考試61.X、γ射線的殺菌機(jī)理是什么？2.氧化劑的殺菌機(jī)理是什么？3.福爾馬林的主要成分是什么？4.乙醇?xì)⒕鷻C(jī)理是什么？其最佳殺菌濃度是多少？5.青霉素的抗菌機(jī)理是什么？6.直接計數(shù)法的特點是什么？有哪些具體方法？4．比濁計數(shù)法濁——細(xì)菌懸浮液的濁度細(xì)菌不完全透光，一定范圍內(nèi)菌溶液的混濁度與菌數(shù)量成正比

（1）制標(biāo)準(zhǔn)曲線（OD~No）（2）測菌液濁度，查圖表得出細(xì)菌數(shù)量濁度儀或721分光光度儀無菌水1.

稀釋平板計數(shù)法—固體培養(yǎng)法第一步：菌樣巧妙稀釋得到不同稀釋度（10-x）菌液菌樣被無菌水不同稀釋倍率后平板培養(yǎng)圖

10-210-3

10-410-5

各取1ml，均勻涂布于冷固體培養(yǎng)基平板上或與溫?zé)嵋簯B(tài)固體培養(yǎng)基混合冷卻。第三步：培養(yǎng)稀釋度過低，菌落密集無法計數(shù)可以計數(shù)，但數(shù)量過多，費時費力數(shù)量合適，統(tǒng)計計算，作為結(jié)果數(shù)量太少，誤差因素太大，不做計數(shù)第二步：接種平板每一個細(xì)菌會生成一個菌落一般計數(shù)平板的細(xì)菌生長菌落數(shù)以30~300個為宜。第四步：計數(shù)細(xì)菌數(shù)量=？細(xì)菌數(shù)量=數(shù)出的菌落數(shù)/稀釋度例如：10-5稀釋度時菌落數(shù)為125個細(xì)菌數(shù)量=125/10-5=1.25×107個/mL

平板計數(shù)法是采用最廣的一種活菌計數(shù)法如國標(biāo)法水中細(xì)菌總數(shù)的測定。注意：作空白及取平行樣（2～3組）均值減小誤差平均2.稀釋液體計數(shù)法特點：液體培養(yǎng)、統(tǒng)計學(xué)查表計數(shù)又稱MPN法（或最可能數(shù)法）MostProbableNumber例如測定SRB（硫酸鹽還原菌，厭氧）的數(shù)量提問：能用稀釋平板法計數(shù)嗎？為什么？一般不能，厭氧菌暴露在空氣中不能生長（除非厭氧培養(yǎng)箱）對這類菌可以利用它們生長時產(chǎn)生的硫化亞鐵黑色特征進(jìn)行深層隔氧液體培養(yǎng)，按MPN法進(jìn)行計數(shù)。(4)統(tǒng)計－查表－計算

根據(jù)不同稀釋度變黑試管①統(tǒng)計出數(shù)量指標(biāo)三位數(shù)及其中最低稀釋度（取變黑的管數(shù)最多、稀釋度又最低的生長管數(shù)，為第一位數(shù)字，后面兩個稀釋度的生長管數(shù)后兩位數(shù)）提問：上例情況而言統(tǒng)計數(shù)量是幾？②查表表——MPN表32010-4MPN三管法測數(shù)統(tǒng)計表水中大腸菌群、鐵細(xì)菌、硝化菌、亞硝化菌也用這種方法進(jìn)行數(shù)量統(tǒng)計。個菌/毫升細(xì)菌最可能數(shù)——通過其他精確的計數(shù)法，確定的各種數(shù)量指標(biāo)時細(xì)菌數(shù)量的最可能值上面例子中數(shù)量指標(biāo)“320”對應(yīng)的細(xì)菌最可能數(shù)為9.5個菌/毫升，最低稀釋度為10-4，折算出樣品中菌濃度為

