抗血清制備的學(xué)習(xí)課件第1頁/共12頁實驗原理在抗原刺激下可以使機體產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，由于抗體通常存在于血清中，因此也將機體受到抗原刺激后的血清稱為免疫血清，免疫血清中含有對應(yīng)于該抗原的多個決定簇的多種抗體—即多克隆抗體?？寡逯苽涞?頁/共11頁第2頁/共12頁實驗原理抗血清的制備分為三個步驟：

抗原的制備與純化動物的免疫（注射途徑、注射次數(shù)、間隔時間等）血清分離純化與效價鑒定

抗血清制備第2頁/共11頁第3頁/共12頁試劑與器材

抗原與免疫對象細菌菌種（傷寒沙門菌O901）、健康家兔。

試劑生理鹽水、麥?zhǔn)媳葷峁?、石炭酸、防腐劑?.02%疊氮鈉或0.01%硫柳汞）等

設(shè)備與器材剪刀、鑷子、注射器、試管等器材和冰箱、離心機等設(shè)備抗血清制備第3頁/共11頁第4頁/共12頁實驗方法

傷寒桿菌O抗原的制備取經(jīng)革蘭染色做細菌純度鑒定的傷寒沙門菌，密集劃線接種于普通瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24～48小時；用生理鹽水將細菌菌苔洗于清潔、無菌的三角燒瓶中，置60℃水浴或隔水煮沸1小時使細菌的菌毛破壞（破壞H抗原）；將菌液移入離心管4000r/min離心10min，棄去上清，并用無菌生理鹽水洗滌2次；取少量處理過的菌液再次接種于瓊脂平板上進行無菌實驗（37℃，24h），確定無活菌后用生理鹽水調(diào)整菌液濃度至10*9個/ml，加石炭酸至終濃度為0.5%，即為細菌O抗原?？寡逯苽涞?頁/共11頁第5頁/共12頁實驗方法

傷寒桿菌H抗原的制備取有鞭毛的傷寒桿菌密集劃線接種于普通瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24～48小時；取出培養(yǎng)板，用含有5%石炭酸（苯酚）的生理鹽水洗下瓊脂平板上的菌苔，移入無菌三角燒瓶中，置37℃水浴24h（或4℃3～5天固定殺菌）；做無菌試驗，用生理鹽水稀釋成10*9個/ml，即為細菌H抗原。

抗血清制備第5頁/共11頁第6頁/共12頁免疫日期（天）免疫途徑抗原免疫劑量（ml）1多點皮內(nèi)傷寒桿菌O或H抗原1.06靜脈傷寒桿菌O或H抗原0.511靜脈傷寒桿菌O或H抗原0.516靜脈傷寒桿菌O或H抗原1.019靜脈傷寒桿菌O或H抗原2.0

實驗方法

免疫方案抗血清制備第6頁/共11頁第7頁/共12頁實驗方法

抗血清獲取試血：末次免疫7d后試血，試血一般耳靜脈或心臟采血，分離血清與傷寒沙門菌O或H抗原做試驗管凝集試驗，凝集效價（滴度）在1：1600～3200之間時即可以放血，若效價較低，可繼續(xù)加強免疫；放血：采用心臟采血以獲得最大血量，置37℃促進血塊收縮，并用吸管吸取血清，3000r/min離心10min去除殘余的紅細胞?？寡逯苽涞?頁/共11頁第8頁/共12頁實驗方法

抗血清的鑒定

效價的測定效價的測定可根據(jù)抗體的不同性質(zhì)，分別采用環(huán)狀沉淀試驗、瓊脂雙向擴散、單項免疫擴散、溶血試驗、凝集反應(yīng)、酶免疫測定及放射免疫分析等方法進行測定。本實驗以凝集反應(yīng)為例。

特異性測定抗體的特異性通常以交叉反應(yīng)率表示。交叉反應(yīng)率可以用競爭抑制試驗測定。

親和力測定親和力測定主要有平衡透析法、酶聯(lián)免疫法和放射分析法。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的?？寡逯苽涞?頁/共11頁第9頁/共12頁實驗方法

抗體的保存抗體的保存濃度為20～30mg/ml為宜，加入1/10000的硫柳汞或1/1000的疊氮鈉防腐，并加入等體積的中性甘油，分裝小瓶，置-20℃以下低溫保存?？寡逯苽涞?頁/共11頁第10