驗(yàn)證題目凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證方案編號VLDVP-實(shí)施部門生產(chǎn)部頁碼第1頁共10頁附錄生效日期年月曰起草人及日期：審批人及日期：審核：批準(zhǔn)：驗(yàn)證小組組長：驗(yàn)證小組成員：驗(yàn)證題目凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證方案編號VLDVP-實(shí)施部門生產(chǎn)部頁碼第2頁共10頁目錄概述驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基性能測試模擬灌裝過程操作規(guī)程及操作人員控制操作過程及無菌環(huán)境控制與監(jiān)測取樣計(jì)劃及取樣點(diǎn)模擬灌裝微生物培養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)果評價再驗(yàn)證安排驗(yàn)證結(jié)果與評價驗(yàn)證題目凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證方案編號VLDVP-實(shí)施部門生產(chǎn)部頁碼第3頁共10頁1、概述無菌灌裝是指由掌握了無菌操作的人員在一個有控制的環(huán)境中將經(jīng)滅菌的無菌藥液灌封于滅菌后的容器中，制成無菌藥物的過程。無菌灌裝驗(yàn)證，是在與無菌灌裝生產(chǎn)過程有關(guān)的其他驗(yàn)證，如：潔凈廠房、公用系統(tǒng)、滅菌設(shè)備（包括蒸汽滅菌柜、隧道式滅菌干燥器、熱循環(huán)烘箱等）驗(yàn)證合格后，且操作人員熟練掌握了崗位SOP后進(jìn)行的。培養(yǎng)基灌裝作為無菌灌裝的模擬實(shí)驗(yàn)，可以直觀、方便、準(zhǔn)確地反映出無菌灌裝過程的污染情況及問題。1.1、 驗(yàn)證目的用和實(shí)際生產(chǎn)工藝相同的條件與操作方法（包括生產(chǎn)環(huán)境），向凍干制品容器（西林瓶）內(nèi)灌裝經(jīng)除菌過濾器過濾的培養(yǎng)基，然后將此模擬制品在適當(dāng)條件下培養(yǎng)，以確認(rèn)工藝過程的可靠性。證明在凍干粉針劑灌裝過程中所采用的各種方法和各種規(guī)程以防止微生物污染的水平達(dá)到可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)的能力，或提供保證所生產(chǎn)產(chǎn)品的無菌性的可信限度達(dá)到可接受的合格標(biāo)準(zhǔn)的證據(jù)。1.2、 驗(yàn)證范圍此驗(yàn)證方案適用于粉針車間凍干粉針劑灌裝過程驗(yàn)證。1.3、 責(zé)任生產(chǎn)部門、質(zhì)保部門（QA、QC）、工程部門責(zé)驗(yàn)證方案的執(zhí)行，主要工作內(nèi)容如下：驗(yàn)證內(nèi)容負(fù)責(zé)部門配合參與部門實(shí)施確認(rèn)并提供確認(rèn)資料質(zhì)保部門工程部門生產(chǎn)部門匯編測試資料于最終報(bào)告內(nèi)質(zhì)保部門工程部門生產(chǎn)部門協(xié)調(diào)參與驗(yàn)證過程的人員和部門，確保驗(yàn)證的各項(xiàng)要求生產(chǎn)部門工程部門質(zhì)保部門將成功的結(jié)果及灌裝過程的需求規(guī)范化，并制定相關(guān)文件待核準(zhǔn)下發(fā)質(zhì)保部門工程部門生產(chǎn)部門驗(yàn)證題目凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證方案編號VLDVP-實(shí)施部門生產(chǎn)部頁碼第4頁共10頁2、 驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)a.