？個菌/毫升。（3）統(tǒng)計計數(shù)提問：假如測出250個菌落，抽濾了50ml自來水，自來水中菌濃度是多少呢？

250÷50ml=5個/ml自來水樣品中的細(xì)菌數(shù)量=菌落數(shù)÷抽濾樣品的體積數(shù)要求——樣品潔凈如空氣或飲用水。？堵孔、菌太多難以分散提問：如何用活菌計數(shù)法測定較臟的水樣？減少濾液體積、無菌水稀釋(三)重量法提問：已知什么條件通過測定細(xì)菌群體重量知道其數(shù)量？已知單個細(xì)菌的平均重量除法計算細(xì)菌的濕重量＝10-15~10-11g/個細(xì)胞干重約為濕重的10％~20％。1.干重法方法：含菌水樣在105～110℃下進(jìn)行干燥恒重（本質(zhì)測水中懸浮物重量MLSS或MLVSS）。懸浮物＝無機(jī)物+有機(jī)物（包括細(xì)菌）提問：如何確定懸浮物中有機(jī)物與無機(jī)物的量？高溫(550℃)灼燒

無機(jī)物化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，高溫下不會分解提問：什么情況下可以直接用懸浮物的重量表示細(xì)菌的重量？懸浮物中絕大多數(shù)是細(xì)菌。（2）除細(xì)菌外還有大量無機(jī)懸浮物時

W無MLVSS揮發(fā)性懸浮物＝MLSS

－W無

=細(xì)菌群體的干重量細(xì)胞數(shù)目=

MLVSS÷個體細(xì)菌的平均干重量

550℃下灼燒2h稱重105~110℃下進(jìn)行干燥恒重稱重MLSS（3）有大量非細(xì)菌有機(jī)懸浮物時提問：如何測定呢？不能用重量法，應(yīng)改用其他方法?？傮w來說重量法方法誤差較大，一般只作為菌數(shù)粗略估算如活性污泥測定（以重量MLSS、MLVSS間接表示細(xì)菌數(shù)量）2.細(xì)胞含N量法大多數(shù)生物包括細(xì)菌，細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)氮含量比較穩(wěn)定，一般為蛋白質(zhì)干重15％~16％，平均為16％。＊還需要測定哪些條件可以由以上比例確定菌樣中細(xì)菌濃度？如何試驗操作及計算呢？

總污染物影響促反應(yīng)的方程表達(dá)式——v——總污染物微生物利用速度；V—（KX)—最大速度；X—微生物濃度

Ks－飽和常數(shù)

Ks勞倫斯方程忽略KX

KX(四)其它生理生化指標(biāo)法提問：v指什么？COD降解vO2消耗v＆＆產(chǎn)物產(chǎn)生v？求作試驗！提問：當(dāng)你需要測定某水樣中細(xì)菌數(shù)量時，你該如何選擇方法？視要求、水樣菌量、測試條件等等靈活選取“生、老、病、死”（根據(jù)投食方式）分間歇式培養(yǎng)（分批培養(yǎng)）、連續(xù)式培養(yǎng)兩種情況1.間歇培養(yǎng)提問：如何人工進(jìn)行細(xì)菌間歇培養(yǎng)？只有開始時的一次性投料和接種細(xì)菌（其余時間細(xì)菌根據(jù)環(huán)境變化自行生滅）二、細(xì)菌的生長特性（“坐吃山空型”）應(yīng)用：生理特性研究、生物發(fā)酵和生物治污①增長速率上升階段提問：為什么培養(yǎng)初期細(xì)菌群體重量增長速率隨時間不斷增大？A.營養(yǎng)物豐富，細(xì)菌增殖；B.細(xì)菌在細(xì)胞內(nèi)以糖原、油滴等形式儲存營養(yǎng)物，細(xì)菌個體重量增大

增長率

生上升階段

mg/mL

0時間t活細(xì)胞重量②增長速率下降階段提問：為什么增長速率較前下降了？

增長率下

降階段