分子診斷在病理診斷中的應(yīng)用劉斌

腫瘤的發(fā)生根本原因是由于基因的異常改變引起。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，特別是人類基因組計(jì)劃的順利實(shí)施、人類基因組序列的剖析、相關(guān)基因功能的識別，對腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸機(jī)制有了更深入的了解，使人類除了能更早期發(fā)現(xiàn)及診斷腫瘤外，還可預(yù)測人群或個(gè)體發(fā)生腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)（腫瘤易感性）、病因檢測、腫瘤的惡性特征、對特定治療手段的反應(yīng)（療效預(yù)測）、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的可能與早期發(fā)現(xiàn)等，進(jìn)行腫瘤診斷、分類、判斷預(yù)后及指導(dǎo)治療。

如今檢測癌患者的基因狀態(tài)有很多方法：

IHC，F(xiàn)ISH，CISH，SouthernBlot，PCR，RealTimePCR?，F(xiàn)如今FISH技術(shù)已應(yīng)用于實(shí)體瘤、血液腫瘤、產(chǎn)前產(chǎn)后多個(gè)領(lǐng)域。FISH檢測類型基因過表達(dá)的檢測基因突變及其檢測基因的易位與重排染色體數(shù)目的檢測端粒酶與腫瘤的關(guān)系檢測一.基因過表達(dá)檢測1.對HER2的檢測其中FISH是FDA批準(zhǔn)的方法，被譽(yù)為“金標(biāo)準(zhǔn)”。

FISH技術(shù)對HER2基因的檢測HER-2基因?yàn)橹掳┗?，位?7q11.2-q12可編碼跨膜蛋白，基因有擴(kuò)增的乳腺癌對三苯氧胺不敏感。HER-2基因擴(kuò)增是決定Herceptin是否有效的關(guān)鍵性指標(biāo)。赫賽汀(Herceptin)抗腫瘤機(jī)制

阻斷異常信號轉(zhuǎn)導(dǎo)增強(qiáng)抗體依賴性細(xì)胞毒作用乳腺癌和胃癌中HER2基因的擴(kuò)增比率所做乳腺癌中HER2基因檢出陽性率為65%；胃癌中HER2基因檢出陽性率為35.7%。

NSCLC中EGFR基因擴(kuò)增鱗癌擴(kuò)增為80%左右，腺癌與大細(xì)胞癌為60%左右基因擴(kuò)增能引起EGFR酪氨酸激酶活化，激發(fā)其下游一系列信號傳導(dǎo)途徑，促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展，基因擴(kuò)增與酪氨酸激酶抑制劑的敏感性相關(guān)基因擴(kuò)增病人用藥有效率達(dá)38.9%，無擴(kuò)增的病人用藥有效率在9.8%

EGFR功能

EGFR在多種上皮性腫瘤高表達(dá),其過表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的增殖、活動(dòng)性、粘連性、侵襲性、凋亡抑制和血管生成相關(guān),最終導(dǎo)致細(xì)胞的轉(zhuǎn)化、增殖,抵抗細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞生存,與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、臨床分期、生存期、預(yù)后和對治療反應(yīng)相關(guān)。TKGenetranscriptionCellCycleProgression抗凋亡CancerATPEGFR變異二.基因突變及其檢測Real-time檢測基因突變原理TaqMan探針的機(jī)理:DNA聚合酶在延伸階段把探針切碎，產(chǎn)熒光基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán)分開，于是熒光得以檢測。EGFR基因突變突變率在33%左右，其中腺癌高達(dá)48%（董強(qiáng)剛等2006）東方亞裔明顯高于高加索人種、女性高于男性、非吸煙高于吸煙EGFR19、21外顯子的突變占95%左右EGFR變異使EGFR酪氨酸激酶ATP結(jié)合位點(diǎn)的某些關(guān)鍵基團(tuán)發(fā)生重構(gòu),使得小分子酪氨酸激酶抑制劑更易與之結(jié)合，增強(qiáng)了與ATP競爭性抑制劑的相互作用全球突變型NSCLC用Iressa/Tarceva有效率約80%；無突變NSCLC用ressa/Tarceva有效率約10%。

Real-time檢測EGFR19、21突變

在直腸癌中K-ras基因突變的患者不會(huì)從EGFR單抗靶向治療中獲益，K-ras野生型患者對cetuximab/Erbitux（愛必妥）和panitumumab/Vectibix（維克替比）單藥或與基礎(chǔ)化療聯(lián)合治療的反應(yīng)率顯著大于突變型患者。野生型現(xiàn)臨床通常將EGFR和K-RAS基因聯(lián)合檢測，來針對非小細(xì)胞肺癌進(jìn)行靶向治療，對擬行TKI治療的患者，可以首先檢測KRAS突變狀態(tài)，排除陽性后對KRAS陰性者進(jìn)行EGFR突變檢測；若EGFR突變陽性，選擇TKI治療。

三.基因的易位與重排2.慢性粒細(xì)胞白血?。–ML）檢測BCR/ABL融合基因1.輔助診斷CML2.指導(dǎo)格列衛(wèi)用藥3.藥物使用效果評估4.骨髓移植效果評估BCR/ABL基因融合正常細(xì)胞3.急性早幼粒細(xì)胞白血?。∕3）檢測PML/RARA融合基因。指導(dǎo)全反式維甲酸(Alltrans-retinoicacid，ATRA)用藥ATRA治療機(jī)制是靶向降解PML/RARA融合蛋白，促進(jìn)阻滯在早幼粒細(xì)胞階段的白血病細(xì)胞分化成熟。PML/RARA融合基因正常細(xì)胞其它項(xiàng)目一.基因重排在淋巴瘤診斷中的應(yīng)用 它在淋巴瘤的分型、療效評價(jià)、預(yù)測復(fù)發(fā)和預(yù)后評估等方面有重要的臨床意義。二.端粒酶與腫瘤的關(guān)系檢測

由于TERC（telomeraseofRNAcomponent）基因編碼端粒酶的RNA組分，維持端粒的長度，該基因的擴(kuò)增使得端粒穩(wěn)定，阻止細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致腫瘤產(chǎn)生。當(dāng)病理檢測不能明確患者分級的情況下：如果TERC基因擴(kuò)增陽性，患者處在CIN2及以上級別的可能性為90%

如果TERC基因擴(kuò)增陰性