實驗一微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌及純培養(yǎng)一、微生物培養(yǎng)基的配制和滅菌（不做）目的要求實驗材料實驗程序1、目的了解培養(yǎng)基的配制原理和方法，掌握其配制過程。了解幾種滅菌方法，掌握干熱滅菌法和加壓蒸汽滅菌法的原理及其使用方法。3、方法和步驟培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法培養(yǎng)基的概念及種類培養(yǎng)基的配方、配制步驟（1）培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基是指由人工配制的、適合微生物生長繁殖或產(chǎn)生代謝產(chǎn)物用的混合營養(yǎng)料。培養(yǎng)基的介紹碳源、氮源、無機(jī)鹽、能源、生長因子、水營養(yǎng)物質(zhì)的濃度要適宜營養(yǎng)物質(zhì)之間的配比要適宜培養(yǎng)基的pH值、滲透壓、水活度和氧化還原電勢等物理化學(xué)條件要適宜。細(xì)菌：pH7.0~8.0放線菌：pH7.5~8.5酵母菌：pH3.8~6.0霉菌：pH4.0~5.8藻類：pH6.0~7.0原生動物：pH6.0~8.0初始pH通常培養(yǎng)條件：瓊脂是最優(yōu)良的凝固劑，自1880年代開始用于配制微生物培養(yǎng)基以來，至今經(jīng)久不衰。實驗室的常用培養(yǎng)基：細(xì)菌：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基；放線菌：高氏1號合成培養(yǎng)基培養(yǎng)；酵母菌：麥芽汁培養(yǎng)基；霉菌：查氏合成培養(yǎng)基；牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制1、液體培養(yǎng)基2、固體培養(yǎng)基3、半固體培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基配方(P.78)：牛肉膏0.3g蛋白胨1g氯化鈉0.5g瓊脂1.5g水100mLpH7.2~7.4滅菌121℃，20min牛肉膏蛋白胨半固體培養(yǎng)基配方：

瓊脂0.3g牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基配方：

瓊脂0g牛肉膏蛋白胨營養(yǎng)瓊脂：按照配方生產(chǎn)的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，屬于固體培養(yǎng)基。今天固體培養(yǎng)基用營養(yǎng)瓊脂。液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基按照上述配方稱量。配制步驟：P.78任何一種培養(yǎng)基一經(jīng)制成就應(yīng)及時徹底滅菌，以備純培養(yǎng)用。一般培養(yǎng)基的滅菌采用高壓蒸汽滅菌。常用的滅菌的方法有：干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、常壓蒸汽滅菌、常壓間歇式滅菌超高溫滅菌、過濾除菌、輻射滅菌、化學(xué)藥品滅菌等方法。本實驗培養(yǎng)基的滅菌常使用的是高壓蒸汽滅菌，它是利用高溫濕熱空氣使菌體蛋白質(zhì)凝固變性而達(dá)到滅菌的。P.90

（2）培養(yǎng)基和玻璃器材的滅菌方法高壓蒸氣滅菌一般培養(yǎng)基:

121.3℃,15-30min

含糖培養(yǎng)基:

112.6℃,15-30min

培養(yǎng)基的滅菌二、微生物的純培養(yǎng)

（微生物的培養(yǎng)特征）

1、實驗?zāi)康?）掌握常用的分離純化微生物的基本操作技術(shù)：平板劃線法；2）掌握微生物無菌操作技術(shù)；3）熟悉不同微生物在固體斜面、半固體和液體培養(yǎng)基上的生長特征。2、實驗原理1）微生物在自然界中無處不在，尤其在土壤中存在極其豐富。但自然界中的微生物都以混雜狀態(tài)存在。要研究某種微生物的性質(zhì)，首先要獲得這種微生物的純培養(yǎng)物。2）在固體平板、固體斜面、半固體和液體培養(yǎng)基上，不同的微生物有其固有的培養(yǎng)特征。這些培養(yǎng)特征可以作為微生物分類鑒定的指標(biāo)。大腸桿菌需氧及兼性厭氧。G－短桿菌，周鞭毛，有動力，周身有菌毛。變形桿菌

為革蘭氏染色陰性、無芽胞、無莢膜、周身鞭毛、運(yùn)動活潑、兩端鈍圓的小桿菌。兼性厭氧。有些種在普通固體培養(yǎng)基上菌落呈遷徙生長。在自然界中存在極廣，水、泥土、陰溝及各種腐敗的動、植物中最多，也存在于健康人和動物的腸道中。它們是條件致病菌，在特殊情況下對人致病，如食物中毒、尿路感染、夏季腹瀉或其他混合感染。

平板接種方法參閱p.129；斜面接種方法參閱p.8；液體接種方法參閱p.99；半固體接種參閱P.49。（2）培養(yǎng)特征觀察于37℃下培養(yǎng)24h后觀察各種菌株在不同的培養(yǎng)基上的培養(yǎng)特征，比較它們培養(yǎng)特征之間的差異(實驗報告上的重點內(nèi)容)。平板培養(yǎng)特征的描述參閱p.18表2，斜面培養(yǎng)特征參閱P.9，液體培養(yǎng)特征的描述參閱P.100，半固體培養(yǎng)特征的描述參閱P.49-50。明天中午12:30觀察結(jié)果并記錄。思考題：某人將培養(yǎng)了5天的革蘭氏陽性菌進(jìn)行革蘭氏染色，他很奇怪地發(fā)現(xiàn)在油鏡下細(xì)菌顯紅色。這是怎么回事？張三將已知革蘭氏陽性菌和另一株革蘭氏陰性菌放在相鄰位置進(jìn)行革蘭氏染色，不巧的是他忘記加碘液這一步。在油鏡下觀察他的玻片時，你認(rèn)為他會看到什么？為什么？

實驗分組（35班）

第一組：王燕萍趙曉云孫小慧胡周燕

第二組：何麗慶屠麗媛周曉青方凱莉

第三組：高夢瀅蘇小鷗謝旻昀計玲燕

第四組：陸思琪趙陽沈良云王雪飛

第五組：吳燕江方佳琪沈京京朱迎春

第六組：王芳芳蔡珊珊楊瑩潔陸麗

第七組：廖茹珍王菲菲謝楓丹謝荷艷

第八組：周賽賽俞靜聶清清樓邢穎

第九組：何飛旋潘勇軍蔣珂胡健

孫小慧

實驗分組（34班）

第一組：葉莉莉李玲葉艷菲徐旭霞

第二組：戴麗萍羅淑紅酈超群劉芳

第三組：張麗雯呂鵬花郭夢園王旭娜

第四組：陳謙蔣穎穎金佳蓓陳玲

第五組：