幾種常見的動物源性飼料中揮發(fā)性鹽基氮的測定國家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心（武漢）揮發(fā)性鹽基氮totalvolatilebasicnitrogen物質(zhì)，簡稱TVBN。它是指肉蛋白質(zhì)在微生物的作用下發(fā)生分解產(chǎn)生氨、胺類堿性含氮物質(zhì)，這類物質(zhì)易和有機酸形成鹽，具有揮發(fā)性，稱這類物質(zhì)為揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)。肉中揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)含量的多少可以反應(yīng)肉品質(zhì)新鮮程度。TVBN值：100克肉中所含揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)的毫克數(shù)。該值是肉品新鮮度指標(biāo)。國家標(biāo)準規(guī)定：一級鮮肉W15mg/100g,二級鮮肉15-25mg/100g,腐敗肉N25mg/100g。揮發(fā)性鹽基氮作為食品和水產(chǎn)品質(zhì)量的重要指標(biāo)，在近幾年才被應(yīng)用作為動物源性飼料產(chǎn)品的一個重要指標(biāo)，主要反映動物源性飼料的新鮮度。本試驗通過參考GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準的分析方法》，結(jié)合動物源性飼料產(chǎn)品的實際情況，建立一種適用于動物源性飼料產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮含量測定的簡便方法。1、原理動物源性飼料產(chǎn)品富含蛋白質(zhì)，由于微生物的作用易發(fā)生腐敗，使蛋白質(zhì)分解產(chǎn)生氨及胺類等堿性含氮物質(zhì)，稱為揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)。此類物質(zhì)具有揮發(fā)性，用凱氏定氮法在堿性環(huán)境中將揮發(fā)性鹽基氮物質(zhì)蒸餾出來后，用硼酸接收，再用標(biāo)準鹽酸滴定，計算含量即為TVBN值。2、儀器與試劑2.1儀器實驗室用樣品粉碎機：刀片式高速粉碎機；分析天平：感量0.0001g;半微量凱氏蒸餾裝置：水蒸汽蒸餾式；振蕩機；離心機；勻漿機；微量滴定管：最小分度0.01mL。2.2溶液的配制c=0.01mol/L鹽酸標(biāo)準溶液（無水碳酸鈉標(biāo)定）：吸取分析純鹽酸1mL，用蒸餾水定容至1000mL，標(biāo)定。2%硼酸溶液：分析純硼酸2g溶于100mL水配成2%溶液。2.2.3混合指示劑：甲基紅0.1%乙醇溶液，漠甲酚綠0.5%乙醇溶液，兩溶液等體積混合，陰涼處保存期三個月以內(nèi)。2.2.41%氧化鎂溶液：分析純氧化鎂1.0g溶于100mL蒸餾水振蕩成混懸液。2.2.5防泡劑:不含氮、主成分為有機硅的固態(tài)或液態(tài)試劑。3、測定步驟3.1試樣的處理按飼料采樣方法制備試樣，要求粉碎細度能一次性達95%以上過CQ16（相當(dāng)于40目）篩，粉碎樣品充分混合后（篩上、篩下的全部篩分范圍樣品）裝入磨口瓶中備用，在粉碎樣品時，磨膛不能發(fā)熱。稱取10g試樣（精確到0.0001g）于250mL具塞錐形瓶中，加蒸餾水100mL,振蕩搖勻30min。魚粉和蠶蛹粉等原料采用過濾，濾液為樣液；而血漿蛋白粉、血球蛋白粉、魚溶漿等不易過濾的原料采用離心，在離心機上于1500g（大約3000r/min）離心10min，上液為試樣液。3.2蒸館取20mL2%的硼酸溶液于150mL錐形瓶中，加混合指示劑2滴，使半微量蒸餾裝置的冷凝管末端浸入此溶液。蒸餾裝置的蒸汽發(fā)生器的水中應(yīng)加甲基紅指示劑數(shù)滴，硫酸數(shù)滴，且保持此溶液為橙紅色，否則補加硫酸。準確移取10mL樣液注入蒸餾裝置的反應(yīng)室中，用少量蒸餾水沖洗進樣入口，再加入10mL1.0%的氧化鎂溶液，不起泡的動物源性飼料不加防泡劑，而易起泡的動物源性飼料產(chǎn)品，例如血漿、血球、血粉等必須滴加1g固體（或0.5ml液體）防暴劑，在入口處加水封好，防止漏氣，蒸餾4min，使冷凝管末端離開吸收液面，再蒸餾1min，用蒸餾水洗冷凝管末端，洗液均流入吸收液。-蒸餾。吸收氨后的吸收液立即用0.01mol/L鹽酸標(biāo)準液滴定，溶液由藍綠色變?yōu)榛壹t色為終點，同時進行試劑空白測定。-結(jié)果的計算揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量以（mg/100g）表示。3=［（V1-V2）*C*14/（M*0.1）］*100式中：3:樣品揮發(fā)性鹽基氮的含量mg/100g；1——滴定試樣時所需鹽酸標(biāo)準溶液體積，mL；2——滴定空白時所需鹽酸標(biāo)準溶液體積，mL；C——鹽酸標(biāo)準溶液濃度，mol/L；m：試樣重量，g；14：與1.00mL鹽酸標(biāo)準滴定溶液［c（HCl）=1.000mol/L］相當(dāng)?shù)牡馁|(zhì)量，mg。4、結(jié)果與討論4.1不同試樣制備方式對檢測結(jié)果的影響4.1.1不同粉碎粒度試樣對測試結(jié)果的影響分別取未粉碎的魚粉試樣，粉碎至40目、60目的魚粉試樣，按3的分析測試步驟進行分析，每種處理情況測試5次，測試結(jié)果見表1。表1不同粉碎粒度、不同試樣處理方式對測定結(jié)果的影響

