乙型肝炎病毒顆粒超離純化常用離心機簡介

BECKMANHITACHISORVALLHEREUSEPPENDORF低速離心:6,000rpm以下超速離心:30,000rpm以上1.離心力2.相對離心力(RCF)3.沉降速度4.沉降系數(S)5.沉降時間和沉清因子(K)離心場中的基本物理概念離心力F=ma=mω2r

ω:角速度(弧度rad/秒)ω=(2π×RPM)/60r:離心半徑沉降速度V在離心力場的作用下,單位時間內沉淀物運動的距離V=d2(ρp-ρm)ω2r18μ(f/f0)V大小與顆粒直徑(d2)成正比V與顆粒密度同介質密度差(ρp-ρm)

成正比V與外加離心場(ω2r)成正比當顆粒密度等于介質密度時,沉降速度接近于零V與介質粘滯度μ成反比,粘滯度增加速度減慢V與顆粒形狀有關.顆粒偏離球形越大f/f0的摩擦比也越大,速度越慢沉降系數(S)Svedberg定義:單位離心力作用下的沉降速度物理意義:被測顆粒達到極限速度時所需要的時間.單位為秒.1S單位=10-13seconds沉降系數與物質的質量、形狀、密度等因素有關,也受溫度,水化密度,pH的影響,在實際工作中通過實驗測定.蛋白質：1-100S核酸：10-1000S病毒：100-1000S細胞核：106-107S完整細胞：107-108S原核核糖體70S(30S,50S)

各種離心方法

沉降速度法

差速離心法速度區(qū)帶離心法

特點:主要按顆粒大小,形狀不同分離沉降平衡法

密度梯度離心法（預制梯度，自成梯度）

特點:以顆粒的密度差分離,與大小、形狀無關差速離心法原理：通過不斷增加相對離心力的辦法，使一個非均勻混合液內的不同大小、形狀的顆粒分步沉淀。溶解的細胞（組織勻漿液）600g離心10min沉淀（細胞核）上清液（含細胞膜、線粒體、溶酶體核糖體、可溶性蛋白）10000g離心10min沉淀上清液（細胞膜、線粒體、溶酶體）（核糖體、可溶性蛋白）100000g離心3h沉淀上清液（核糖體）（可溶性蛋白）密度梯度離心法(預制梯度)在離心之前在管中預先形成線性或非線性梯度,將樣品加入離心管中,經長時間平衡離心,使樣品顆粒按其密度不同在梯度液中分布,這時顆粒密度等于周圍介質的密度ρp=ρm密度梯度離心法(離心自成)利用某些重金屬鹽(如Cscl等)同樣品均勻混合,長時間離心.在離心場的作用下,重金屬鹽重新分布,最后形成由管底密度高到液面密度低的密度梯度.此時,樣品中原先均勻分布的病毒顆粒隨周圍介質密度的變化而上浮下沉,最終進入與自身浮力密度相同的特定位置,只要轉速、溫度不變,則延長離心時間也不能改變這些顆粒的成帶位置.各類超速離心機轉子最高轉速允許離心管內平均密度為1.2g/cm3,超過該密度,減速rpm實際=1.2/實際密度×rpmmax

轉子超過壽命也要減速使用轉速限制3.預制梯度等密度離心分離:制備1.0-1.27g/ml/蔗糖密度梯度液,SW41轉頭100,000g離心24小時后,分部收集.選擇合并密度1.2-1.24g/ml管作電鏡觀察.預制梯度等密度離心分離:

石蠟油樣品0.5ml30%蔗糖2ml40%蔗糖2ml50%蔗糖2ml