）、儀器法等。過(guò)硫酸鉀氧化－紫外分光光度法測(cè)定原理：在120－124℃的堿性介質(zhì)條件下，用過(guò)硫酸鉀做氧化劑，不僅可以將水中的氨氮和亞硝酸鹽氮氧化為硝酸鹽，同時(shí)可以將大部分有機(jī)氮化合物氧化為硝酸鹽。然后用紫外分光光度法測(cè)定。該法主要適用于湖泊、水庫(kù)、江河