項目振蕩30min處理高速勻漿機10min處理未粉碎40目60目未粉碎40目60目150.1215.7225.3215.4220.3224.5148.3221.4219.8214.8219.8221.3揮發(fā)性鹽基氮,mg/100g152.4217.9220.8217.5220.8223.2147.5218.5223.4216.8217.5222.6153.4220.1221.3219.7222.6219.9平均值，mg/100g150.3217.7223.5216.8220.2222.3根據(jù)單因子方差分析，在（a<0.05），未粉碎處理的樣品與粉碎至40目和60目樣品存在顯著差異；而粉碎至40目和60目樣品處理差異不顯著。4.1.2不同試樣處理方式對測試結(jié)果的影響分別取未粉碎和已粉碎40目、60目魚粉試樣用高速勻漿機勻漿10分鐘，按3的分析測試步驟進行分析，測試結(jié)果見下表1。根據(jù)單因子方差分析，在（a<0.05），三種處理方式差異不顯著。4.2本方法的重復(fù)性分別取魚粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、血粉、膨化血粉等樣品，每個樣品測定6次，計算其標(biāo)準偏差及變異系數(shù)，結(jié)果見表2。表2不同試樣揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量測定的重復(fù)性測定值，mg/100g平均值mg/100g標(biāo)準偏差變異系數(shù)（%）魚粉215.7,221.4,217.9,218.5,220.1217.72.1751.00血球蛋白粉1#17.5,18.3,16.9,17.7,18.517.780.6423.61血球蛋白粉2#101.5,103.7,104.8,102.4,105.2103.51.5671.51血漿蛋白粉1#15.2,13.9,14.6,15.6,16.115.080.8585.69血粉554.7,537.1,547.0,558.3,571.3553.6812.7712.31膨化血粉2215.2,2240.5,2198.7,2207.3,2168.92206.1226.0111.184.3本方法的回收率

在以上魚粉、血球蛋白粉中，按一定濃度的（NH4）2SO4溶液，按本方法進行測試，每個梯度重復(fù)測定五次，結(jié)果見表3。4.4本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準的分析方法》半微量定氮法的比較。4.4.1本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準的分析方法》適用范圍的比較。本方法適用所有的動物源性飼料產(chǎn)品的揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量的測定；GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準的分析方法》半微量定氮法適用與魚粉、肉粉等不起泡的產(chǎn)品TVBN測定；微量擴散法適用低含量所有產(chǎn)品的TVBN測定，但測定時間較長，方法較半微量定氮法煩瑣。4.4.2本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準的分析方法》測定結(jié)果的比較。分別取魚粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、血粉、膨化血粉等樣品，根據(jù)各方法的適用范圍采用相應(yīng)的方法測定揮發(fā)性鹽基氮（TVBN）含量，測定結(jié)果見表5。5、結(jié)論本試驗建立了動物源性飼料產(chǎn)品中揮發(fā)性鹽基氮的含量的測定方法，該法建立動物源性飼料產(chǎn)品樣品處理、采用半微量蒸餾法直接測定氮含量，普通飼料企業(yè)常規(guī)質(zhì)量檢測條件下可以滿足，具有提取效率高、易于操作等特點。通過研究表明：樣品經(jīng)粉碎處理，平均回收率可達98%以上。該法針對幾種常見的動物源性飼料揮發(fā)性鹽基氮的含量測定設(shè)計，與國標(biāo)法相比具有處理簡便、回收率高的特點，同時具有重現(xiàn)性好、精密度高、操作簡便、省時等優(yōu)點。表3方法的回收率（n=5）加入量測得均值平均回收率（%）魚粉50.0267.399.20100.0315.998.20血球蛋白粉2#50.0153.6100.20100.0203.399.80表4本方法與GB/T5009.44-2003《肉與肉制品衛(wèi)生標(biāo)準的分析方法》適用范圍的比較方法適用范圍不適用范圍魚粉、肉粉、血粉、血球本方法蛋白粉、血漿蛋白粉、膨無化血粉等GB/T5009.44-2003半微量定氮

法魚粉、肉粉等不起泡產(chǎn)品微量擴散法魚粉、肉粉、血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、膨化血粉等膨化血粉等高TVBN含量產(chǎn)品GB/T5009.44-2003半微量定氮

法魚粉、肉粉等不起泡產(chǎn)品微量擴散法魚粉、肉粉、血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉血粉、血球蛋白粉、血漿蛋白粉、膨化血粉等膨化血粉等高TVBN含量產(chǎn)品本方法（n=5）GB/T5009.44-