第六章維生素的測定第1頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一掌握學習目標生物監(jiān)測指標；測定方法原理主要步驟和注意事項生物監(jiān)測意義熟悉理化性質；代謝途徑了解食物來源、缺乏及過量癥狀第2頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一概述脂溶性（A、D、E、K）水溶性兩類（B族、C）維生素分類：

維生素（vitamin）：是生物體維持正常生命活動必須且無法通過自身合成足夠量，需要通過膳食攝取的一類有機化合物的統稱。第3頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一第一節(jié)維生素A和β-胡蘿卜素一、理化性質

維生素A，脂溶性、主要有維生素A1（視黃醇，retinol）和維生素A3（3-脫氫視黃醇，retinol）兩種形式。體內的主要活性形式是視黃醇。在空氣中易氧化，加熱和光照加速氧化，對酸不穩(wěn)定。不溶于水，有熒光性，其無水乙醇、環(huán)己烷等在自我照射下發(fā)出綠色熒光。第4頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一第一節(jié)維生素A和β-胡蘿卜素一、理化性質

β-胡蘿卜素，植物天然色素，是視黃醇的二聚物和最具活性的維生素A前體。對熱、酸堿穩(wěn)定、易在紫外線和空氣總氧化失活。第5頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一二、代謝和生物監(jiān)測指標維生素A來源膳食來源：肝臟、肉制品、乳制品、魚肝油等維生素A與人健康的關系缺乏：過量：夜盲癥、干眼癥、角膜軟化癥肝損傷、骨異常、脫皮、脫發(fā)、復視、嘔吐及頭痛、胎兒畸形第6頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一二、代謝和生物監(jiān)測指標我國血清視黃醇濃度世界糧農組織（FAO）正常參考值：兒童>300μg/L成人>400μg/L視黃醇含量、血漿視黃醇濃度、相對劑量反應血清β-胡蘿卜素>800μg/L第7頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一靜脈血：時間-70℃，避光保存血清三、樣品的采集和保存第8頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一原理：

血清經無水乙醇沉淀蛋白后，正己烷萃取視黃醇及β-胡蘿卜素，C18柱色譜分離，紫外檢測器監(jiān)測，保留時間定性，內標法標準曲線法定量。四、血清中維生素A及β-胡蘿卜素的測定第9頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一樣品處理：

100μL血清中加入100μL內標乙醇溶液，混勻后加入1mL正己烷存取，取上清，揮干，無水乙醇復溶測定。四、血清中維生素A及β-胡蘿卜素的測定儀器參考條件：色譜柱：C18色譜柱（150mm*4.6mm,5μm）流動相甲醇：水=98:2（臨用前脫氣）流速：1.0mL/minUV波長：視黃醇325nm,β-胡蘿卜素450nm第10頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一注意事項：四、血清中維生素A及β-胡蘿卜素的測定（1）內標物：維生素A乙酸酯（2）標準溶液領用標定（3）無水乙醇作為蛋白質變性劑（4）縮短保留時間可用該報表了有機溶劑洗脫（5）前處理可用分散液相微萃取第11頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一第二節(jié)維生素D、E、K一、理化性質

維生素E，有生育酚及生育三烯酚兩類，有四種異構體。其中α-生育酚（α-tocopherol）活性最強。在無氧條件下對熱穩(wěn)定，對堿了、紫外線、鐵鹽等均不穩(wěn)定。極易被氧化，可保護其他物質不被氧化。第12頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一二、代謝和生物監(jiān)測指標維生素E來源膳食攝入：植物油、綠葉蔬菜吸收：分布：小腸尿液體內合成：少排泄：肝臟儲存和代謝抗衰老、抗腫瘤、保護肝臟、促進受損細胞修復等生理功能：第13頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一二、代謝和生物監(jiān)測指標生物監(jiān)測指標血清或全血維生素E第14頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一靜脈血：時間-70℃，避光保存血清三、樣品的采集和保存第15頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一四、高效液相色譜法測定全血中的維生素E方法熒光光度法紫外-可見分光光度法HPLCGC第16頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一檢出限：0.08μg/mL

經肝素抗凝的全血樣品，乙醇沉淀蛋白后正己烷萃取維生素E，高效液相色譜分離，紫外檢測器檢驗。保留時間定性，外表標準曲線法定量。四、高效液相色譜法測定全血中的維生素E原理：第17頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一樣品處理：

50μL全血樣品中加入200μL無水乙醇，混勻后加入1mL正己烷渦旋混勻，離心取正己烷層800μL，揮干，甲醇復溶測定。儀器參考條件：色譜柱：C8（150mm*4.6mm,5μm）柱溫：50℃流動相甲醇：水=98:2流速：1.0mL/minUV波長：292nm,四、高效液相色譜法測定全血中的維生素E第18頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一注意事項：（1）正己烷易揮發(fā)，環(huán)境溫度高是冰浴萃取。（2）可用C18柱更換，流動相可采用甲醇-乙醇=20：80（4）標準液可用α-生育酚配制，臨用標定（5）可同時檢測維生素A四、高效液相色譜法測定全血中的維生素E第19頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一第三節(jié)維生素B一、理化性質

維生素B1，又稱硫胺素（thiamine>），抗神經炎維生素、抗腳氣病維生素。白色結晶，溶于水，在酸性溶液中穩(wěn)定，在pH>5的溶液中不穩(wěn)定。光和熱可促其氧化，易被氧化為脫氫硫胺素，即硫色素。應避光、低溫保存，不宜久貯。第20頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一二、代謝和生物監(jiān)測指標維生素B1來源膳食攝入：糧谷、豆類、干果、綠葉菜、動物內臟及蛋類代謝：中樞神經系統肝代謝生成磷酸酯衍生物游離硫胺素、單磷酸硫胺素吸收：小腸紅細胞、血漿焦磷酸硫胺素三磷酸硫胺素硫胺素評價指標：常以血液中三種形式含量之和作為指標排泄：超出儲存閾值的硫胺素檢疫原形或結合形式經尿排出體外，可通過負荷試驗反映營養(yǎng)狀況。第21頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一血樣：靜脈血，肝素抗凝，-70℃保存。收集口服維生素片后四小時內排出的全部尿液，加草酸調節(jié)pH3，4℃避光保存。長期-20℃保存。三、樣品的采集和保存尿樣：第22頁，共24頁，2023年，2月20日，星期一四、硫胺素