考馬斯亮藍法測定蘋果組織

微量可溶性蛋白含量級化學生物學

吳凡郭夢雨比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第1頁1

實驗準備2實驗實施3結果分析4結論2比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第2頁試驗準備

果蔬可溶性蛋白質含量是果蔬品質和營養(yǎng)主要評價指標之一。許多可溶性蛋白是構結果蔬中酶主要組成部分，參加果蔬各種生理生化代謝過程調控。所以，果蔬組織可溶性蛋白含量測定就顯得尤為主要。3比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第3頁試驗準備試驗原理

考馬斯亮藍G-250在酸性游離狀態(tài)下時最大光吸收在465nm，當它與蛋白質結合后變?yōu)樗{色，最大光吸收在595nm。

在一定蛋白質濃度范圍內，蛋白質-染料復合物在波長為595nm處光吸收與蛋白質含量成正比，經過測定595nm處光吸收增加量可知與其結合蛋白質量。4比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第4頁試驗準備試驗原理5比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第5頁試驗準備

考馬斯亮藍法優(yōu)點：靈敏度高；測定快速、簡便，只需加一個試劑；干擾物質少缺點：去污劑、、十二烷基硫酸鈉等干擾測定；標準曲線有輕微非線性6比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第6頁試驗實施主要儀器及試劑：分光光度計；電子天平;容量瓶

25ml十個；50ml

燒杯2個；BSA新鮮蘋果；Tris、外援添加物等7比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第7頁試驗實施(1)試劑配制：·標準蛋白溶液制備：配制100μg/mLBSA溶液·提取緩沖溶液：pH

7.2、7.4、7.6、7.8、8.0、8.2、8.4、8.6、8.8和9.0梯度Tris-HCl緩沖液(100mmol/L)·梯度濃度Tris-HCl緩沖液(pH9.0)：10、30、50、80、100mmol/L·外援添加物：EDTA(1mmol/L)、PVP(1g/100mL)、NaCl(0.15mol/L)、抗壞血酸(2mmol/L)、MgCl2(0.5mmol/L)、、半胱氨酸(2mmol/L)、β-巰基乙醇(2%，V/V)8比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第8頁試驗實施（2）試驗操作步驟稱取蘋果果肉1g加入不一樣緩沖液5mL，研磨離心，取上清液8mL低溫保留

9比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第9頁試驗實施試驗操作步驟開啟分光光度計，預熱20分鐘標準溶液吸光度測定標準曲線繪制

待測液測定

10比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第10頁結果分析表一：不一樣吸光度值對應BSA含量BSA含量μg020406080100吸光度A00.1440.2680.3660.4470.541線性回歸率為0.9990，線性方程y=186.33X-4.8440

。11比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第11頁結果分析不一樣緩沖體系對可溶性蛋白提取效果影響1.不一樣緩沖液及其pH1-11分別代表水、pH為7.2、7.4、7.6、7.8、8.0、8.2、8.4、8.6、8.8、9.0Tris-HCl緩沖溶液12比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第12頁結果分析2.不一樣濃度1-6分別表示濃度為0、10、30、50、80、100mmol/LpH為9.0Tris-HCl緩沖溶液13比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第13頁結果分析3.不一樣外援添加物A-J分別代表抗壞血酸、半胱氨酸、EDTA、PVP、β-巰基乙醇、NaCl、MgCl2、PVP＋β-巰基乙醇、PVP＋EDTA、EDTA＋PVP＋β-巰基乙醇14比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第14頁結果分析蘋果組織可溶性蛋白質含量測定項目吸光度蛋白含量μg蛋白含量%平均值%10.26043.6034.8834.9320.26344.1635.3330.25843.2334.5815比色法測定蘋果中可溶蛋白質含量專家講座第15頁結論

試驗最終確定適合用于蘋果果實可溶性蛋白含量測定提取條件為，0.1mol/L,pH