根據(jù)可信限為95%時污染概率小于0.1%的要求b培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)合格標(biāo)準(zhǔn)為：模擬灌裝數(shù)量5000瓶，污染控制數(shù)量W1/瓶c陽性對照樣培養(yǎng)陽性，陰性對照樣培養(yǎng)陰性；連續(xù)驗(yàn)證3次，應(yīng)合格。3、 培養(yǎng)基性能測試模擬分裝試驗(yàn)采用TSB/SCDM胰酶酪胨大豆培養(yǎng)基，通過下述試驗(yàn)對培養(yǎng)基微生物生長性能進(jìn)行確認(rèn)。首先根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程制備培養(yǎng)基并滅菌后備用。微生物生長性能試驗(yàn)將上述滅菌后的培養(yǎng)基分裝于100支試管中，在一半數(shù)量的試管中接種枯草桿菌，接種量為〈100CFU；在另一半數(shù)量的試管中接種白色念珠菌，接種量為〈100CFU。接種后蓋塞、圭寸口，將接種有枯草桿菌的試管放于30?35°C下培養(yǎng)7天，將接種有白色念珠菌的試管放于20?25C下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)至少有50%以上接種的各試管的培養(yǎng)基中應(yīng)出現(xiàn)明顯的所接種的微生物的生長。培養(yǎng)基無菌性試驗(yàn)將上述滅菌后的培養(yǎng)基分裝于100支無菌試管中，蓋塞、封口。其中50支試管放于30?35C下培養(yǎng)7天，同時將另外50支試管放于20?25C下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)各試管培養(yǎng)基中應(yīng)無任何微生物生長。4、 模擬灌裝過程操作規(guī)程及操作人員控制4.1、 模擬分裝試驗(yàn)中使用的西林瓶和膠塞的清洗、滅菌，分裝設(shè)備的清洗、消毒，與產(chǎn)品接觸的分裝設(shè)備部件的清洗、滅菌、安裝過程必須遵循與實(shí)際生產(chǎn)操作相同的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。4.2、 灌裝機(jī)灌裝速度保持與正常凍干粉針劑灌裝及半壓膠塞生產(chǎn)時的速度相同。4.3、 所有參加模擬試驗(yàn)的操作人員均應(yīng)經(jīng)過GMP、無菌操作、無菌更衣程序技術(shù)等相關(guān)知識的培訓(xùn)并經(jīng)考核合格。4.4、 參加模擬試驗(yàn)的操作人員數(shù)及人員構(gòu)成應(yīng)嚴(yán)格控制，非規(guī)定的驗(yàn)證小組成員嚴(yán)禁在模擬試驗(yàn)過程中進(jìn)入模擬試驗(yàn)現(xiàn)場，模擬試驗(yàn)現(xiàn)場人員數(shù)不得超過6人，人員的驗(yàn)證題目凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證方案編號VLDVP-實(shí)施部門生產(chǎn)部頁碼第5頁共10頁進(jìn)入及退出應(yīng)嚴(yán)格執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作程序，減少不必要的人員進(jìn)入及退出次數(shù)?？蛇M(jìn)入模擬試驗(yàn)現(xiàn)場的人員名單如下：進(jìn)行模擬試驗(yàn)過程中，對以下各項(xiàng)進(jìn)行監(jiān)測。5.1、 模擬試驗(yàn)使用西林瓶及膠塞無菌性檢測：按第6條取樣計(jì)劃的規(guī)定要求，對模擬試驗(yàn)使用的西林瓶及膠塞進(jìn)行取樣，檢測其無菌性，合格標(biāo)準(zhǔn)為各樣品不得存在無菌性不合格情況。5.2、 微生物控制與監(jiān)測：、在模擬試驗(yàn)過程中，對操作人員的無菌服、手套、眼鏡、胸前、前臂等部位的微生物數(shù)量進(jìn)行監(jiān)測。其取樣方法、取樣頻率、取樣要求見第6條取樣計(jì)劃。