甲殼質(zhì)套管聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對脊髓損傷修復(fù)的作用

阿麗婭，宋有鑫，姜保國

基金支持：國家973重大基礎(chǔ)研究項目(2003CB515306)背景介紹中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷危害傳統(tǒng)脊髓損傷的治療策略組織工程再生醫(yī)學(xué)概念支架材料

+種子細(xì)胞（生長因子……）支架材料的研究趨勢

天然支架材料人工合成不可降解支架材料

人工合成生物可降解支架材料生物學(xué)特性

對生物體無毒性和炎癥反應(yīng)易于在體內(nèi)降解吸收降解吸收周期適宜，可人為調(diào)控前期實(shí)驗(yàn)已證實(shí)“甲殼質(zhì)套管能夠促進(jìn)損傷后的周圍神經(jīng)再生”

種子細(xì)胞骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)干細(xì)胞雪旺氏細(xì)胞嗅鞘細(xì)胞目的：初步探討對脊髓損傷修復(fù)是否有影響

甲殼質(zhì)套管+骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞一、材料和方法defabc第三代三種形態(tài)a-cMSCs傳代后的第3代；d-fMSCs的三種形態(tài)；a,dMSCs自發(fā)熒光；b,e透射光照射圖像；c,f前兩圖的疊加效果.藍(lán)紅黃箭頭：多角形，扁平不規(guī)則形，紡錘形實(shí)驗(yàn)動物

70只雄性SD大鼠，體重約300±25g

動物模型為脊髓右側(cè)半橫斷傷，隨機(jī)分4組,每組20只（除正常組）正常組：10只對照組：單純半切損傷模型，不予任何治療；甲殼質(zhì)套管治療組：半切損傷后套管植入治療；甲殼質(zhì)套管聯(lián)合MSCs組:半切損傷后套管植入,移植細(xì)胞；

取材時間點(diǎn):2w,4w,8w,14w,長期組（②③組）

1d,5d,7d,4w,8w（④組）脊髓半切損傷動物模型制作流程2.檢測神經(jīng)纖維是否穿越損傷位點(diǎn)2.1神經(jīng)逆行性示蹤：對照組、套管組分別在2周、14周于損傷位點(diǎn)遠(yuǎn)端注射10%BDA,多點(diǎn)注射，10天后取大腦和脊髓，脊髓分為近段、遠(yuǎn)段和損傷段，染色顯影，陽性細(xì)胞計數(shù)2.2功能學(xué)評價：BBB功能評分；知覺功能評分，分別在術(shù)后1w，2w，4w，6w，8w，10w，12w,14w檢測3.檢測MSCs在套管內(nèi)的生長情況：

激光共聚焦顯微鏡觀察是否增殖、遷移，分別在1d，5d，7d，4w，8w檢測二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.1脊髓空洞（8W）

CAB脊髓損傷位點(diǎn)免疫組化染色A：套管組(100x)，B：MSCs移植組(100x)；C：對照組（100x），均為8W

1.2膠質(zhì)瘢痕（2W）

脊髓半橫斷后星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)的變化A，B套管聯(lián)合干細(xì)胞組脊髓損傷近遠(yuǎn)端的星形膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)；C，D對照組脊髓損傷近遠(yuǎn)端星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)，均為400xABCD套管聯(lián)合干細(xì)胞組對照組套管聯(lián)合干細(xì)胞組對照組近端遠(yuǎn)端1.3脊髓內(nèi)部超微結(jié)構(gòu)---軸突

ABCDE髓鞘在不同時間點(diǎn)形態(tài)（10000x）A：正常軸突；B：2W時套管干細(xì)胞組軸突；C：2W時對照組軸突;D:14W時套管干細(xì)胞組軸突;E:14W時對照組軸突陽性細(xì)胞計數(shù)

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2.2功能學(xué)評價---BBB評分024681012141612468101214Time(Weeks)BBBScoreT組T+M組CON組粉線代表MSCs移植組；藍(lán)線代表套管組，黑線代表對照組---知覺功能評分00.511.522.533.512468101214Time(Weeks)SensoryScoreT組T+M組CON組粉線代表MSCs移植組；藍(lán)線代表套管組，黑線代表對照組；0代表沒有任何知覺，4代表知覺完全正常

defghi四周遠(yuǎn)端八周近端3.2MSCs在脊髓中增殖

abcdef

八周

五天MSCs在大鼠脊髓中生長狀態(tài)a-c,MSCs移植5天時的狀態(tài)；d-f,MSCs移植8W時的狀態(tài)，可見細(xì)胞生長狀態(tài)良好，且大量的增殖.a,d為熒光照射；b,e為透射光照射；c,f為前兩圖疊加

MSCs移植脊髓損傷位點(diǎn)后，發(fā)現(xiàn)：（1）MSCs在脊髓中能夠從損傷位點(diǎn)遠(yuǎn)端向近端遷移，從脊髓邊緣向中央遷移（2）8周時干細(xì)胞大量增殖討論本實(shí)驗(yàn)首次將改造后的甲殼質(zhì)套管用于修復(fù)大鼠脊髓半切損傷脊髓組織中甲殼質(zhì)套管能固形