合格標(biāo)準(zhǔn)：手套全部檢出菌數(shù)＜2個、霉菌＜1個；一個操作人員雙臂、前胸的3個取樣點(diǎn)檢出菌數(shù)之和＜10個。、對無菌區(qū)墻壁、門、設(shè)備以及操作人員可能接觸的各種表面進(jìn)行無菌程度檢驗(yàn)。其取樣方法、取樣點(diǎn)、取樣頻率見第6條取樣計(jì)劃。在進(jìn)行取樣時其取樣面積應(yīng)保持在25cm2。合格標(biāo)準(zhǔn)：局部百級區(qū)全部檢出菌數(shù)＜3個、霉菌＜1個；萬級區(qū)全部檢出菌數(shù)＜10個、霉菌＜2個，地面檢出菌數(shù)＜25個、霉菌＜3個。、對空氣中微生物數(shù)量進(jìn)行監(jiān)測，其取樣方法、取樣點(diǎn)、取樣頻率見第6條取樣計(jì)劃。合格標(biāo)準(zhǔn)：局部百級區(qū)全部檢出菌數(shù)＜1個；萬級區(qū)全部檢出菌數(shù)＜10個、霉菌＜3個；、微生物數(shù)量監(jiān)測試驗(yàn)所采用的培養(yǎng)基應(yīng)為經(jīng)過無菌及微生物生長性能檢驗(yàn)合

驗(yàn)證題目凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證方案編號VLDVP-實(shí)施部門生產(chǎn)部頁碼第6頁共10頁格的培養(yǎng)基。、污染調(diào)查、微生物鑒別方法、污染發(fā)生時應(yīng)采取的措施執(zhí)行相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)操作程序。6、取樣計(jì)劃及取樣點(diǎn)6.1取樣計(jì)劃：監(jiān)測項(xiàng)目取樣方法取樣頻率取樣要求模擬試驗(yàn)西林瓶無菌檢查隨機(jī)取樣每灌裝500瓶取樣一次每次取樣10支模擬試驗(yàn)使用膠塞無菌檢查隨機(jī)取樣每灌裝500瓶取樣一次每次取樣10枚操作人員無菌性檢查棉簽擦拭法模擬試驗(yàn)開始前，試驗(yàn)進(jìn)行一半時間，試驗(yàn)結(jié)束后，分別對操作人員進(jìn)行取樣監(jiān)測取樣時，被取樣的操作人員應(yīng)離開分裝機(jī)，在灌裝室的一角將雙臂平伸，靜止不動，取樣人員按棉簽擦拭取樣法在最短時間內(nèi)取樣。每次對同一操作人員進(jìn)行取樣監(jiān)測時，其取樣點(diǎn)應(yīng)不相同無菌灌裝區(qū)無菌性檢查棉簽擦拭法模擬試驗(yàn)開始前，試驗(yàn)進(jìn)行一半時間，試驗(yàn)結(jié)束后，分別根據(jù)取樣點(diǎn)要求對無菌區(qū)進(jìn)行取樣監(jiān)測根據(jù)取樣點(diǎn)要求取樣，取樣面積固定，每次取樣面積為25cm2。每次應(yīng)選擇不同位置取樣，其重點(diǎn)為操作者可能接觸的各種表面?？諝馕⑸飻?shù)量監(jiān)測沉降平皿法劑培養(yǎng)基無菌模擬灌裝全過程根據(jù)取樣點(diǎn)分布圖布置培養(yǎng)皿，連續(xù)暴露取樣。灌裝機(jī)附近設(shè)置四個以上的取樣平皿。另有一個平皿應(yīng)放置于情況最差的部位。驗(yàn)證題目凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證方案編號VLDVP-實(shí)施部門生產(chǎn)部頁碼第7頁共10頁取樣點(diǎn)：、操作人員無菌性檢查取樣點(diǎn)：操作人員的無菌服、手套、眼鏡、胸前、前臂等部位。、無菌灌裝區(qū)無菌性檢查取樣點(diǎn)：其取樣重點(diǎn)為無菌灌裝區(qū)內(nèi)墻壁、門、設(shè)備表面以及操作人員可能接觸的各種表面。每次取樣應(yīng)包括：一側(cè)內(nèi)墻壁，無菌灌裝區(qū)內(nèi)門把手，膠塞清洗機(jī)開門螺旋，灌裝機(jī)上塞料斗，西林瓶滅菌烘干隧道出口處理瓶轉(zhuǎn)盤，灌裝機(jī)控制面板，物料周轉(zhuǎn)桶、周轉(zhuǎn)托盤等處。、空氣微生物數(shù)量監(jiān)測沉降平皿法取樣點(diǎn)：取樣點(diǎn)見附件《凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)空氣微生物監(jiān)測沉降平皿取樣點(diǎn)分布圖》。7、模擬灌裝凍干粉針劑模擬灌裝方法：凍干粉針劑模擬灌裝方法采用將一定量（與實(shí)際生產(chǎn)灌裝量相當(dāng)）的無菌液體培養(yǎng)基通過灌裝機(jī)灌裝于西林瓶中并進(jìn)行半壓膠塞，然后在凍干機(jī)內(nèi)進(jìn)行凍干試驗(yàn)并進(jìn)行全壓膠塞，壓鋁蓋密封。模擬試驗(yàn)量按實(shí)際生產(chǎn)批量（2萬瓶）的25％計(jì)算，即5000瓶。液體培養(yǎng)基制備方法：將經(jīng)過第3項(xiàng)檢測合格的培養(yǎng)基在配制間內(nèi)按每30g加1L注射用水的比例配制50L液體培養(yǎng)基備用。無菌模擬灌裝試驗(yàn)：模擬灌裝試驗(yàn)用西林瓶數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準(zhǔn)備6000支無菌西林瓶。模擬灌裝試驗(yàn)用膠塞數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準(zhǔn)備6000枚無菌膠塞。模擬灌裝試驗(yàn)用鋁蓋數(shù)量：按生產(chǎn)工藝要求準(zhǔn)備6000枚鋁蓋。模擬灌裝試驗(yàn)用周轉(zhuǎn)盤數(shù)量：按生產(chǎn)工藝對周轉(zhuǎn)盤進(jìn)行清潔消毒，以每只周轉(zhuǎn)盤裝量210瓶計(jì)算，準(zhǔn)備25只潔凈周轉(zhuǎn)盤備用。7.3.5模擬灌裝試驗(yàn)灌裝量:每支西林瓶灌裝3ml液體培養(yǎng)基。（實(shí)際生產(chǎn)灌裝量3ml）液體培養(yǎng)基的除菌過濾：對在配制間配制好的液體培養(yǎng)基按正常生產(chǎn)工藝要求進(jìn)行除菌過濾并存放于無菌儲罐內(nèi)。驗(yàn)證題目凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證方案編號VLDVP-實(shí)施部門生產(chǎn)部頁碼第8頁共10頁灌裝機(jī)灌裝速度：灌裝機(jī)灌裝及半壓膠塞速度為260瓶/分。模擬灌裝試驗(yàn)操作流程：按凍干粉針劑生產(chǎn)工藝流程進(jìn)行。模擬灌裝試驗(yàn)灌裝過程要求：在進(jìn)行模擬灌裝試驗(yàn)時，當(dāng)灌裝進(jìn)行至一半時，使設(shè)備空轉(zhuǎn)一小時以上再繼續(xù)進(jìn)行模擬灌裝試驗(yàn)，完成剩余的試驗(yàn)制品的灌裝。灌裝時按實(shí)際生產(chǎn)進(jìn)行，如質(zhì)量檢查、扶瓶、裝量調(diào)節(jié)、維修等操作。根據(jù)5.1項(xiàng)及6項(xiàng)要求，在每臺灌裝機(jī)分裝完成500瓶時，隨機(jī)抽取未灌裝的西林瓶及膠塞10瓶供檢測使用。凍干模擬試驗(yàn)：培養(yǎng)基灌裝半壓膠塞以后，將半壓膠塞的樣品瓶轉(zhuǎn)移到凍干機(jī)內(nèi)，進(jìn)行凍干的模擬試驗(yàn)。試驗(yàn)中，冷凍機(jī)不降溫，室溫放至24小時，抽真空至50pa，無菌空氣補(bǔ)氣、全壓塞后按生產(chǎn)工藝要求進(jìn)行鋁蓋密圭寸作業(yè)。至此供試品已全部制備完成。取樣原則：由于培養(yǎng)基灌裝試驗(yàn)分為兩個階段進(jìn)行，因此將全部樣品分為四個不同時間段進(jìn)行樣品標(biāo)示，即第一階段灌裝試驗(yàn)開始時、第一階段灌裝試驗(yàn)結(jié)束時、第二階段灌裝試驗(yàn)開始時、第二階段灌裝試驗(yàn)結(jié)束時四個時間。其標(biāo)記法為“1-1”、“1-2”、“2-1”、“2-2”。標(biāo)記點(diǎn)為周轉(zhuǎn)盤。8、微生物培養(yǎng)陰性對照：在模擬灌裝過程中，用20支無菌試管隨機(jī)灌裝3ml培養(yǎng)基，密封后進(jìn)行現(xiàn)場用培養(yǎng)基無菌性試驗(yàn)。其20瓶陰性對照品應(yīng)均不得長菌。陽性對照：為確認(rèn)無菌灌裝容器中培養(yǎng)基的促菌生產(chǎn)能力，取低濃度菌接種于進(jìn)行挑戰(zhàn)性陽性試驗(yàn)用的4支無菌試管中，2支接種濃度＜100個微生物/0.1ml的枯草桿菌芽抱；另2支接種濃度＜100個微生物/0.1ml的白色念珠菌。接種后將接種枯草桿菌芽抱的無菌試管放于30?35°C下培養(yǎng)7天，將接種有白色念珠菌的無菌試管放于20?25°C下培養(yǎng)7天。7天內(nèi)至少需有1支試管被證實(shí)有菌生產(chǎn)。如2支試管內(nèi)均沒有菌增殖，則應(yīng)在確認(rèn)試驗(yàn)操作有誤后，重復(fù)試驗(yàn)1次，此次試驗(yàn)應(yīng)2支試管內(nèi)均有菌生產(chǎn)。驗(yàn)證題目凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證方案編號VLDVP-實(shí)施部門生產(chǎn)部頁碼第9頁共10頁試驗(yàn)樣品培養(yǎng)：模擬灌裝生產(chǎn)的全部樣品在適宜的溫度下培養(yǎng)14天，先在較低溫度（20?25°C）下培養(yǎng)7天，然后在較高溫度（30?35C）下培養(yǎng)7天，較低溫度與較高溫度一般相差10C。在第三天和第七天之間至少觀察培養(yǎng)基灌裝品的微生物的生產(chǎn)情況一次，并且在檢測期間的最后一天至少再觀察一次，并對污染的瓶中的微生物進(jìn)行總結(jié)其特點(diǎn)。若發(fā)現(xiàn)污染應(yīng)明確記錄樣品號及數(shù)量，同時應(yīng)檢查鋁蓋、膠塞的密封情況；若有破損應(yīng)記錄并檢查其破損原因。對于微生物污染的樣品應(yīng)進(jìn)行鑒別試驗(yàn)，鑒別的內(nèi)容至少應(yīng)包括菌落、細(xì)胞形態(tài)學(xué)及革蘭染色特性等。9、試驗(yàn)結(jié)果評價評價無菌模擬灌裝試驗(yàn)結(jié)果的主要指標(biāo)之一是微生物污染水平，如果試驗(yàn)結(jié)果證明其污染水平超過規(guī)定的合格限度（參見第2項(xiàng)規(guī)定），則應(yīng)立即調(diào)查并記錄污染產(chǎn)生的原因。在調(diào)查結(jié)束并采用相應(yīng)的措施后應(yīng)重復(fù)進(jìn)行培養(yǎng)基無菌模擬灌裝試驗(yàn)。原因調(diào)查至少應(yīng)包括如下項(xiàng)：a、 生產(chǎn)環(huán)境微生物監(jiān)測數(shù)據(jù)；b、 生產(chǎn)環(huán)境懸浮粒子監(jiān)測數(shù)據(jù)；c、 人員污染的監(jiān)測數(shù)據(jù)；d、 HVHA過濾器的完整性檢測、粒子、風(fēng)速等；e、 操作間的空氣流向、壓差；f、 操作人員的操作方法、培訓(xùn)情況；g、 模擬灌裝試驗(yàn)過程中的異常情況；h、 無菌室生產(chǎn)工具及其他用品的儲存狀況；i、 鑒別污染微生物的種、屬，以尋找污染源的線索；j、 無菌室的清潔、清潔規(guī)程的培訓(xùn)及執(zhí)行情況；k、 無菌生產(chǎn)用設(shè)備的控制系統(tǒng)和監(jiān)測系統(tǒng)的校正；l、 生產(chǎn)前、生產(chǎn)后過濾器的完整性檢測結(jié)果；原因調(diào)查結(jié)束后，應(yīng)根據(jù)調(diào)查所確定的或可能發(fā)生的原因制定糾正或改進(jìn)方案并予以實(shí)施。當(dāng)改進(jìn)方案實(shí)施之后應(yīng)重復(fù)模擬灌裝試驗(yàn)。

驗(yàn)證題目凍干粉針劑培養(yǎng)基無菌灌裝模擬試驗(yàn)驗(yàn)證方案編號VLDVP-實(shí)施部